酶解鹰嘴豆蛋白制备ACE抑制肽的研究

ACE抑制肽对血压调节起重要作用,对抑制ACE活性发挥着重要作用。为开发降血压多肽,以鹰嘴豆分离蛋白为原料,在碱性蛋白酶作用下水解,选择温度、pH值、酶与底物浓度比和水解时间4个因素,以ACE抑制率为评价指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面分析法优化酶解鹰嘴豆分离蛋白制备ACE抑制肽的条件。结果表明,最优水解条件为:温度50℃,pH值8.0,酶底比4%,水解时间4.0 h,在此条件下,ACE抑制率可以达到58.84%,验证试验ACE抑制率为(59.01±0.58)%,与理论值相符合。     

苜蓿叶蛋白ACE抑制肽的制备

以苜蓿叶为原料,采用直接加热法提取苜蓿叶蛋白,分别用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶等6种酶进行酶解,获得酶解产物。通过对酶解温度、酶解pH值、底物质量分数来分析酶解液的ACE抑制率。研究发现,木瓜蛋白酶酶解苜蓿叶蛋白的ACE抑制能力最高,酶解温度在55℃时抑制率为83.26%±0.61%,酶解pH值为7.5时ACE抑制率为64.87%±0.49%,底物质量分数为4%时ACE抑制率为81.18%±0.04%。因此,确定木瓜蛋白酶为制备苜蓿ACE抑制肽的最佳用酶。     

鲅鱼加工副产物水解液中ACE抑制肽分离纯化研究

以鲅鱼加工副产物为原料,经脱脂后进行碱性蛋白酶酶解,分离纯化具有ACE抑制活性的小肽。水解液经超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析和反相高效液相色谱等逐级纯化,得到较纯的ACE抑制肽。结果表明,分子量小于3 kDa的超滤组分IV具有最高的ACE抑制活性,达45.6%;超滤高活性组分进一步经DEAE-Sepharodse FF阴离子交换层析分离,得到3个组分,其中组分A2活性最高,ACE的抑制率达50.3%;A2组分继而经Sephacryl S-100HR凝胶过滤层析分离,得到2个组分,其中B2组分ACE抑制率达83.4%;最后,B2组分经反相高效液相色谱进行分离,得到活性更高的C2组分,为下一步氨基酸序列测定提供了基础。     

碱性蛋白酶Alcalase水解杏仁蛋白制备ACE抑制肽

采用Alcalase蛋白酶水解杏仁蛋白,以水解度(DH)及水解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率为指标进行酶解工艺优化。结果表明,较大活性的ACE抑制肽的最佳水解条件为:pH值7.0,温度50℃,酶底比4%,底物质量分数为2%。该条件下经60min水解,其水解度为12.23%,得到ACE抑制肽的IC50值为0.85mg/mL。     

棘孢木霉ACCC30536葡聚糖酶Glu41基因克隆及分析

克隆获得生物防治菌棘孢木霉（T. asperellum）ACCC30536 菌株葡聚糖酶基因Glu41 的cDNA序列和DNA序列,cDNA和DNA的GenBank接受号分别为KJ541741 和KJ541742,编码区长度为1134bp,编码378 个氨基酸。克隆获得的启动子序列长度1500bp,含有6 个逆境响应元件。BlastP 相似性分析表明该基因与Glyco-hydrolase-16 家族中棘孢木霉CBS433.97 基因同源性最高相似度是60%,SignalP 信号肽分析显示N端第25 个和第26 个氨基酸中间存在一个信号肽剪切位点（AFA||AP）。Pfam 蛋白家族分析显示它属于Glyco-hydrolase-16 家族的葡聚糖酶基因。将棘孢木霉ACCC30536 菌株葡聚糖酶基因Glu41 基因对Glyco-hydrolase-16 家族中木霉属的CBS433.97 基因组进行同源性搜索,在基因组上获得4个同源序列。4 个同源基因表达中仅有Glu41 在杨树根茎叶粉的诱导条件下表达。表明棘孢木霉葡聚糖酶基因Glu41 与生物防治相关。     

用于连续制备乳清蛋白ACE抑制肽的酶膜反应器运行条件优化

采用中空纤维膜连续型酶膜反应器制备血管紧张素转移酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制多肽。在传统酶解工艺条件的基础上,设计出能高效连续制备ACE抑制肽的酶膜反应器,并对此酶膜反应器的运行参数进行了优化,得到能高效制备ACE乳清蛋白源抑制肽的运行条件是:循环流速22.4 L/h,底物质量分数5%,跨膜压力0.07 MPa,酶膜反应器能稳定运行12 h以上,得到乳清蛋白酶解产物的ACE抑制率为30%￣50%。     

