用PCR检测长沙市猪肺炎支原体和猪鼻支原体的感染情况

为对长沙市猪支原体肺炎病原流行病学进行初步调查,用PCR方法对从湖南省长沙市5个县（市、区）205头猪中收集的326份病料（205份猪肺和121份猪鼻拭子）分别进行了猪肺炎支原体和猪鼻支原体检测,并对部分基因进行了序列分析。结果发现,猪肺炎支原体检出率为24.4%（50/205）,猪鼻支原体检出率为22.3%（27/121）;长沙市每个县（市、区）的生猪中均存在这两种支原体,其中长沙县生猪阳性率最高（42.4%和31.5%）;序列分析表明,检测出的基因序列与国内外相关序列有97%～100%的同源性。本试验证实了猪肺炎支原体和猪鼻支原体在长沙市猪场的存在。     

一株猪肺炎支原体的分离鉴定

从全国部分猪场采集到疑似猪支原体肺炎肺组织病料12份,提取DNA进行猪肺炎支原体PCR和多重PCR检测,将病料研磨后分离猪肺炎支原体,最终分离到1株疑似猪肺炎支原体;通过测序分析、形态观察、生化试验、血清学试验证实其为猪肺炎支原体。该菌株能适应人工培养基的培养,且传代生长良好,液体培养基中培养活菌滴度达109CCU/m L;菌株有一定的致病性,免疫原性好,可作为疫苗备用菌株,该菌株的分离鉴定为研制猪支原体肺炎疫苗奠定了基础。     

猪肺炎支原体PCR快速检测方法的建立和应用

根据猪肺炎支原体P36基因序列,设计1对引物,建立了猪肺炎支原体PCR诊断方法,该方法对猪肺炎支原体的扩增结果为阳性,对照菌株扩增结果均为阴性,对猪肺炎支原体检测的灵敏性为1 pg总DNA量。并用建立的PCR诊断方法检测52份猪肺炎支原体疑似病料,检出阳性病例18份,以上结果表明该PCR方法特异性强敏感性高、简便、快速,可用于猪肺炎支原体疾病的诊断。     

致犊牛肺炎和关节炎牛支原体新疆株的分离与鉴定

自2010年7月以来,新疆北疆部分地区某些奶牛场犊牛陆续出现严重的肺炎和关节炎,为确定其病原,无菌采集8个牛场病死犊牛的肺脏和关节液,患病犊牛的血清和部分鼻拭子,病料接种筛选培养基,通过菌落形态观察、特异性PCR鉴定、生长抑制试验和血清学检测,确定牛支原体15株,其中7株牛支原体克隆测序,与PG45 OPP F基因同源性为97.32%~100.00%。牛支原体ELISA试剂盒检测92份血清显示,阳性率82.61%。结果表明,该地区奶牛场发病犊牛以牛支原体感染为主。     

新疆北疆部分规模猪场支原体肺炎流行病学调查

为查明新疆北疆部分规模猪场支原体肺炎的流行情况,为该病的诊断和防控提供可靠依据。采用现场调查与问卷调查、病理学观察、血清学检测等方法,对13个规模猪场进行了流行病学调查。结果显示:被检血清Mhp抗体阳性率为52.2%(190/364),猪场阳性率为69.23%(9/13),病料PCR结果为58.3%(42/72)。因此,新疆北疆部分规模猪场存在比较严重的支原体肺炎流行现状。     

新疆规模化屠宰场猪肺炎支原体感染的检测分析

为了解新疆猪支原体肺炎的流行及其与其他病原混合感染的情况,对新疆5个规模化屠宰场进行了调查,采用28分评分法对913份肺脏进行猪支原体肺炎病变评分,选取其中高于10分的病变肺脏进行猪肺炎支原体(Mhp)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和胸膜肺炎放线杆菌(APP)的检测。结果:913份肺脏中,猪肺炎支原体阳性730份,阳性率为80%(730/913);评分高于10分的肺脏77份,其中Mhp与PRRSV、PCV2或APP的混合感染率为57.1%。检测结果表明新疆地区猪肺炎支原体感染率较高,且存在多种病原的混合感染。     

