甘蓝与萝卜属间杂交及其胚挽救技术优化

以甘蓝显性雄性不育系C08-11为母本，以萝卜自交系Q07-12为父本进行属间杂交，对杂交子房和胚珠进行离体培养，筛选适合甘蓝与萝卜属间杂种胚挽救的适宜取材时间、培养基及外源添加物。结果表明，胚珠培养优于子房培养；所有处理子房培养仅获得3株杂交苗，取材时间以授粉后第9天为宜，B5培养基中添加合适的生长调节剂、水解酪蛋白和活性炭为子房培养所必需；胚珠培养各处理共获得29株杂交苗，适宜取材时间为蕾期授粉后第14天、花期授粉后第16天，对生长调节剂的需求取决于不同取材时期及培养基。     

大白菜和羽衣甘蓝种间杂交研究

以改良萝卜胞质不育大白菜为母本 ,以甘蓝型油菜为桥梁种进行杂交 ,获得了较多的种间CMS杂种 ;又以此种间CMS杂种为母本 ,以 7个羽衣甘蓝品种为父本进行第 2次杂交 ,平均亲和指数仅为 0 .0 0 1;采用离体胚培养 ,使 14d胚龄第 2次种间杂合幼胚在MS +BA 2mg·L-1+NAA 0 .0 5mg·L-1+蔗糖 30g·L-1的培养基上发育成小植株。     

无核葡萄胚挽救畸形苗发生及转变正常植株的研究

【目的】探究胚挽救无核葡萄畸形苗发生原因及转变成正常葡萄试管苗的方法,提高无核葡萄胚挽救育种效率。【方法】‘无核白’(‘Thompson seedless grape’)、‘火焰无核’(‘Flame seedless grape’)、‘赫什无核’(‘Heshi seedless grape’)及‘红宝石无核’(‘Ruby seedless grape’)自交以及和不同父本杂交后进行胚挽救,研究不同亲本基因型和不同胚萌发培养基对胚挽救畸形苗产生的影响。通过不同培养基及培养方式离体培养胚挽救畸形苗,进一步研究胚挽救畸形苗转变成正常葡萄试管苗的方法。【结果】‘无核白’和‘赫什无核’作母本,用MS培养基培养易产生胚挽救畸形苗。畸形胚萌发苗可总结为5大类:白化苗、玻璃化苗、徒长苗、子叶扭曲无根苗和无生长点的有根苗。转接在WPM+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+IAA 2.0 mg·L~(-1)+琼脂6 g·L~(-1)+蔗糖20 g·L~(-1)+活性炭2.0 g·L~(-1)培养基上培养,每隔14 d进行继代转接,将畸形苗转变成正常葡萄试管苗效果较好。【结论】无核葡萄胚挽救产生的畸形苗及时转接到不同培养基上或者采取合适方式进行继代培养,可以将胚挽救畸形苗转变成正常葡萄试管苗。     

大白菜与羽衣甘蓝杂交胚的发育及其离体培养

改良Ogura胞质大白菜与羽衣甘蓝的种间杂合胚胎存在明显发育障碍,败育始于球形胚阶段,表现为胚乳细胞化及过度增生;而对照大白菜与甘蓝型油菜杂合胚胎发育至早心形期胚乳仍呈游离核状态。大白菜与羽衣甘蓝杂合胚珠离体培养的有效取材时间为授粉后6～17d,其中9～11d最佳。液体振荡培养可显著促进胚珠离体成苗,花器等营养添加物未见明显效果。     

