牦牛、黄牛卵巢卵泡发育及卵母细胞体外成熟培养的比较研究

对53头成年黄牛和44头成年牦牛卵巢形态、表面卵泡数量、黄体状况以及卵母细胞体外成熟培养等进行了比对研究,探讨牦牛和黄牛卵巢的形态学差异和卵泡卵母细胞发育变化规律。结果表明,成年黄牛卵巢的体积(11.12±5.77vs.6.92±7.0)和重量(5.85±2.98vs.3.19±1.58)显著大于成年牦牛卵巢(P0.05);成年黄牛Ⅰ级卵泡数(13.04±8.12vs.7.97±3.72)、Ⅲ级卵泡数(0.42±0.52vs.0.02±0.15)、总卵泡数(14.46±8.92vs.8.98±3.87)和卵巢黄体直径(1.54±0.44vs.1.2±0.51)显著大于牦牛(P0.05);采集卵巢卵母细胞,黄牛卵母细胞数量显著多于牦牛,经体外成熟培养A级卵母细胞培养24h第一极体的排除率显著高于B级和C级卵母细胞,同一体外成熟时间和相同分级的黄牛和牦牛卵母细胞第一极体的排除率差异不显著。     

牦牛卵巢卵母细胞体外培养成熟条件的建立

研究了不同采集方法和不同培养液对牦牛卵母细胞体外成熟的培养效果。结果:在牦牛乏情期,每个卵巢平均回收卵数为(9.33±4.30),可用卵数为(5.63±4.19)。将牦牛卵丘卵母细胞复合体分别置于5种成熟培养液中培养,成熟率分别为75.56%、71.11%、81.33%、77.33%和77.78%,卵裂率分别为42.22%、33.33%、49.33%、46.67%和42.22%,其中C的成熟液效果最好。来自卵巢表面卵泡的COCs的成熟率(81.33(vs69.33(,P>0.05)高于来自卵巢内卵泡的COCs,卵裂率(49.33%vs34.67%,P<0.05)显著高于来自卵巢内卵泡的COCs。来自明亮卵泡的COCs的成熟率(81.33%vs33.33%,P<0.01)和卵裂率(49.33%vs3.33%,P<0.01)极显著高于来自混浊卵泡的COCs。     

青海高原牦牛妊娠早期卵巢形态的观测

本研究选择青海省天峻县怀孕早期成年母牦牛25头,对它们的卵巢形态和卵巢表面的卵泡进行了解剖学观测.结果表明,青海高原牦牛在妊娠早期其孕角侧卵巢的体积平均为2.51×2.12×1.68厘米,空角侧卵巢的体积平均为2.07×1.52×1.13厘米;孕角侧卵巢的重量平均为4.94±0.95克,空角侧平均为2.44±0.81克,两者之间有明显差异(P＜0.05);妊娠黄体的平均直径为1.26±0.35厘米;孕角侧卵巢上小卵泡(替补卵泡)数明显多于空角侧(P＜0.O1);大、中卵泡(优势卵泡、选择卵泡)数间无明显的差异(P＞0.05).     

牦牛发情后生殖器官变化及卵巢动态发育过程

[目的]探明牦牛发情症状的主要表现形式及其发生几率。[方法]采用跟踪观察、生殖器官的临床检查和B超探查技术,对147头出现静立反射成年母牦牛的主要发情症状和卵巢发育状况进行了监测统计。[结果]发情季节初次发情的牦牛,出现外阴肿胀、潮红,阴门有粘液流出,子宫颈外口肿胀的个体比例均略低于再次发情牦牛;优势卵巢体积在发情开始时(0 d)平均为(2.41±0.31) cm,最大卵泡直径在发情第1天可达到(0.91±0.22) cm,排卵发生在优势卵巢上。发情季节再次发情的牦牛,发情第0天两侧卵巢的体积都明显大于初次发情牦牛(P0.01),最大卵泡直径在发情第1天略小于初次发情牦牛(0.88±0.21) cm,但差异不显著(P0.05),排卵多发生在小卵巢上;发情期(1.4±0.5) d略短于初次发情牦牛(1.8±0.6) d,但差异不显著(P0.05)。[结论]牦牛发情期主要发情症状并不完全出现,发情季节初次发情个体的发情表现更不充分。发情鉴定时,应根据外部症状、粘液分泌情况、卵巢发育状况来综合判断,在卵巢体积达到2.4 cm左右,卵泡直径在0.8 cm左右时就有发情的可能。     