猪胸膜肺炎放线杆菌新疆株的分离鉴定及ApxⅣA基因的克隆与序列分析

从新疆北疆4个规模化猪场的20份发病猪病料中分离到1株细菌。经形态染色镜检、培养特性、生化特性和部分生物学特性试验鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌。根据猪胸膜肺炎放线杆菌ⅣA毒素基因特异性引物进行PCR扩增,得到1条与预期大小一致的2427bp的条带,将PCR产物纯化后克隆至pMD19-T载体上并测序。结果表明,该片段的碱基序列与GenBank中参考序列的同源性为98%,并与三株标准株比较,同源性分别为98.23%、99.46%和98.06%。     

平顶山市中小规模养猪场户副猪嗜血杆菌病及其混合感染的血清学调查

为了解平顶山市养猪场户副猪嗜血杆菌病流行现状及其混合感染情况。采用ELISA方法首先对8个乡镇22个养殖场户562份血清进行副猪嗜血杆菌病检测,其中384份为副猪嗜血杆菌病阳性,然后对此384份副猪嗜血杆菌病阳性血清进行H1N1亚型猪流感病毒病、猪支原体肺炎、猪圆环病毒病2型、猪链球菌病2型、猪传染性胸膜肺炎抗体检测。结果表明,猪场副猪嗜血杆菌病群体流行率为72.73%(16/22),副猪嗜血杆菌病个体流行率为68.32%(384/562),384份副猪嗜血杆菌阳性血清中,H1N1亚型猪流感、猪支原体肺炎、猪圆环病毒病2型、猪链球菌病2型和猪传染性胸膜肺炎阳性率分别为35.42%(136/384)、47.39%(182/384)、54.17%(208/384)、38.54%(148/384)和48.96%(188/384)。平顶山市养猪场户副猪嗜血杆菌病及其混合感染情况比较严重,应引起当地兽医部门的高度重视。     

猪肺炎支原体和猪鼻支原体在屠宰猪呼吸道与血液中的分布

用PCR方法对从湖南省长沙市515头屠宰猪收集的1 204份样品(120份猪鼻拭子、254份猪支气管拭子、515份猪支气管肺泡灌洗液和235份猪肺、80份血液)进行了猪肺炎支原体和猪鼻支原体检测,并对部分PCR产物进行序列分析。结果发现,猪肺炎支原体在猪支气管灌洗液中检出率最高(23.3%,120/515),猪鼻拭子和血液中检出率最低(0);猪鼻支原体在猪鼻拭子中检出率最高(24.3%,125/515),在猪支气管拭子中检出率最低(2.5%,3/120)。序列分析表明:试验的PCR产物与国内已出版的相关序列有97%~100%的同源性。试验探明了猪肺炎支原体和猪鼻支原体在猪呼吸道与血液中的分布情况,为这两种支原体的分离鉴定提供了依据。     

猪肺炎支原体PCR检测方法的建立与应用

根据猪肺炎支原体(Mhp)的P36基因的核苷酸序列,设计一对引物,建立一种猪肺炎支原体PCR检测方法,此方法对对照菌株显示为阴性,对猪肺炎支原体的扩增结果显示为阳性,并对此方法进行了特异性和敏感性试验,结果成功建立了猪肺炎支原体特异且敏感的PCR检测方法。采用已经建立的PCR方法对18份疑似猪支原体肺炎(MPS)样品进行检测,发现有9份呈现阳性,占比50%。试验结果表明,建立的该PCR检测方法可用于猪支原体的临床诊断,能为其以后的防控提供有力依据。     

新疆地区规模化奶牛场牛支原体流行病学调查

为了调查新疆地区规模化奶牛场牛支原体的感染情况,采用牛支原体间接ELISA和特异性PCR检测牛血清中的牛支原体抗体及病料中牛支原体核酸,共检测9个地区15个规模化奶牛场437份血清,肺脏、关节液及鼻腔黏液44份。结果显示,血清抗体阳性率为76.43%（334/437）,其中脐带血抗体阳性率为40.00%（4/10）;病料阳性率为40.91%（18/44）。检测结果表明,新疆地区大部分奶牛场存在牛支原体感染,部分奶牛场发生牛支原体肺炎及关节炎病例,并存在垂直传播的风险。牛支原体感染可能成为危害新疆规模化奶牛场犊牛健康的主要疫病之一。     