沙海蛰ACE抑制肽制备酶解条件研究

对用碱性蛋白酶酶解新鲜沙海蜇制备ACE抑制肽的酶解条件进行研究。先后以水解度(DH)和ACE抑制率为指标,经单因素试验和正交试验得到最佳的酶解条件为酶解温度50℃,加酶量5%,酶解起始pH值9.5。采用改进的高效液相色谱法测定ACE抑制率,发现新鲜沙海蜇在以上条件下酶解7 h时所得多肽的ACE抑制率最大。所得ACE抑制肽脱盐冻干后,测定质量浓度0.5 mg/mL时ACE抑制率为54.53%。最后,通过排阻色谱法测得其平均分子量约为500 Da。     

食品中砷的暴露评估研究进展

砷以有机态和无机态广泛存在于自然界中。国际癌症研究中心（IARC）将砷和无机砷化合物列为第一类致癌物（Group1,对人类致癌）。食物和水是无机砷暴露的主要途径。无机砷膳食暴露对人体健康的影响已受到广泛重视。文章综述了近年来联合国粮农组织和世界卫生组织食品添加剂联席专家委员会（JECFA）、欧洲食品安全局（EFSA）等国际组织对食品中砷安全性评价的最新进展,总结了目前中国关于砷膳食暴露的研究现状,指出食品中砷的形态、不同砷形态的毒性作用、生物有效性价态以及食品中无机砷的提取和检测方法将是砷安全性评价的重要研究方向。旨在为进一步开展砷的膳食暴露评估及其他相关研究提供参考。     

杂色蛤酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

杂色蛤酶解产物对ACE活性的抑制作用采用马尿酸法测定。以ACE抑制率和水解度为指标,通过单酶筛选,得出对杂色蛤肉酶解效果最佳的酶是木瓜蛋白酶。通过单因素试验和正交试验,确定木瓜蛋白酶酶解杂色蛤肉制备ACE抑制肽的最优工艺为料液比1∶10,加酶量1.5%,酶解温度45℃,p H值6.0,酶解时间1.5 h。酶解产物(10 mg/m L)对ACE的抑制率为86.7%,水解度为27.75%。酶解液经超滤,小于6 k Da部分(2 mg/m L)抑制率最高为52.3%,IC50为1.738 mg/m L。     

高速逆流色谱法分离澳洲薄荷中香叶木苷

为研究澳洲薄荷中香叶木苷的高效制备问题,以澳洲薄荷为原料,建立高速逆流色谱仪分离澳洲薄荷中香叶木苷的方法。澳洲薄荷干燥茎叶用65%乙醇提取,经AB-8 型大孔吸附树脂初步纯化后得到澳洲薄荷总黄酮提取物,然后采用乙酸乙酯-正丁醇-水-乙酸(3:1:3:0.005,V/V)的两相溶剂体系进行香叶木苷单体的高速逆流分离纯化：上相为固定相,下相为流动相,主机转速1600 r/min,流动相流速0.8 mL/min,柱温25℃,检测波长254 nm。分离得到的香叶木苷经液相色谱检测纯度达95.2%。     

人参根系分泌物对几种药用植物的化感作用研究

本文研究人参根系分泌物对几种药用植物种子的化感作用。采用灭菌复合基质栽培人参,对人参根系分泌物进行原位收集,依次用水和甲醇提取人参根系分泌物,合并后用乙酸乙酯萃取分为水相和乙酸乙酯相两部分,设计不同浓度,采用室内培养,研究其对四种药用植物种子萌发和胚轴、鲜重的化感作用。结果表明人参根系分泌物对四种药用植物种子的化感作用是有所差异的。其中对大黄和水飞蓟种子萌发具有不同程度的抑制作用,降低了种子的α-淀粉酶活性。对大黄下胚轴和鲜重表现为高浓度抑制中低浓度促进。对水飞蓟种子上下胚轴和鲜重表现为水相促进乙酸乙酯相抑制。人参根系分泌物水相中低浓度促进而高浓度抑制牛蒡种子的萌发和种子α-淀粉酶的活性。乙酸乙酯相抑制牛蒡种子萌发和种子α-淀粉酶的活性。水相促进下胚轴的伸长,乙酸乙酯相抑制下胚轴的伸长,与对牛蒡鲜重的影响是一致的。人参根系分泌物水相高中浓度抑制白花草木犀种子的萌发,而低浓度促进其萌发。乙酸乙酯相高中浓度时促进白花草木犀种子的萌发,低浓度抑制种子的萌发,这与对种子α-淀粉酶活性影响基本一致。人参根系分泌物抑制下胚轴的伸长和鲜重的增加。因此,人参根系分泌物对四种药用植物具有不同程度的化感作用,并且化感作用与化感物质浓度密切相关,种子萌发与种子α-淀粉酶的活性,种子鲜重与下胚轴伸长有密切关系。     