牦牛卵母细胞的体外成熟

以屠宰场牦牛卵巢为材料,比较了抽吸加切割法和抽吸法2种卵母细胞离体采集方法的效率和5种成熟培养液的培养效果,并研究了卵泡位置、形态对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:在牦牛乏情期,平均每个卵巢用抽吸加切割法回收卵数极显著高于抽吸法(9.33±4.30VS4.70±2.62,P<0.01),可用卵数也极显著高于抽吸法(5.63±4.19VS4.37±2.32,P<0.01)。将牦牛卵丘卵母细胞复合体(COCs)分别置于5种成熟培养液中培养,其中M199(缓冲体系为Earles盐) 10% FBS 5.0mg/LLH 1.0mg/LE2 双抗(青霉素100IU/mL和链霉素100mg/L)的成熟液效果最好,成熟率为81.33%,卵裂率为49.33%。来自卵巢表面卵泡的COCs的成熟率和卵裂率均高于来自卵巢内卵泡的COCs(分别为81.33%VS69.33%,P>0.05;49.33%VS34.67%,P<0.05)。来自明亮卵泡的COCs的成熟率和卵裂率均极显著高于来自浑浊卵泡的COCs(分别为81.33%VS33.33%,P<0.01;49.33%VS3.33%,P<0.01)。     

白牦牛卵母细胞的采集方法及卵巢贮存条件对其体外成熟的影响

探讨了白牦牛卵母细胞的采集方法以及卵巢保存温度和时间对其体外成熟的影响。结果表明:先抽吸卵泡,每卵巢平均可获可用卵母细胞4.7枚,再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数9.8枚/卵巢。将屠宰白牦牛卵巢分别置于20~29℃和30~38℃的生理盐水中,6 h内收集卵母细胞,其成熟率、卵裂率分别为65.7%、41.3%和73.3%、45.7%,两者之间的差异均不显著,但均与<20℃组(16.0%、0)差异显著。在30~38℃下,白牦牛卵巢保存时间超过6 h,卵母细胞的成熟率和卵裂率显著下降,卵巢保存时间在2 h以内最好,最晚不超过6 h。     

不同处理对西藏牦牛超数排卵的影响研究

本研究选用了埋植CIDR栓法、埋植PRID栓法、PG法以及PMSG+PG法四套方案对西藏41头母牦牛进行了超数排卵试验。试验结果:埋植CIDR法得到的平均卵母细胞数为7.4枚/头,埋植PRID法得到的平均卵母细胞数为6.5枚/头,PG法得到的平均卵母细胞数为4枚/头,PMSG+PG法得到的平均卵母细胞数为4.8枚/头,各组之间差异极显著(P<0.01);而经过卵母细胞成熟培养之后,埋植CIDR法得到的平均可用卵母细胞数为6.2枚/头,埋植PRID法得到的平均可用卵母细胞数也为6.2枚/头,PG法得到的平均可用卵母细胞数为4枚/头,PMSG+PG法得到的平均可用卵母细胞数为4.6枚/头,CIDR+FSH法与PRID+FSH法两组、两次PG法与PMSG+PG法两组差异不显著(P>0.05),但是CIDR+FSH法和PRID+FSH法组与两次PG法和PMSG+PG法组之间差异都极显著(P<0.01);用CIDR法和PRID法进行西藏牦牛超排效果较好,并可获得较多的可用卵母细胞。     

