辣椒种子纯度分子鉴定技术的研究进展

种子纯度检测是作物种子品质检测中极为重要的内容之一。随着分子生物学技术的发展,出现了多种基于DNA水平的种子纯度分子标记技术。综述了RFLP、SSR、SCAR、SRAP等几种主要分子标记技术应用在辣椒种子纯度检测中的基本原理与研究进展,并阐述了各种方法的特点,为辣椒种子纯度鉴定工作提供理论参考。     

分子标记技术在辣椒种子纯度检测中的应用

种子的纯度是种子质量的重要指标,其对产量及品质均有直接而明显的影响。辣椒种子纯度鉴定技术也由传统的主要依赖形态鉴定逐步发展形成集形态学鉴定、细胞学鉴定、蛋白及同工酶电泳鉴定和遗传标记鉴定等技术的鉴定技术体系,特别是基于DNA水平的分子标记技术为种子纯度鉴定提供了一个新的途径。对用于辣椒纯度鉴定的几种分子标记技术的基本原理及应用进行了概述,并全面阐述了各自的优缺点,主要包括RFLP、RAPD、SCAR、SSR、ISSR、SRAP、SNP,旨在为辣椒分子纯度鉴定提供参考。     

菜薹杂交种ISSR和SRAP的指纹图谱构建

利用ISSR和SRAP两种分子标记技术,对1份菜薹杂交组合进行分析。结果表明,3个ISSR引物和3对SRAP引物可扩增出供试材料双亲的互补特征带,将双亲及杂种F1区分开;另有2个ISSR引物也可有效鉴别双亲及杂种F1。从而建立了由ISSR和SRAP两种标记技术组成的鉴定该杂交组合的分子指纹图谱,并转化为数字指纹图谱,为菜薹种子纯度的鉴定开辟了新的技术途径,为菜薹新品种知识产权的保护提供了重要手段。     

分子标记鉴定葫芦科瓜类作物种子纯度的研究进展

对分子标记技术鉴定种子纯度的基本原理,以及采用分子标记技术鉴定葫芦科瓜类作物种子纯度的研究现状进行了综述,并指出存在的问题、今后的工作重点,同时对其应用前景进行展望。分子标记技术鉴定种子纯度具有客观、稳定、快速、高效的特点,这项技术势必能够在葫芦科瓜类作物种子检测工作中起到重要作用。     

SRAP标记在夏华2号甘蓝种子纯度检测中的应用

应用SRAP技术对夏华2号甘蓝种子纯度进行了分子检测研究。结果表明,从100对SRAP引物中筛选出1对引物(Me-5/Em-8)能清晰地扩增出父、母本的特异性条带,并且F1代带型呈双亲互补。利用这对SRAP引物对夏华2号种子进行纯度检测,检测纯度为97%,与田间生物学性状表现相符合,表明SRAP技术可用于夏华2号甘蓝种子纯度鉴定。     

佳宝苦瓜杂交种纯度的SRAP鉴定

利用SRAP技术对佳宝苦瓜杂交种子进行纯度鉴定。试验结果表明,从153对SRAP引物中筛选出1对引物Me6-Em4,能同时扩增出F_1代及其父母本的多态性条带,且PCR扩增产物具有高度的稳定性和重复性;利用该引物对48株佳宝苦瓜进行纯度鉴定,其种子纯度为97.9%,与其田间鉴定结果接近,表明利用SRAP分子标记可以快速、准确地鉴定佳宝苦瓜杂交种纯度。     

辣椒品种镇研20号种子纯度的SRAP鉴定

利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术,对辣椒品种镇研20号杂交种子纯度进行鉴定试验。结果表明:从30对随机引物中筛选出的引物E2M5在亲本和杂交种中表现出明显的多态性;并对镇研20号杂交种进行纯度鉴定,其结果为95.5%,与田间鉴定结果基本一致。     