芥蓝和结球甘蓝分别与甘蓝型油菜杂交的后代结实性及Rfo传递效率比较

为明确甘蓝与甘蓝型油菜种间杂交的生殖隔离程度是否与甘蓝的变种类型有关,以2份Ogura CMS芥蓝和4份Ogura CMS结球甘蓝为母本,分别与2份含有Ogura CMS育性恢复基因Rfo的甘蓝型油菜杂交,获得的种间杂种加倍后,再分别与母本芥蓝和结球甘蓝回交,调查F1、BC1两个世代材料的结实性和Rfo基因的传递效率。结果表明,芥蓝与甘蓝型油菜种间杂交F1代、BC1代的亲和指数都显著高于结球甘蓝（P < 0.05）,是结球甘蓝的2倍以上,且在芥蓝材料中Rfo基因的传递效率高于结球甘蓝。进一步比较BC1回交后代Rfo阳性单株的育性、遗传背景回复率,芥蓝的育性大多显著好于结球甘蓝（P < 0.05）,26株BC1单株遗传背景回复率在0.50 ~ 0.84之间;而结球甘蓝两个BC1单株（15Y1和15Y4）遗传背景回复率分别为0.53和0.59。上述结果说明,芥蓝较结球甘蓝更易与甘蓝型油菜杂交获得后代,且异源目的片段的传递效率更高,因此芥蓝可作为结球甘蓝与甘蓝型油菜杂交的桥梁材料,加速甘蓝型油菜中优异性状的转育进程。     

抗病抗寒无核葡萄胚挽救研究

【目的】为了培育抗病抗寒无核葡萄新品种,【方法】以2个种子败育型无核品种‘波尔莱特’、‘红无籽露’作母本,以抗病抗寒的中国野生山葡萄株系‘黑龙江实生’、‘双优’及欧山杂种‘北醇’、‘00-1-10’(‘玫瑰香’ב黑龙江实生’)分别作父本杂交,授粉51 d后将胚珠分别接种于ER和MM4培养基上进行胚挽救,培养60 d后在WPM+BA 0.2 mg.L-1培养基上诱导成苗。【结果】结果表明,2个母本品种胚挽救的适宜培养基不同,‘波尔莱特’作母本适合于ER培养基,‘红无籽露’作母本适合于MM4培养基。2个母本基因型对胚珠的发育率和成苗率的影响差异不大,‘波尔莱特’略优于‘红无籽露’;但4个父本基因型对胚挽救效果影响较大,以欧山杂种‘00-1-10’和‘北醇’作父本的杂交组合胚株的发育率和成苗率明显高于山葡萄‘黑龙江实生’、‘双优’作父本的杂交组合。共获得无核葡萄胚挽救新种质50个株系。【结论】在胚挽救过程中,不同基因型的无核葡萄适宜于不同的基本培养基,欧山杂种比山葡萄更适宜于作杂交的父本。     

葡萄不同倍性品种的杂种胚挽救及鉴定

以二倍体葡萄为母本,与四倍体葡萄杂交,杂种进行胚珠培养,获得三倍体植株.胚珠培养胚萌发率最高可达39.21%,成苗率最高可达35.32%.先用细胞倍性测定仪初选,再用卡宝品红染色法根尖计数染色体为57条.不同组合取样时期可确定为:早熟母本为花后40～50 d内,中熟品种为50～60 d,晚熟品种则为60～80 d.     

6-BA对抗寒无核葡萄胚挽救的影响

【目的】探讨提高抗寒无核葡萄胚挽救育种效率的方法。【方法】以4个种子败育型无核葡萄品种‘火焰无核’‘海王星’‘木星’和‘红宝石无核’为母本,欧山杂种(品种)‘北醇’为父本进行杂交,将杂交胚珠接种于添加不同质量浓度6-BA的MM3+500 mg·L-1水解酪蛋白(CH)+1 mmol·L-1丝氨酸(Ser)培养基上进行培养。【结果】除‘海王星’ב北醇’外,供试的其他杂交组合均在添加6-BA质量浓度为0.5 mg·L-1时,胚珠发育率、萌发率和成苗率最高,差异达到显著水平;当6-BA的质量浓度为1.0 mg·L-1时,对胚挽救效率具一定程度的促进作用或作用不显著;当6-BA的质量浓度为1.5 mg·L-1时,对‘火焰无核’ב北醇’‘木星’ב北醇’‘海王星’ב北醇’杂交后代胚的成苗起到一定程度的抑制作用。【结论】不同的杂交组合对不同质量浓度6-BA的敏感程度不同,0.5 mg·L-16-BA能够提高无核葡萄胚挽救效率;首次选用的抗寒无核品种‘木星’和‘海王星’均可作为无核葡萄胚挽救育种的母本。     

