撒坝猪大肠杆菌血清型鉴定及药敏试验与HPI irp2基因的检测

为了对云南省楚雄和禄丰地区撒坝猪大肠杆菌血清型及药物敏感性与irp2基因的关系,试验采集疑似猪大肠杆菌病患猪的心脏、肝脏和粪便等病料,用于大肠杆菌的分离培养、形态学观察、生化鉴定,并进行了血清型鉴定与药敏试验和irp2基因的检测。结果表明:共鉴定出大肠杆菌50株,10种血清型,其中O20、0101、O14、O5、O9为优势血清型;头孢类、四环素类、氨基糖苷类和青霉素类这4种药中,以头孢类的头孢他啶作用最强;50株大肠杆菌中有12株(24%)扩增出434 bp的基因片段,其PCR产物测序结果与GenBank中公布的耶尔森菌强毒力岛(HPI)irp2基因的同源性达96%以上。说明irp2基因与血清型的致病性有关。     

致病性大肠杆菌HPI对Caspase-1细胞焦亡相关分子表达的影响

为研究云南撒坝猪致病性大肠杆菌高致病性毒力岛(HPI)致猪源巨噬细胞焦亡的分子机制,本试验以云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI阳性株感染猪源巨噬细胞为切入点,从云南楚雄州某规模养殖场采集撒坝猪仔猪黄白痢的粪便,对大肠杆菌进行分离纯化,并通过PCR技术对HPI irp2基因进行检测,分别以HPI阳性株(HPI~+)和阴性株(HPI~-)感染巨噬细胞,并设立LPS+ATP组和空白对照组,于0.5和6 h收集各组细胞及其上清。应用实时荧光定量PCR法检测不同组Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平的变化;应用ELISA检测细胞上清pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18含量的变化。结果显示,试验成功分离得到致病性大肠杆菌,经PCR检测成功获得HPI irp2基因阳性株,经实时荧光定量PCR法检测后发现HPI~+组、HPI~-组与空白对照组相比,Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平均呈上调趋势,且HPI~+组高于HPI~-组。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,HPI~+组和HPI~-组pro-IL-1β、pro-IL-18、IL-1β和IL-18的蛋白表达量普遍呈上调趋势,且HPI~+组均高于HPI~-组。结果表明,云南撒坝猪致病性大肠杆菌HPI可通过上调猪源巨噬细胞中Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA的表达量促进猪源巨噬细胞炎性因子IL-1β和IL-18的释放,诱发炎症,最终促进猪源巨噬细胞发生细胞焦亡。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)和肠聚集性大肠杆菌(EAEC),毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

禽优势血清型大肠杆菌部分相关毒力基因的检测

为研究禽大肠杆菌的致病性及相关生物特性,试验对湖北省各地方养殖场送检的病料,通过分离培养及生化鉴定,分离得到232株禽大肠杆菌。18个O因子血清鉴定结果显示,优势血清型为O_(20)(19)、O_(78)(27),这两种血清型菌株合计46株,占血清型定型菌株的25.99%(未定型菌株为55株)。对优势血清型禽大肠杆菌菌株进行毒力基因检测,结果表明fimH、iroD、iucD、estA和ibeA基因携带率分别为87.88%、57.58%、48.49%、36.37%、0%。研究结果为湖北地区大肠杆菌防控和疫苗的研制提供数据支撑,并为阐明大肠杆菌的致病机理奠定基础。     

福建省龙岩市禽致病性大肠杆菌的血清型、毒力因子及耐药研究

本研究对2015年分离自福建省龙岩市的139株禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的血清型、毒力因子分布及耐药性等进行检测,并对血清型与耐药性、毒力因子分布和耐药性之间的相关性进行分析,以期为APEC的防控提供参考。对139株分离菌株的血清型检测结果表明,O1血清型(11株)、O2血清型(14株)和O78血清型(14株)占全部菌株的28%;对分离菌株毒力基因检测结果表明,4%和7.1%的菌株检测到papC基因和vat基因,14.3%和19.3%的菌株检测到aat A基因和cva/cvi基因。而iuc D(82%)、tsh(59%)、iss(55%)和irp2(44.6%)基因在分离菌株中具有较高的检出率;药敏实验结果表明,分离株存在多重耐药性,99%以上分离菌株对红霉素、克林霉素和利福平耐受,86%的分离菌株对10种以上抗生素耐受,57.3%的菌株对13种药物都耐受;对血清型、耐药性与致病性之间的分析结果表明,分离的O1、O2和O78血清型的菌株,其中50%的菌株是含有5种以上毒力基因的强毒株,且在分离的含有5种以上毒力基因的强毒株中,50%的菌株对13种抗生素耐受,90%的菌株对10种以上药物耐受。     

貉致病性大肠杆菌分离鉴定及HPI、LEE毒力岛检测

为了解致病性大肠杆菌引起貉腹泻的机理,采用了貉致病性大肠杆菌分离鉴定、检测毒力岛基因HPI(irp2、fyuA)与LEE(ler、eaeA),小鼠腹腔注射检测菌株毒力的方法。结果表明:从腹泻貉体内分离出血清型分别为O_(29)、O_(38)、O_(78)和O_(107)的大肠杆菌,4个血清型中有2个血清型(O_(38)、O_(78))携带有irp2和fyuA,4个血清型均未检测到ler和eaeA;4个血清型的大肠杆菌均可使小鼠不同程度发病,其中以携带irp2和fyuA的菌株毒力较强,可见该菌对貉的健康存在危害。     