辣椒品种镇研22种子纯度的SSR分子标记鉴定

分子标记技术因其具有高效、稳定、可靠等优点越来越多地被应用到种子纯度鉴定中;而基于分子标记的辣椒(Capsicum annuum L.)杂交种子纯度快速检测技术体系的建立对辣椒杂交品种的选育和生产则具有重要的意义。以辣椒杂交品系镇研22及其两亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术对辣椒杂交品种间的多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。结果表明,从20对SSR引物中筛选出CAMS-327引物,在亲本和杂交种中表现出稳定的共显性,并对镇研22杂交种进行纯度鉴定,结果为98%,与田间鉴定结果基本一致;SSR标记分析可实现对辣椒杂交品种种子纯度的快速和准确鉴定。     

西瓜杂交种子纯度鉴定方法研究进展

西瓜杂交种子纯度鉴定一直是个技术难题,是杂交种子生产经营的重要环节。文章综述了利用传统的田间种植鉴定西瓜杂交种子纯度的方法,以及电泳技术和分子标记技术等实验室技术手段在西瓜杂交种子纯度快速鉴定应用方面的研究进展及存在的问题。     

利用SSR技术鉴定西葫芦杂交种子纯度

为了建立一套快速、简单、准确、高效的西葫芦种子纯度检测方法,以西葫芦'福美1号'及其亲本为试验材料,利用SSR分子标记技术鉴定杂交种子纯度。从114对SSR引物中筛选出了1对引物(SGSSR25),在杂交种和父、母本之间存在显著差异的条带,且杂交种含有父、母本的特异互补带型。利用该引物对23株'福美1号'杂交种进行纯度鉴定,结果为91.30%,与大田种植鉴定结果一致,表明该引物可用于'福美1号'杂交一代种子纯度的快速检测和准确鉴定,SSR分子标记技术应用于西葫芦杂交种子纯度检测具有可行性。     

应用SSR技术进行黄瓜杂交种种子纯度鉴定

种子纯度鉴定是保证种子质量的关键环节.随着育种进程的加快,黄瓜新品种数量不断增加,需要进行品种纯度鉴定的材料将会越来越多.以往纯度鉴定都是在田间进行,存在周期长、工作量大、易受环境因素的影响、表型特征会有一定程度偏差等问题,可能影响品种纯度鉴定的准确性,并直接影响到良种的推广;此外由于鉴定周期长,当年生产的种子往往要到次年才能销售,造成商机丧失.分子标记技术的快速发展为种子的纯度鉴定提供了一种更为快速、高效的方法[1～4],其中SSR标记技术是最为简便、可靠的鉴定方法之一.     

种子纯度鉴定的常用方法及其在甜菜上的应用展望

介绍了近些年主要应用在农业生产中的种子纯度鉴定方法,并指出每种方法的优缺点,以及对甜菜种子纯度鉴定方法的发展方向进行了展望．指出了SSR和SRAP将成为甜菜种子纯度鉴定的主要方向。     

辣椒SRAP分子标记的优化及在航椒4号种子纯度检测中的应用

为了对SRAP分子标记在辣椒中的应用进行优化,试验采用正交设计L16（45）,在4个水平上对影响辣椒SRAP反应体系的Taq酶浓度、Mg2＋含量、模板DNA用量、dNTP浓度及引物用量等5个因素进行了优化,并用单因素完全随机试验筛选各反应因素的最佳水平,建立了辣椒SRAP分子标记的最佳体系。结果表明,在10μL反应体系中,Taq酶最适浓度为1.5U、Mg2＋最适浓度为1.5 mmol/L、模板DNA最适用量为100ng、dNTP最适用量为0.3 mmol/L、引物最适浓度为0.1μmol/L。利用20个辣椒材料来验证此反应体系,6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在350～750 bp之间多态性高,且反应体系的稳定性和重复性好。通过优化的SRAP分子标记对F1代辣椒种子航椒4号进行纯度检测,检测结果为98%,与其田间检测结果100%十分接近。表明了SRAP分子标记技术是鉴定辣椒一代杂种纯度的有效方法,具有准确、可靠、快速的特点,在辣椒杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。     