紫香无核胚培养技术研究

以紫香无核为母本,黎明无核、克瑞森无核、京早晶分别为父本杂交,对杂交胚珠进行培养挽救。结果表明:在授粉后52d接种,3个杂交组合的胚珠均达到最大发育率和最大萌发率;胚珠发育阶段采用ER培养基培养的发育率比用Nitsch培养基的高,但在Nitsch接种的萌发率却比ER的都高;低温(7℃)处理的胚萌发率高于常温(24℃)培养的萌发率。     

早熟和特早熟桃胚珠培养研究

本文以自然授粉的‘春蕾’、‘沪017’、‘布目早生’、‘1-4-8’、‘7-6-9’的胚珠为试材,研究了早熟和特早熟桃胚珠培养胚成苗的有关影响因素。本试验5个品种(品系)的结果表明,桃品种或品系的果实生育期愈短,胚珠培养胚的成苗率愈高,特早熟桃‘春蕾’花后48天的胚珠培养在改良S H培养基附加BA1.0mg/1 IAA1.0mg/1上30天,将长大的幼胚转移至TM培养基上,胚的成苗率达75％。此外,作者对胚珠培养技术在桃育种中的应用范围及其培养程序开展了讨论。     

红芽芋脱毒试管芋诱导及植株再生

为解决红芽芋脱毒苗移栽成活率低、种苗易分化等问题，以江西地方名优芋品种‘铅山红芽芋’为材料，开展茎尖脱毒、试管芋诱导及植株再生的研究。结果表明，芋芽剥取0.2 ~ 1.0 mm茎尖接种于MS + 2.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 3%蔗糖培养基中可诱导成苗；通过RT-PCR分子检测，0.3 mm以下茎尖培养的试管苗中未发现芋花叶病毒（DsMV）；脱毒苗继代增殖最佳诱导培养基为MS + 3.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 3%蔗糖，脱毒苗试管芋诱导的最佳培养基为MS + 1.0 mg • L-1 6-BA + 0.5 mg • L-1 NAA + 8%蔗糖，最佳培养条件为温度25 ℃，光照54 μmol • m-2 • s-1，光周期14 h • d-1；脱毒试管芋的最佳移栽驯化基质为草炭︰蛭石 = 2︰1；脱毒试管芋移栽后，成活率达97.71%，生长中未出现分化现象。脱毒芋相比未脱毒芋增产43.14%，营养品质指标存在显著差异。脱毒试管芋的诱导形成及植株再生体系的建立为红芽芋健康种苗的快速繁殖提供了一条新途径。     

嘉定白蒜脱毒微鳞茎诱导的快繁技术研究

以嘉定白蒜为试材，研究了不同茎尖脱毒方法与不同外植体启动培养基对嘉定白蒜无菌苗建立与脱毒率的影响、不 同增殖培养基与切割方式对潜伏芽激活与增殖的影响，以及组培苗分株等级标准与培养基配方对诱导组培微鳞茎形成的影 响。结果显示：带1 个叶原基的茎尖，在MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1 的培养基上成苗率高，达76%；采用单株 假茎去顶后，取其基部1.0 cm 假茎茎段，再沿中轴线对半纵切的方式，在MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.10 mg·L^-1 的培养基 上能较好地激活叶腋潜伏芽，增殖倍数达3.22；1 个叶原基包裹的芽原基茎尖脱毒成效最好，达100%；假茎茎粗3 mm 的组 培苗单株，在MS+NAA 0.1 mg·L^-1+ 糖90 g·L^-1、pH 为7.0 的培养基中微鳞茎诱导率最高，达94.8%。茎尖脱毒方式、叶腋 潜伏芽激活切割方式和组培微鳞茎诱导的培养基配方，是嘉定白蒜脱毒与快繁的技术关键。     

