白花树花粉生活力检测方法与贮藏特性研究

以江西吉水种源的白花树花粉为研究材料,进行了扫描电子显微镜下的花粉形态结构观察以及采用离体培养基法、I₂-KI和TTC染色等花粉生活力测定方法的比较研究,探讨了不同贮藏条件对花粉萌发的影响。研究结果表明：白花树花粉粒为长球型,具3孔沟,外壁面具细网状纹饰;花粉平均极轴长52.33±0.577 μm,平均赤道轴长26.89±0.502 μm;3种花粉生活力测定方法中以离体培养基法最有效,花粉萌发的最佳组合为：10%蔗糖+0.05 g·L^-1硼酸+100 mg·L^-1 GA₃+3 h;花粉最佳贮藏条件为-80 ℃密封保存,贮藏180 d后花粉的萌发率仍可达40.97%。     

蓖麻离体培养体系的建立

为建立蓖麻的离体培养体系,以其无菌发芽的种子苗为材料,切取其根、茎、叶及顶芽为外植体,探讨不同诱导途径中不同生长调节剂对愈伤组织诱导、愈伤组织分化、不定芽诱导及腋芽增殖的影响。结果表明:(1)去种皮后消毒种子的萌发率最高,萌发所需时间最短,染菌率也低;筛选出种子萌发适宜培养基为MS 0;(2)器官发生型诱导途径中,诱导愈伤组织最适的培养基为MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,其中以茎为外植体诱导率最高,可达90%,但愈伤组织的分化较困难;(3)器官型诱导途径中,叶基、叶脉处能直接诱导不定芽,最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+2,4-D 1 mg/L;(4)顶芽诱导腋芽增殖的效果最佳(51个芽/外植体),最适培养基为MS+6-BA 2 mg/L+TDZ 1 mg/L;(5)生根最适培养基为位1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。     

多花黄精嫩茎与根茎芽离体培养技术

为给黄精规模化栽培提供可行的关键技术,利用江西分宜大岗山山区选育出的优良野生多花黄精嫩茎和根茎芽为试验材料,开展芽增殖离体组织培养试验,研究多花黄精的最佳灭菌方法、最佳外植体取材部位、最适基本培养基和最佳激素及质量浓度。试验结果表明:先用75%的酒精表面灭菌30 s,再用0.1%的氯化汞深层灭菌10 min,灭菌效果较好,外植体材料无菌保存率可达73.2%;最适基本培养基为MS培养基;最佳外植体选材部位为带芽根茎;最佳不定芽诱导培养基为MS+NAA1.5 mg/L+KT1.5 mg/L,平均每个根茎芽能诱导6.6个不定芽。     

色木槭芽直接增殖途径的培养条件

为建立色木槭芽直接增殖的诱导培养体系,以色木槭野生树木休眠芽萌发枝条为材料,进行芽增殖的培养条件研究。结果表明,4月份是适宜休眠芽培养的取材时期。嫩茎在2%次氯酸钠浸泡20 min是最佳消毒方案。NAA浓度对休眠芽萌发和嫩茎生长的影响具有显著差异。MS+0.1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖(pH5.8)是适合休眠芽萌发和嫩茎伸长的培养基。培养30天时,腋芽萌发率可达63.3%,嫩茎平均高度可达15.9 mm。6-BA对芽直接增殖的促进效果好于KT。不同激素组合中,IBA与6-BA组合对芽增殖和丛生芽生长的效果好于NAA与6-BA组合、NAA与KT组合、IBA与KT组合。MS+0.1 mg/L IBA+1 mg/L 6-BA+20 g/L蔗糖是适合芽增殖和丛生芽生长的培养基。培养30天时,芽增殖率可达90%,增殖倍数可达3.19,且茎芽生长正常。     

欧美杨渤丰1号高效组培再生体系建立

与白杨派树种相比,黑杨派树种一直因组培再生困难而限制了其在林木基因工程研究中的应用。本文以欧美杨优良新品种——渤丰1号为试验材料,以其再生培养基中的植物生长调节剂配比、铜离子浓度、光照强度、卡那霉素选择压等方面为切入点开展研究,建立了渤丰1号杨高效组培再生体系。使用该再生体系时,外植体的分化率和生根率均达100%,叶片的平均分化芽数多达20个以上,组培苗移植成活率可达98%,40 mg·L^-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨叶片的诱导与分化,20 mg·L^-1卡那霉素可以抑制渤丰1号杨不定芽的生根;同时发现铜(Cu)元素是渤丰1号杨外植体分化再生的一个关键因素,增加Cu²⁺浓度能显著促进不定芽的诱导和分化。     