邵阳地区宠物犬源致病性大肠杆菌的血清型鉴定及耐药性分析

为了分析邵阳地区宠物犬源致病性大肠杆菌的血清型与耐药性,采用细菌分离鉴定的方法对38家宠物医院中无菌采集的87份腹泻宠物犬肛拭子及粪便样品进行大肠杆菌分离鉴定,采用人工感染动物试验、玻板凝集试验和K-B药敏纸片法分别检测分离菌株的致病性、血清型及耐药性。结果显示:分离得到了49株大肠杆菌,其中34株为致病性;34株致病性大肠杆菌分离株属于9种血清型,以O_2、O_9、O_(13)和O_(20)为主要的优势血清型;34株致病性大肠杆菌分离株对阿莫西林、氨苄西林、美罗培南等4种药物耐药率在82.4%～94.1%之间,对丁胺卡那、头孢他啶、恩诺沙星等6种药物的耐药率在41.2%～79.4%之间,对头孢曲松、头孢噻肟耐药率在14.7%～23.5%之间。研究结果为该地区宠物犬大肠杆菌病防治提供参考。     

仔猪腹泻致病性大肠杆菌分型鉴定及耐药性分析

为了解贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌流行情况及耐药性变化,本研究运用凝集试验、PCR和药敏纸片琼脂扩散法等方法对分离的78株致病性大肠杆菌进行血清型、毒力基因及耐药性分析。结果显示,78株致病性大肠杆菌以O138、O87血清型为主,占定型菌株的60.8%;其中62株致病性大肠杆菌检出毒力基因,检出率为79.5%,可分为8种毒力基因类型,分属肠致病性大肠杆菌（EPEC）、肠产毒性大肠杆菌（ETEC）和肠聚集性大肠杆菌（EAEC）,毒力基因eaeA、elt和escV检出率较高,分别为38.5%、28.2%和21.8%;分离到的致病性大肠杆菌对β-内酰胺类药物高度耐药,均为多重耐药株,耐药种类可达8种以上。结果表明,当前贵州省规模化养猪场腹泻仔猪致病性大肠杆菌的毒力基因检出率较高且基因型复杂,耐药性严重。本试验结果可为规模化养猪场防控仔猪腹泻提供基础资料及理论依据。     

云南楚雄规模化猪场仔猪大肠杆菌HPI基因调查及耐药性分析

为研究规模化猪场大肠杆菌高致病性毒力岛(high pathogenicity island,HPI)基因流行特征及其耐药性,本试验从云南省楚雄州地方猪场采集粪便及肛门拭子,应用麦康凯培养基、生化鉴定管及PCR扩增对大肠杆菌进行分离鉴定,分别通过PCR反应、动物回归试验及纸片扩散法研究分离菌株的HPI基因携带情况、致病性及耐药性。结果显示,共分离获得78株大肠杆菌,分离率为83.87%,HPI基因携带率高达96.15%;24 h内,HPI阳性菌株致小鼠死亡率100%,HPI阴性菌株致小鼠死亡率75%,对照组无小鼠死亡,表明HPI基因可提高小鼠死亡率;药敏试验结果显示,分离菌株对四环素、氨苄西林、复方新诺明、卡那霉素、庆大霉素、头孢他啶及阿米卡星的耐药率分别为88.46%、84.62%、73.08%、53.85%、38.46%、19.23%和5.13%,对多黏菌素B不耐药。本试验结果可为防治大肠杆菌相关疾病提供一定的理论依据。     

皖北地区禽源大肠杆菌的血清型鉴定与耐药性分析

为了掌握皖北地区家禽致病性大肠杆菌的优势血清型及耐药性表现,从皖北4个市8个县区32个规模化养殖场采集疑似家禽大肠杆菌病的病料64份,通过常规分离培养纯化获取31株致病性大肠杆菌,对31株致病性大肠杆菌进行血清学鉴定和耐药性分析。试验结果表明:31株致病性大肠杆菌分别属于O_(78)、O_(18)、O_(88)、O_2、O_1、O_(143)、O_4、O_(35)、和O_(141)血清型,其中O_(78)9株、O_(18)7株、O_(88)5株,共计21株,占分离株的67.74%,属于本地区的优势血清型。致病性试验结果表明,所分离的31株致病菌中,83.9%具有高致病性,12.9%具有中致病性,3.2%具有低致病性,不同血清型致病性没有明显差异。分离菌株对11种抗生素表现不同程度的耐药性,对复方磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、恩诺沙星表现严重耐药,耐药比例在70%以上;对阿莫西林、链霉素、庆大霉素、卡那霉素、氟苯尼考、环丙沙星耐药比例在16%以上;对头孢噻肟、头孢唑肟、阿米卞星耐药性比例在10%以下。其中,对4、5、6种药物表现耐药比例较高,占分离株的60%以上,对3、7、8、9耐药性居中,所有菌株均表现为多重耐药性。研究结果为皖北地区家禽大肠杆菌病的疫苗防控、药物防治提供了科学依据。