不同月龄绵羔羊卵泡发育的比较研究

本研究旨在比较1、3月龄绵羔羊激素处理后卵巢、子宫及血液中促卵泡激素(FSH)变化,研究不同月龄对羔羊卵泡发育的影响。通过对1、3月龄羔羊进行FSH和孕马血清促性腺激素(PMSG)处理,比较羔羊在激素处理前后血液中FSH水平和卵巢、子宫大小变化,卵巢上2～8 mm卵泡的数量和卵母细胞体外成熟、受精后胚胎的发育情况。结果表明:1月龄羔羊实验组体内整体FSH水平高于3月龄羔羊(P<0.05)。1月龄羔羊注射外源激素后两侧卵巢可获卵母细胞数(42.3±2.5、36.8±1.1)枚及体外受精囊胚发育率(16.33%±0.96%)显著高于3月龄羔羊卵母细胞数(10.0±0.7、8.5±0.6)枚及囊胚率(9.29%±1.55%)(P<0.05)。羔羊进行超数排卵处理时卵巢上卵泡发育与血液中FSH水平密切相关,且较高的FSH水平预示着较多的卵泡发育。     

促卵泡素受体和促黄体素受体在乏情期和怀孕期牦牛卵巢中的表达

应用免疫组织化学技术和图象分析方法对乏情期、怀孕期牦牛卵巢的促卵泡素受体(FSHR)、促黄体素受体(LHR)的表达特点进行了研究。结果表明,牦牛卵巢的皮质、髓质、颗粒层和膜内层、黄体中都分布有FSHR和LHR。且牦牛卵巢皮质、髓质中的FSHR光密度值在乏情期显著大于怀孕期(P0.05);怀孕期无黄体侧卵巢颗粒层和膜内层中FSHR光密度值均大于乏情期和怀孕期有黄体侧(P0.05)。怀孕期有黄体侧卵巢皮质处LHR光密度值最大,乏情期次之,怀孕期无黄体侧最小,各组间差异显著(P0.05);在怀孕期无黄体侧卵巢髓质处LHR光密度值显著小于怀孕期有黄体侧和乏情期(P0.05);在乏情期、怀孕期无黄体侧和怀孕期有黄体卵巢颗粒层和膜内层处LHR光密度值之间差异均不显著(P0.05)。表明牦牛卵巢中FSHR和LHR随着生殖阶段的不同而变化。     

季节对沼泽型水牛采卵效果和卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场屠宰的沼泽型水牛卵巢采集卵母细胞,统计了一年中4个季度1—3、4—6、7—9、10—12月份每个卵巢平均获卵母细胞总数、可用卵母细胞数及不可用卵母细胞数。结果：每个卵巢平均获卵母细胞总数分别为4.06枚±0.63枚、4.62枚±0.75枚、4.50枚±1.06枚、3.87枚±1.34枚,其中可用卵母细胞数分别为1.70枚±0.57枚、1.86枚±0.55枚、2.06枚±0.63枚和1.67枚±0.50枚;4个季度卵母细胞成熟率分别为：（81.5±6.2）%、（70.7±5.6）%、（70.7±9.3）%和（77.0±6.9）%。以上结果表明,在每个卵巢平均获卵母细胞总数上,4—6月份、7—9月份两季度显著高于10—12月份（P〈0.05）,其他季节间没有显著性差异（P〉0.05）;7—9月份每个卵巢平均获可用卵母细胞数最高,显著高于1—3月份和10—12月份（P〈0.05）,但与4—6月份之间没有显著性差异（P〉0.05）;4个季度不可用卵母细胞数之间没有差异（P〉0.05）;4个季度卵母细胞的体外成熟能力上也没有显著差异（P〉0.05）。     

Maturation competence of swamp buffalo oocytes obtained by ovum pick-up and from slaughterhouse ovaries