杂交构树茎段组培快繁体系的建立

通过对杂交构树茎段的离体培养和繁殖,探讨了杂交构树茎段萌发、分化、不定芽生长分化及生根的最佳培养基。结果表明:以优良母株的具腋芽茎段为外植体,经0.1%HgCl2灭菌12 min,成活发芽率达44%;适宜杂交构树侧芽诱导的培养基为MS+6-BA1.0 mg.L-1+NAA0.1 mg.L-1,诱导分化率为94.4%;适宜试管苗增殖和生长的培养基为MS+6-BA1.0 mg.L-1+GA0.2 mg.L-1,不定芽平均分化系数为3.3,平均苗高2.83 cm;在壮苗生根过程中最适培养基为1/2 MS+NAA0.3 mg.L-1+IBA0.5 mg.L-1+6-BA0.01 mg.L-1和1/2 MS+NAA0.5 mg.L-1+IBA0.1 mg.L-1+6-BA0.01mg.L-1,生根率均高达100%。     

金丝吊蝴蝶腋芽离体繁殖再生体系的建立

为建立金丝吊蝴蝶离体快繁再生体系,以金丝吊蝴蝶带顶芽或腋芽茎段为外植体进行离体培养,探讨外植体类型、消毒方法、基本培养基种类和不同激素浓度对腋芽萌发、增殖、生长的影响,结果表明:4月初取未木质化的萌发茎段诱导萌发率高、消毒效果好、污染率低;腋芽离体萌发和增殖培养最适培养基组合为:MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.2mg·L^-1,增殖系数为2。生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg·L^-1生根效果较好。移栽5d后生长良好,成活率达到90%以上。     

野生唐古特白刺悬浮细胞系的建立及生长特性

以野生唐古特白刺的茎段、叶片为外植体,研究了NaClO对外植体的消毒效果和激素2,4-D、NAA和6-BA对愈伤组织诱导及愈伤组织形态的影响,并利用疏松型愈伤组织建立了白刺悬浮细胞系,对其生长特征进行了分析。结果表明:对茎段和叶片用2%的NaClO消毒10 min最适宜,时间过长或过短均会影响成活率;3种激素对愈伤组织的相对生长量和形态均有影响,其中,2,4-D是主要影响因子,且茎段诱导出的愈伤组织相对生长量比叶片的高;根据愈伤组织的生长速度和形态,适宜用浅黄色疏松型愈伤组织构建唐古特白刺悬浮细胞系,最佳试验组合为MS+2,4-D 1.5 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1+6-BA 0.4 mg·L^-1,最佳继代接种量为7.5 mL母液,生长曲线呈"S"型,培养第7天细胞分裂指数达最大值(5.1%),培养第3天细胞活力最强(吸光值为0.69),存活率在细胞生长延迟期和稳定期较对数期下降略快,但均保持在84% 93%间。     

紫娇花组织培养中愈伤组织的诱导及植株再生

紫娇花种子经灭菌处理后,于试管内培养基中萌发,取幼苗的下胚轴、子叶,进行愈伤组织的诱导、不定芽的分化及试管苗生根技术的研究。结果显示,紫娇花种子最佳灭菌方式为0.1%升汞浸泡10 min,污染率可控制在37.0%,萌芽率达到86.3%;愈伤组织最适诱导部位为下胚轴,愈伤组织诱导最佳培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D,诱导率达到83.7%;紫娇花不定芽分化的最适培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,不定芽分化率为48.0%;最适生根培养基为1/4 MS+0.1 mg/L NAA+0.5%AC,生根率可接近100%。     

黄樟茎段离体培养体系的建立

以黄樟秋稍带腋芽茎段为外植体,建立并优化了黄樟组培繁育体系,研究基本培养基、不同激素及配比对黄樟茎段不定芽诱导、组培苗增殖及生根的影响。结果表明:黄樟带腋芽茎段最佳启动培养基配方为改良MS+4.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,在此培养基中不定芽培养7 d开始萌动,诱导率可达76.67%;不定芽继代培养基的最适宜配方为改良MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,在此培养基中不定芽生长健壮,增殖系数为3.78;幼苗生根培养基的最适宜配方为改良1/2 MS+0.5 mg/L IBA+0.5 mg/L IAA,在此培养基中幼苗培养13 d开始发根,生根率达85.56%。上述组织培养技术条件,可有效提高黄樟茎段的不定芽诱导率和生根率,为黄樟优良品系的工业化育苗奠定了基础。     