湖南省部分地区屠宰猪猪肺炎支原体感染率调查

用PCR方法对来源于湖南省株洲市、益阳市、长沙市、岳阳市、邵阳市、衡阳市等6个地区部分规模猪场的322份屠宰猪肺样品进行猪肺炎支原体检测。结果发现,猪肺炎支原体在该地普遍存在,检出率分别为:株洲市19.2%(11/57),益阳市18.1%(8/44),长沙市20.0%(13/65),岳阳市17.5%(7/40),邵阳市23.2%(13/56),衡阳市25.0%(15/60)。序列分析表明,试验的PCR产物与国内已出版的相关序列分别有98%~100%的同源性。试验结果证实了猪肺炎支原体在湖南省规模化猪场不同程度存在,对湖南省防控猪支原体肺炎提供了数据参考。     

山东蓬莱部分地区猪支原体肺炎流行情况调查与分析

研究旨在初步了解蓬莱地区猪肺炎支原体流行情况,为该病的进一步防制奠定基础。应用ELISA方法对采集于该地区4个镇、12个猪场共324份血清样品进行猪肺炎支原体抗体检测。结果显示,该地区猪肺炎支原体抗体检测阳性样品183份,阳性率为56.48%;不同地区猪群抗体阳性率存在一定差异,为45.78%~62.5%;其中哺乳仔猪抗体阳性率为27.08%,保育猪为45.0%,肥育猪为63.41%,繁殖母猪为86.49%;春冬季高于夏秋季。结果表明,猪支原体肺炎在该地区分布广泛,且流行情况较为严重,需要采取积极的措施进行有效防制。     

疑似猪瘟病料猪伪狂犬病的检测

本试验利用荧光抗体法和乳胶凝集试验对来自新疆境内的20份疑似猪瘟病料和230份血清进行检测。结果在疑似猪瘟病料中15份猪瘟阳性,6份为猪伪狂犬病阳性,其中4份呈双阳性。230份血清中,猪伪狂犬病中检测,25份阳性,阳性率11%,结果提示:新疆区域内猪伪狂犬病的存在及感染情况应引起重视。     

北疆地区猪圆环病毒3型PCR检测及分析

为了解北疆地区猪群PCV3的流行情况,试验采集40份不同日龄猪血样,采用巢式PCR方法进行检测分析,并对其中阳性样本进行克隆测序验证。结果检测出PCV3总阳性数为20份,平均总阳性率为50%(20/40),各日龄阶段皆有阳性检出。同源性分析表明,各株PCV3序列同源性为97.90%～99.70%;遗传进化分析表明,试验得到的其中2株基因序列属于3a亚群。试验结果发现PCV3毒株之间相似性很高,为北疆甚至新疆地区PCV3的防控奠定基础。     

山东省蓬莱部分地区猪肺炎支原体流行情况调查与分析

该研究旨在初步了解山东蓬莱地区猪肺炎支原体流行情况,为该病的进一步防制奠定基础。应用ELISA方法对采集于该地区4个镇、12个猪场共324血清样品进行猪肺炎支原体抗体检测。结果显示,该地区猪肺炎支原体抗体检测阳性样品183份,阳性率为56.48%;不同地区猪群抗体阳性率存在一定差异,范围在45.78%~62.5%;其中哺乳仔猪抗体阳性率为27.08%,保育猪为45.0%,育肥猪为63.41%,繁殖母猪为86.48%。结果表明猪肺炎支原体在该地区分布广泛,且流行情况较为严重,需要采取积极的措施进行有效防制。     

新疆北疆部分地区PCV2的PCR检测及基因型分析

猪圆环病毒2型（PCV2）是猪源疾病中的主要致病原。为了解新疆北疆部分地区PCV2的感染情况及阳性毒株基因型。在石河子及北屯地区的屠宰场共采集了203份抗凝血液，采用PCR方法对血样进行PCV2检测，在分离的PCV2阳性毒株中，选取2株克隆、测序，并进行了同源性分析和遗传进化分析。结果在待检样品中，PCV2阳性感染率为7．9％（16／203）；两个阳性样品测得序列之间的同源性为100％，它们与PCV2a参照序列之间的同源性为86．4％--87．4％，与PCV2b参照序列之间的同源性为92．9％～96．4名；两个阳性样品的序列在构建的遗传进化树中与PCV2b参照序列同属于一个分支，亲缘关系较近。结果证实本研究中所获毒株属于PCV2b基因型，表明新疆北疆部分地区猪群中存在PCV2感染，其基因型为2b型。     