This study was designed with the final goal of improving in vitro embryo production in the Thai swamp buffalo (Bubalus bubalis carabensis). Oocytes were collected by ovum pick-up (OPU) from six non-lactating multiparous swamp buffalo twice per week for 10 consecutive sessions followed by once-weekly collection for 10 consecutive sessions without hormone stimulation. In addition, oocytes were collected from slaughterhouse ovaries that were classified as follows: ovaries from non-pregnant cows with a visible corpus luteum (NPCL); pregnant cows with a corpus luteum (P); and non-pregnant cows without a corpus luteum (NP). Follicles in each group of ovaries were categorized as small (2-4 mm), medium-sized (5-8 mm) or large follicles (≥ 9 mm). The quality of the oocytes was assessed by their capacity to undergo in vitro maturation. The total number of observed follicles per session (all sizes combined) was larger in the once-weekly OPU group compared with the twice-weekly OPU group. In particular, the numbers of small and large follicles were higher in the once-weekly OPU group (5.2 ± 0.7 and 0.9 ± 0.2, respectively) than in the twice-weekly OPU group (3.9 ± 0.5 and 0.5 ± 0.1). The number of medium-sized follicles did not differ between the groups. The percentages of oocytes with an abnormal spindle morphology were not different between oocytes from the twice-weekly (30.0%) and the once-weekly (28.6%) OPU groups. A higher percentage of oocytes obtained in vitro (49.5%) exhibited nuclear abnormalities compared with those obtained in vivo (≤34.8%) after in vitro maturation. In conclusion, oocytes can be successfully collected by OPU in the swamp buffalo, without hormonal pretreatment, and per week more good-quality oocytes can be collected by twice-weekly OPU. In addition, oocytes collected from slaughterhouse ovaries can be used with the reproductive status of the cow having no influence on the maturation competence of oocytes.     

藏绵羊卵巢组织学及卵泡超微形态的观察

旨在通过观察藏绵羊卵泡、黄体的组织学特征及卵泡的超微形态,探讨其与生理功能的关系。本研究运用大体解剖、常规组织切片和H.E染色及透射电镜技术对藏绵羊卵巢卵泡和黄体的组织结构特点以及卵泡的超微形态进行观察和分析。结果发现,藏绵羊黄体期和卵泡期卵巢的宽度和厚度存在显著差异（P<0.05）,而重量和长度无显著差异（P>0.05）;卵巢上的大多数卵泡通过颗粒细胞萎缩和纤维化而闭锁;黄体中膜黄体细胞（直径22 μm）和颗粒黄体细胞（直径50 μm）结构特征明显且分界清晰,其内部分布着丰富的毛细血管;通过观察卵泡的超微形态发现,随着卵泡的发育,卵泡细胞的形状由椭圆形变为多边形,数量增多且被膜细胞包围;细胞器数量和种类也增多且之间联系紧密,胞质可见分泌的皮质颗粒。结果表明,藏绵羊卵泡系统和黄体的组织学特点以及卵泡的超微形态与其他绵、山羊类似,随着卵泡的发育,血管增生较快,卵泡结构特征变化明显和细胞器致密化程度增加且卵泡在不同时期均会闭锁;黄体内部在毛细血管滋生下使两种黄体细胞结构更加完整且特征明显,这可能是藏绵羊在高原低氧环境下仍然能够发挥卵巢机能的重要基础保障。     

不同卵巢机能状态及胎次对母牦牛同期发情效果的影响

在青海省环湖地区390头3～10岁繁殖体况不同的母牦牛中,研究了不同繁殖卵巢机能状态及胎次,母牦牛同期发情效果的影响。结果表明:初产青年母牦牛与经产母牦牛中隔年犊牛组与当年产犊牛组的排卵率及妊娠率有显著差异(P<0.05),经产母牦牛中无黄体卵泡组与有卵泡组和有黄体组排卵率及妊娠率有显著差异(P<0.05)。研究表明,年龄和胎次及卵巢的机能状态对母牦牛的同期发情处理效果有较大影响。通过生殖激素处理,能够明显改善母牦牛的生殖机能状态,从而提高母牦牛的发情及排卵效果。     

卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系

用简单机械分离法处理了 12 7枚成年牛卵巢。结果显示 ,在外观正常的卵巢中 ,腔前卵泡的采集数量与卵巢的大小成正相关关系 ,而有无黄体与腔前卵泡的采集数量无明显关系 ;卵巢上不同大小的可见卵泡的数量和分布与腔前卵泡的采集量有关。卵巢上可见卵泡分布均衡 ,大、中、小卵泡均有分布 ,小卵泡不过多以及无大卵泡 ,但中、小卵泡较多的 ,无论是否有黄体存在 ,均可获得较多腔前卵泡。而卵巢表面脂肪化、卵巢充血、有弥散性片状黄体及幼稚卵巢的 ,则腔前卵泡分离很少或几乎分离不到     