卷荚相思组培快繁技术研究

[目的]建立16年生卷荚相思优树组培快繁技术体系。[方法]以16年生卷荚相思优树的当年新生枝条带腋芽茎段为材料,对卷荚相思外植体进行消毒、初代培养、增殖培养、生根培养和移植等。[结果]表明:通过对16年生卷荚相思成年优树采条进行扦插,以扦插苗建立采穗圃,选取采穗圃中当年生健康无病虫害枝条的中段为外植体,最佳消毒方式为75%的酒精处理0.5 min和0.1%的升汞处理18 min,其存活率达69.33%,芽诱导率达86.67%;最佳初代培养基为改良MS+蔗糖40 g·L-1,出芽率为91.33%。最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1,35 d增殖倍数可达3.50倍;最佳生根培养基为1/2 MS+IBA 0.25 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1,15 d生根率为96.11%;将生根苗移植至以沙为基质的营养杯中,存活率为71.11%。[结论]研究解决了16年生卷荚相思成年优树外植体污染率高和芽诱导率低等问题,建立的组培快繁技术体系对今后加快卷荚相思良种选育及优质苗木大量扩繁具有重要作用。     

蒙古沙冬青子叶节诱导培养再生植株的研究

[目的]建立蒙古沙冬青子叶节丛生芽再生体系。[方法]以蒙古沙冬青子叶节为外植体,研究种子萌发培养基中6-BA浓度、子叶节萌发天数、丛生芽诱导的基本培养基及6-BA浓度对丛生芽诱导的影响和外源激素对丛生芽伸长及生根的影响。[结果]表明:(1)添加6-BA的萌发培养基与不添加的相比能够显著促进子叶节的生长及子叶节丛生芽的诱导,且6-BA浓度在2.0 mg·L-1时,诱导率最高可达73.3%,平均芽数2.26个;(2)种子萌发天数对子叶节丛生芽的诱导有显著影响,萌发7 d的子叶节丛生芽诱导率最高,诱导率为74.7%,但与萌发9、11 d的子叶节丛生芽诱导率差异不显著;(3)MS和B5培养基对丛生芽诱导的影响差异不显著,但B5抑制褐化的效果显著好于MS;(4)采用1.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1IAA激素组合有利于丛生芽伸长,伸长率为60.5%;(5)不同浓度生长素组合均能促进丛生芽幼苗生根,1.0 mg·L-1IBA生根率最大,生根数最多。[结论]最佳蒙古沙冬青子叶节丛生芽再生体系为:以在MS+2.0 mg·L-16-BA培养基中黑暗培养7 11 d的幼苗子叶节为外植体,在B5+1.0mg·L-16-BA培养基中诱导丛生芽,待丛生芽长约0.3 0.5 cm后,转入B5+1.0 mg·L-16-BA+0.3 mg·L-1IAA培养基中进行伸长培养,当丛生芽伸长至2 3 cm时,单株切下转入1/2 B5+1.0 mg·L-1IBA培养基中生根,该体系与愈伤组织培养相比能缩短培养时间,改善褐化严重、玻璃化等问题,可为蒙古沙冬青的扩繁及进一步开展遗传转化奠定基础。     

马占相思优树组培快繁技术研究*

相思(Acacia Mill.)类树种(俗称相思树)属含羞草科(Mimosaceae)金合欢属(Acacia Mill.),在我国广东、海南、广西、福建、云南和江西等地均有栽培。相思树植株高大挺拔,根系发达具根瘤,具有耐干旱贫瘠及抗风的特性,是水土保持及改良土壤的优良树种;同时,相思树还是优良的用材树种,其生     

Establishment of an in vitro plant regeneration protocol for Casuarina cunninghamiana Miq. via indirect organogenesis