桂林市猪圆环病毒病流行病学调查研究

本研究采集桂林市12县5城区的51家养殖企业的猪血清样本共计543份,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体检测。检测结果表明,全市猪场的阳性率为49.02%(25/51),个体阳性率为33.33%(181/543)。其中20家年出栏1 000头以下企业采集的198份血清样本中有79份样本的检测结果为阳性,阳性率为39.89%;在另外31家年出栏2 000头以上企业所采集的345份血清样本中有102份样本检测结果阳性,阳性率为29.56%;各年龄阶段的猪群抗体阳性率不尽一致,阳性率最高的是41日龄～90日龄的仔猪,达到47.92%,其次是91天龄以上肉猪的31.37%,第三是种猪(公/母)的29.76%,阳性率最低的是1日龄～40日龄仔猪的19.70%;不同县区规模养殖企业的阳性率也不一样,荔浦、临桂、灵川、兴安县等养殖量比较大的阳性率就比较高;采集部分病死猪的组织样品共103份进行PCV2的PCR病原学检测,同时随机采集了部分临床健康的27家规模养殖企业猪群的组织样品122份进行平行检测,结果病死猪群采集的病料样本中阳性率为28.15%(29/103),而临床健康猪群的样品阳性率为13.93%(17/122);再对46份PCV2阳性的病料样本同时进行猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)和猪瘟病毒(HCV)的检测,结果有16份单独感染PCV2,14份混合感染了PRRSV,3份混合感染了PRV,6份混合感染了HCV,2份同时混合感染了PRRSV与PRV,4份同时混合感染了PRRSV、PRV和HCV,1份同时混合感染PRV和HCV;从PCV2阳性的病料中随机选取7份(依次命名为GL1-GL7),进行PCV2全基因组的扩增及序列测定,除了GL4的全基因组长度为1 768bp外,其余的均为1 767bp,它们的核苷酸序列的相似性为93.6%～99.9%,与其他29株广西参考病毒的同源性为93.6%～100%,与国内外主要代表毒株的同源性为91.9%～100%。     

国内首次从患肺炎的犊牛肺脏中分离到牛支原体

牛支原体(Mycoplasma boris)是引起犊牛肺炎、关节炎和成牛乳房炎的主要病原之一.本研究利用选择性培养基从2份患肺炎的犊牛肺脏病料中得到2株支原体,分别命名为Hubei-1和Hubei-2,并在固体培养基进行了3次克隆纯化.通过生化实验、特异性PCR鉴定和序列比较证明为牛支原体.其16S rRNA 核酸序列与牛支原体国际标准株PG45同源性为99.3%.以该培养物作为包被抗原的ELISA 检测方法对13份发病犊牛血清进行了检测,其中11份血清抗体OD值为阴性血清对照值的2倍以上.该结果首次证实,国内部分地区存在牛支原体的流行.     

新疆伊宁市周边猪支原体肺炎的流行病学调查

猪支原体肺炎又称猪气喘病,是危害养猪业最重要的疾病之一。本研究通过采集新疆伊宁市周边地区规模化猪场、养殖合作社及生猪散养户饲养的疑似支原体肺炎猪只的鼻拭子或病料(肺脏),利用荧光定量PCR方法对猪支原体肺炎感染情况进行调查,并结合对周边规模化养殖场、养殖合作社和散养户进行的支原体肺炎流行病学调查进行分析,结果显示伊宁市周边规模化养殖场、养殖合作社及周边散养户的猪只均有猪支原体肺炎感染,其中鼻拭子采样阳性率为38.8%;肺脏病料阳性率为57.8%,结果也反映了散养户发生支原体肺炎感染的情况较为严重。同时通过支原体肺炎的流行病学调查结果综合分析该病的发生及发展规律对预防控制新疆地区猪支原体肺炎提供理论依据。