瑞士乳杆菌TUST005发酵乳ACE抑制活性的检测

【研究目的】通过对四种不同发酵剂的瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）发酵乳乳清的血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性的体外检测和先天性高血压大鼠的体内检测。【方法】ACE抑制活性的测定根据Cushman D W等的方法进行改进。利用8周龄先天性高血压大鼠（SHR）,每天使用四种发酵乳乳清灌胃SHR大鼠,每一试验样品实验期为3 d,剂量逐渐升高,对照组饮用水。用ZH-HX-Z鼠尾无创动脉测量仪测定收缩压。【结果】瑞士乳杆菌TUST005发酵乳ACE抑制活性大于其他发酵乳ACE抑制活性,并在4 ℃下后发酵3 d具有较高的ACE抑制活性,达到45.91%。当瑞士乳杆菌TUST005发酵乳剂量15 mL/kg体重与乳清剂量为20 mL/kg体重,血压的下降和上升速度相对缓慢,维持最低血压水平时间较长为6 h,降压效果最好且与对照组相比降压值为20.2 mmHg。【结论】瑞士乳杆菌TUST005发酵乳体外检测和体内检测结果一致。     

苹果多酚提取物对血管紧张素转换酶活性的抑制

为研究不同品种、成熟度的苹果多酚对血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）活性的影响,确立高效液相色谱法（HPLC）测定苹果多酚对血管紧张素转换酶（ACE）活性抑制的检测方法。选取‘富士’、‘国光’2个品种、2个成熟度的苹果多酚提取物作为实验材料,研究其对ACE活性的抑制。实验结果表明,多酚浓度在1~250 μg/mL范围时,未成熟‘富士’、成熟‘富士’、未成熟‘国光’、成熟‘国光’的苹果多酚对ACE活性的抑制逐渐增强,其中未成熟‘富士’多酚提取物的半抑制率浓度IC50值最低,成熟‘国光’的IC50值最高,分别为16.9、80.8 μg/mL。由以上结果得出,未成熟‘富士’的苹果多酚对ACE活性的抑制作用最强,可以作为天然优良的ACE活性抑制剂。     

西洋参果肉乙醚相中发芽抑制物质的研究

本文首次报道从西洋参果肉中分离鉴定４种发芽抑制物质－－乙酸、丁酸、异相酸和苯乙酮,同时利用标准品测定有效抑制浓度分别为１０、１０、１００和１００μｌ／Ｌ。从而明确西洋参种子成熟时,种胚尚不能成熟的主要原因之一是果肉中存在磋眵种抑制活性较强的发芽抑制物质。     

燕麦蛋白源ACE抑制肽脱盐工艺研究

采用离子交换工艺,对强活性的燕麦蛋白ACE(Angiotensin I Converting Enzyme,血管紧张素转化酶)抑制肽进行了脱盐处理。结果表明,在10倍柱体积/h的洗脱流速和15℃的洗脱温度下,离子交换处理能脱除肽中81.8%的盐分,同时氮回收率高达89.8%,且脱盐处理对肽的ACE抑制活性影响很小。脱盐处理后的燕麦蛋白ACE抑制肽产品中的蛋白质含量为86.4%,灰分含量为2.1%。     

三七须根粉碎物土壤添加的自毒效应研究

自毒作用是导致三七（Panax notoginseng（Burk.）F.H. Chen）连作障碍的重要原因。本文对三七须根粉碎物土壤添加的自毒效应进行了分析,结果发现：①三七须根粉碎物对其发芽指标呈“低浓度促进,高浓度抑制”的作用趋势,添加量≤10%时不会对发芽率和发芽指数产生显著抑制作用;②三七须根粉碎物对三七植株的出苗率、存苗率具有明显抑制作用;须根粉碎物添加使三七植株的株高、花苔高逐渐降低,茎粗变小,平均小叶数减少,中叶长、宽减小,同时主根的长、宽变小,须根长度变短;③随用量增加,三七植株的地上和地下鲜重、干重及总干重均呈明显下降趋势。三七须根粉碎物土壤添加具有明显的自毒作用。     

茉莉酸甲酯对人参β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活性的影响

为了明确β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在茉莉酸甲酯（MeJA）诱导人参抗人参锈腐病过程中的作用,试验设4个处理：MeJA、Cylindrocarpon destructans、MeJA+Cylindrocarpon destructans和CK。MeJA浓度为200 mg/L。处理后3,6,9,12,15,20,25,30天测定酶活。结果表明,经MeJA处理后接种人参锈腐菌,人参根系β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的活性均较对照增强。β-1,3-葡聚糖酶活性在第12天达到峰值,是对照的1.39倍;几丁质酶活性在第15天达到峰值,是对照的1.51倍。这表明β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶在MeJA诱导人参抗人参锈腐病的过程中起重要作用。