牛卵巢黄体状况与腔前卵泡采集数量的关系

根据牛离体卵巢黄体的不同状况，将31枚卵巢分为5种类型，并采用机构方法分离腔前卵泡，观察不同黄体状况卵巢与腔前卵泡采集数量的关系，结果表明，火山口型，圆锥型和蘑菇型3种大黄体的卵巢腔前卵泡采集量多，扁平片状和表面无黄体型卵巢腔前卵泡采集量较少，具有黄体状况的卵巢初级卵泡（Pm)采集数量多于无黄体类型卵巢，原始卵泡（Pf) 以3种黄体较大的卵巢采集数量最多，次级卵泡（Sc)则以黄体为火山口型卵巢为最多，说明卵巢黄体状况不同，其腔前卵泡采集数量有所不同。     

不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育的影响

试验以屠宰场犬卵巢为材料,研究了不同生殖周期阶段(卵泡期、黄体期和乏情期)对犬卵母细胞体外发育的影响。结果表明,从卵泡期卵巢采集A类COCs的数量为22.67±11.02个,显著高于黄体期10.67±5.51个和乏情期7.25±4.92个(P＜0.05);体外培养48 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为19.2%±15.3%、26.8%±21.1%、9.8%±10.4%,卵泡期与黄体期之间差异不显著(P＞0.05),但两者均显著高于乏情期(P＜0.05);体外培养72 h时,卵泡期、黄体期和乏情期卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率分别为25.2%±13.5%、6.6%±6.7%、9.2%±5.5%,卵泡期显著高于黄体期和乏情期(P＜0.05)。同时,随体外培养时间延长,不同生殖周期阶段犬卵母细胞达到MⅠ-MⅡ期比率存在不同变化。说明不同生殖周期阶段对犬卵巢卵母细胞体外发育有一定影响,且与培养时间有关。     

Histomorphological changes between short and long days in ovary guanacos (Lama guanicoe)

This is the first morpho-histological comparison of guanaco ovaries between reproductive (long-days) and non-reproductive (short-days) seasons, and oestrogen receptor-alpha (ERα) and beta (ERβ) detection. Different stages of follicle development were found in the cortical area, but no corpus luteum was detected. The size and frequency of antral follicles and large atretic follicles were higher in long-day ovaries than short-days, consistent with ovarian activity in this season. Differential expression of ERα and ERβ was observed in follicles at different stages of development between short and long days. These data reveal histological and molecular differences between reproductive and non-reproductive seasons of guanaco ovaries.     

西藏牦牛超数排卵技术研究

本研究选择24头藏北当雄牦牛为对象,分为组Ⅰ、组Ⅱ和组Ⅲ三组,每组8头,选用PG＋FSH、Cu-Mate ＋FSH和Cu-Mate ＋FSH ＋PMSG三种方法分别处理进行超数排卵试验.结果表明：25～60h内的发情率为100％,其中,25～36h为16.67％,37～48h为62.5％,49～60h为20.83％,37～48h之间发情率与25～36h之间差异显著（P＜0.05）,37～48h之间发情率与49～60h之间差异极显著（P＜0.01）;组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ黄体数分别为15、11、12个,头均分别为1.875、1.375、1.5个,回收胚胎数分别为7、4、5枚,可用胚胎数分别为6、4、4枚,三组之间在黄体数、头均黄体数、获得胚胎数及可用胚胎数上差异均不显著（P＞0.05）.说明三种方法都能获得较好的超排效果.     

Influence of corpus luteum and ovarian volume on the number and quality of bovine oocytes

In order to evaluate whether ovarian volume, presence and diameter of the corpus luteum (CL) have effects on the number and quality of bovine recovered oocytes, 110 ovaries were obtained from the slaughterhouse. Cumulus oocytes complex were aspirated and evaluated under stereomicroscope. Oocytes were counted and classified according to their quality (Grades I, II, III and IV). Ovarian volume was weakly correlated to the number of good quality oocytes (P < 0.05). Ovaries with CL showed greater numbers of good quality oocytes than ovaries without CL (P < 0.05). Further, presence of CL and its diameter positively influenced the probability of recovering good quality oocytes (P < 0.05). In conclusion, ovarian volume is not a good parameter itself to predict important ovarian characteristics; moreover, analysis of CL, its presence and diameter, may be a good tool to improve efficiency on in vitro embryo production programs.