An in vitro plant regeneration protocol via indirect organogenesis from morphogenetic callus was established for Casuarina cunninghamiana Miq. Effects of plant growth regulator NAA (naphthaleneacetic acid) and BAP (6-benzylaminopurine), sucrose and AgNO₃ on callus induction, adventitious bud differentiation and shoot development were examined. Explants used were epicotyl fragments from 45-day-old seedlings. The largest callus (4.29 mm in diameter) was obtained after 1 month on a basic culture medium consisting of Murashige and Skoog ? macro- and full strength micro- elements, Nitsch and Nitsch vitamins, supplemented with 0.54 μM NAA, 3.30 μM BAP, and 30 g L⁻¹ sucrose. The calli were subcultured in the same medium above for 2 months. They were then cultured for another 2 months for adventitious bud differentiation and shoot development. The highest mean adventitious bud differentiation, number of shoots formed per callus and number of shoots ≥2 cm long per callus (47.50%, 27.38 and 4.75, respectively) were achieved on the above medium modified with NAA at 0.27 μM and supplemented with AgNO₃ 1 mg L⁻¹. Shoots were successfully rooted without plant growth regulator and the rooted plantlets survived and grew normally. This protocol for in vitro plant regeneration provides a tool not only for vegetative propagation but also for plant genetic transformation and gene function studies of C. cunninghamiana.     

大叶相思下胚轴离体培养再生植株的研究

大叶相思(Acacia auriculaeformis A.Cunn.)为含羞草科(Mimosaccae)金合欢属(Acac／a Mill.)的落叶乔木,原产澳州,20世纪60年代初引入广东省.     

华北落叶松胚性愈伤组织诱导影响因子的研究

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最佳的植物外源激素配比是2,4-D 1.8 mg·L-1+6-BA 0.3 mg·L-1+KT 0.3 mg·L-1。     

沟叶结缕草的组织培养和无性系的建立

通过研究不同基本培养基及植物生长调节组合对沟叶结缕草丛生芽诱导、增殖和愈伤组织诱导、分化的影响,建立起沟叶结缕草试管无性系。以地下匍匐根状茎的顶芽为外植株,在MS 6-BA 2 mg.L-1 NAA 0.1 mg.L-1培养基上诱导丛生芽形成,以MS KT 3 mg.L-1 NAA 0.1 mg.L-1作为继代增殖培养基,建立起丛生芽苗→不定芽发生→丛生芽苗速生试管无性系;以丛生芽苗基部为外植体,以MS 2.4-D 4 mg.L-1作为愈伤组织诱导培养基,以MS基本培养基作为愈伤组织分化培养基,建立起丛生苗→愈伤组织→愈伤组织分化→丛生苗试管无性系。试管无性系室外移栽成活率达95%以上。沟叶结缕草试管无性系的建立为细胞工程育种和基因转化的研究奠定了基础。     

不同部位银杏茎段培养及位置效应的研究

以一个月月龄银杏(Ginkgo biloba)无菌幼苗各部位茎段为外植体,研究其顶芽、带腋芽的中段、带子叶的下段腋芽萌发和不定芽的分化情况。结果表明:①银杏顶芽段(上段)在以改良MS、N6、DCR为基本培养基,附加0.1mg/LNAA和0.5mg/L6-BA的培养基上顶芽生长较其他培养基好,抽出的芽苗长得高,最高达2.98cm,未见有不定芽的分化;②中段外植体在四种基本培养基(MS、DCR、N6、改良MS)中附加0.1mg/LNAA和0.5mg/L6-BA和0.25%AC时,都能诱导出腋芽和不定芽,4种培养基之间芽诱导率无明显差异,以N6培养基的诱导效果最好,平均每个外植体产生1.56个芽;③带有子叶下段的外植体培养后,能诱导出2～3个子叶腋芽和新的不定芽,在改良MS+0.1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA、N6+0.1mg/LNAA+0.5mg/L6-BA培养基上两个腋芽的诱导率均达80%以上。表明,不同部位的银杏茎段在芽的诱导上存在位置效应,可利用不同部位进行银杏的定向快速繁殖。     

孔雀草杂交F1代的植株再生

以孔雀草（Tagetes patula）子叶、下胚轴和叶片为外植体,通过器官直接发生途径诱导形成不定芽,探讨植物生长调节剂组合、AgNO3浓度、蔗糖浓度和外植体类型等因素对植株再生的影响,建立了再生体系。结果表明：MS＋6-BA 1.0 · L^- 1＋NAA 0.5 · L^- 1＋AgNO31.0 · L^- 1＋蔗糖40 g·L^-1培养基最适合不定芽的分化和增殖,子叶不定芽分化率达90%以上,平均每外植体分化不定芽数达5.3个。不定芽较适生根培养基为1/2MS＋IAA 0.2 · L^- 1＋NAA 0.1 · L^- 1,生根率达到90%。