褪黑素对‘无核白’葡萄体细胞胚的诱导作用

以欧洲葡萄‘无核白’（Vitis vinifera‘Thompson Seedless’）未开放的小花蕾为外植体，研究0、1.0、2.0、3.0 mg ? L-1褪黑素（Melatonin）对其体细胞胚的诱导效果。结果表明：‘无核白’小花蕾在 MS + 1.0 ~ 3.0 mg ? L-1 褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 3 g ? L-1植物凝胶的培养基上继代培养30 d时愈伤组织诱导率较好，为73.67% ~ 89.10%，显著高于2,4-D处理，愈伤组织形成所用时间较2,4-D处理缩短了14 d。愈伤组织诱导120 d时，不同浓度褪黑素均出现体细胞胚，其中，以MS + 1.0 mg ? L-1褪黑素 + 2.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖的培养基体细胞胚的发生率最高，180 d时达12.05%。体胚在 MS + 60 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的X6培养基中萌发30 d后，将萌发的子叶胚转移至MS + 0.2 mg ? L-1 6-BA + 0.1 mg ? L-1 NOA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 0.5 g ? L-1活性炭的成苗培养基上，其中，1.0 mg ? L-1褪黑素诱导产生的体胚发育正常的数量较多，为14.84%。不同浓度褪黑素处理的体胚诱导率均于180 d后增长较快，且低浓度的褪黑素有利于体胚萌发与正常发育，2,4-D诱导的愈伤组织无体胚形成。     

白菜和芜菁Ogura型雄性不育系与保持系的获得及其细胞学观察

 通过甘蓝型油菜Ogura细胞质雄性不育材料与白菜、芜菁的种问杂交和连续回交，获得了不育性稳定的白菜、芜菁Ogura细胞质雄性不育系‘新选Ogu284’、‘矮脚黄Ogu33．14’和‘耐病 “18_4’及其相应的保持系。细胞形态学研究表明：虽然这3个不育系核背景不同，但花药败育时朗基本相同．均具有单核败育型的特征；小孢子到单核期后不再向前继续发育，而是迅速退化以至解体，丁F花前彻底败育；不育系的花药在减数分裂早期绒毡层细胞中已出现液泡．有肥大趋势，而正常花药绒毡 的发育在减数分裂过程中达到高峰，四分体时出现退化迹象，开花前完全解体。不同的Ogura细胞质雄性 育系，虽然核背景不同，但花药败育的时期基本相同，说明Og．ra CMS胞质互作关系稳定，受核背景影响小     

大白菜、青花菜和叶用芥菜体细胞杂交种形态学与细胞学特性鉴定

 为拓宽十字花科蔬菜育种种质资源,以大白菜（Brassica campestris L. ssp. pekinensis）、青花菜（B. oleracea L. var. varitalica）和叶用芥菜（B. juncea L. Czern）的子叶、下胚轴为材料,分离、纯化原生质体,采用40% 聚乙二醇（Polyethylene glycol,PEG）融合法进行原生质体融合。融合细胞在附加0.2 mg · L^-1 2,4-D + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.1 mg · L^-1 NAA + 0.1 mg · L^-1 激动素（kinetin）的改良K8p培养基中液体培养,当细胞分裂至8 ~ 10细胞期时,将分裂的细胞包埋于0.15%琼脂糖,然后在添加0.3 mol · L^-1蔗糖和2 mg · L^-1 6-BA + 2 mg · L^-1 玉米素（zeatin）+ 1 mg · L^-1 NAA + 0.5 mg · L^-1 kinetin的Kao培养基中诱导愈伤组织。将培养获得的936个愈伤组织转到3种不定芽诱导培养基MS + 5 mg ? L-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 2 mg · L^-1 zeatin + 2 mg · L^-1 IAA;MS + 0.5 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 NAA上诱导芽分化,当芽长3 cm左右时,转到1/2 MS + 0.2 mg · L^-1 NAA的生根培养基上诱导生根,共获得了96株再生植株,对其进行形态学、细胞学和分子生物学鉴定。形态学观察显示再生植株表型变化大,包括3个亲本的中间型或两个亲本的中间型;PCR技术鉴定结果显示96株杂种植株中93株为细胞质雄性不育特性;染色体计数显示,再生的植株染色体数变化范围广（2n = 38 ~ 64）,但未发现染色体数总和与3种融合亲本染色体数总数（2n = 74）相一致的个体。基因组原位杂交（Genomic in situ hybridization,GISH）和扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism,AFLP）分析结果表明,再生植株基因组中分别检测出大白菜、青花菜、叶用芥菜的DNA片段,证实了大白菜、青花菜、叶用芥菜种间体细胞杂交种的真实性。     

分子标记辅助选育萝卜雄性不育系

利用Ogura CMS不育基因orf138特异标记及细胞核育性恢复基因Rfo的KASP标记,在苗期对6个可育的中国水果萝卜育性基因型进行鉴定。结果表明:6个水果萝卜的细胞质均为正常可育胞质。细胞核育性恢复基因Rfo的基因型在不同单株间存在差异,所鉴定的60个单株中,基因型rfrf、Rfrf、Rf Rf分别占40.0%、33.3%和26.7%。以日本白萝卜品种献夏37为不育源,选择具有rfrf基因型的单株与不育源进行杂交与回交,经过5代的回交及父本自交,获得4个不育率100%、遗传稳定、整齐度高的绿皮绿肉水果萝卜雄性不育系及保持系。利用这些雄性不育系配制杂交组合,获得7个优良的杂交组合。分子标记辅助选育萝卜雄性不育系,避免配制大量杂交组合及田间育性鉴定,提高了选择效率与精准度。     

黑萝卜胞质类型的分子鉴定与育种利用

萝卜胞质类型鉴定是杂种优势利用的前提.以NWB/DCGMS CMS及Ogura CMS两个萝卜细胞质雄性不育特异基因设计引物,对3份黑萝卜材料进行胞质类型鉴定.结果表明,3份可育黑萝卜资源均含有NWB/DC-GMS CMS不育主控基因orf463,利用3份黑萝卜为母本与其他萝卜构建的F2代遗传群体表现出育性分离现象,根...     

洋葱T型细胞质雄性不育与花蕾ATP含量的关系

以洋葱T型细胞质雄性不育系8-43A、保持系8-43B和恢复系8-43-57C为试材,采用萤火虫荧光素酶检测技术,分析花蕾不同发育时期三磷酸腺苷(ATP)的含量变化,研究洋葱T型细胞质雄性不育与花蕾ATP含量的关系。结果表明:在整个花药发育过程中的各个阶段,保持系和恢复系的花蕾之间ATP含量均无显著差异,不育系花蕾ATP含量均极显著低于保持系和恢复系,尤其在花粉粒成熟早期,仅为保持系和恢复系的1%;花粉粒成熟早期,不育系花蕾ATP含量下降到不足四分体时期的1/10,说明花药发育通过单核期后耗费了组织内大量的ATP,更重要的是ATP的产生可能出现了障碍;洋葱T型细胞质雄性不育系花蕾ATP含量极显著低于各时期的可育株,可能是导致其雄性不育的原因。     

樱桃不同基因型再生植株的比较

对甜樱桃(PrunusaviumL.)、杂种优系F系(P.avium L.×P.pseudocerasusL.)和H系(P.cerasus L× P.pseu-docerasusL.)等不同基因型的离体再生植株方式进行了比较研究。结果表明,不同遗传背景的樱桃试材,其再生方式和途径存在差异。其中甜樱桃品种美早的离体叶片在WPM+6-BA2.0mg·L-1+IAA2.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1培养基上,不定芽再生率可达到90%,H10、萨米脱、F10、F8在6-BA(2～2.5mg·L-1)、IAA(1.0～2.0mg·L-1)的激素配比,也获得了76%、86%、80%、64%的再生率;杂种H10叶柄接种于改良MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1的培养基,可以得到40%的再生率,其他品种仅有H8的叶柄获得了少量的再生植株;杂种F10的幼嫩节间接种于LS+6-BA1.0mg·L-1+NAA2.0mg·L-1+CH100mg·L-1培养基,最高再生率为40%,6-BA(1～2mg·L-1)和NAA(1～2mg·L-1)配比,H8、H10的离体节间再生率最高分别为25%和30%;杂种H8整体根在MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的培养基上,再生率为96.7%,6-BA(0.5～2mg·L-1)和2,4-D(0.5～2.0mg·L-1)配比,H10、F8、F10离体根再生率分别为93.3%、96.7%和93.3%。