结球甘蓝西园4号种子纯度的SSR鉴定

利用SSR分子标记技术对结球甘蓝西园4号及其亲本的DNA进行扩增,从90对SSR引物中筛选出1对具有双亲条带差异明显的引物O112-G04,构建了清晰的DNA扩增指纹图谱,并对西园4号种子进行了纯度鉴定,与田间形态学的鉴定结果高度一致,种子纯度均为96.7 %。结果表明,利用这对引物对结球甘蓝西园4号种子的纯度鉴定是可行的。     

'镇研958六号'辣椒杂交种纯度的SRAP鉴定

以辣椒品种‘镇研958六号’及其父母本为材料,采用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记方法,建立基于DNA分子标记的‘镇研958六号’辣椒品种纯度鉴定方法,以期为提高大田制种纯度提供分子辅助工具。结果发现,从30 对SRAP标准引物中筛选出引物E3M1能区分‘镇研958六号’及其亲本;应用此引物对‘镇研958六号’杂交种进行纯度鉴定,其纯度结果为98%,与田间鉴定结果基本一致。结果表明,引物E3M1可以作为鉴定‘镇研958六号’纯度的分子标记,SRAP分子标记用于辣椒杂交种子纯度鉴定是可行的。     

结球甘蓝西园4号种子纯度的SSR鉴定

利用SSR分子标记技术对结球甘蓝西园4号及其亲本的DNA进行扩增,从90对SSR引物中筛选出1对具有双亲条带差异明显的引物O112-G04,构建了清晰的DNA扩增指纹图谱,并对西园4号种子进行了纯度鉴定,与田间形态学的鉴定结果高度一致,种子纯度均为96.7%.结果表明,利用这对引物对结球甘蓝西园4号种子的纯度鉴定是可行的.     

黄瓜新品种‘津优401’种子纯度的SSR鉴定

为了改变现有的田间检测周期长以及受气候条件影响的弊端,建立一种高效、准确的纯度检测方法,采用SSR分子标记技术对黄瓜新品种‘津优401’种子的纯度鉴定结果进行比较。结果表明:在备选的100对引物中有12对引物在亲本间出现多态性互补的条带,尤其引物N67和N87,由于它们的特异性强、条带清晰的特点以及与田间鉴定的高度吻合被选为鉴定‘津优401’黄瓜新品种种子纯度的标记引物,从而将以往该品种种子纯度鉴定的时间从2~3个月缩短到4~5 h。     

利用SSR技术鉴定西瓜甜瓜种子纯度

利用SSR分子标记技术对西瓜‘W1806’与甜瓜‘M1805’各3个批次及其亲本间的多态性进行引物筛选和种子的纯度鉴定。结果表明,在28对西瓜的SSR引物中,有5对引物在西瓜‘W1806’的F1代与亲本之间有很好的多态性。其中BVWS00839引物特异性好,条带清晰,父母本条带间隔明显,即作为3个批次的西瓜纯度鉴定的引物,其鉴定纯度分别为99.47%、98.96%和97.92%;在18对甜瓜的SSR引物中,只有1对CMBR052引物在F1代扩出的条带为典型的双亲互补型条带,故用该引物对甜瓜进行纯度鉴定,其纯度分别为97.90%、96.80%和97.40%。与田间鉴定结果的吻合率都在98%以上。这2个材料的吻合率说明SSR分子标记技术对西瓜和甜瓜纯度鉴定结果都是可靠的。     

利用SSR分子标记技术快速鉴定津甜100甜瓜种子纯度

利用SSR分子标记技术鉴定甜瓜种子纯度,是甜瓜种子生产、销售过程中的关键环节,对甜瓜产业发展具有重要意义。利用津甜100亲本对24对甜瓜SSR引物进行多态性筛选,得到多态性高、在F₁代中条带差异较大的2对引物。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对F₁群体进行鉴定,鉴定结果与田间鉴定结果一致,纯度均为99.0%。因此,笔者筛选得到多态性高、条带差异大的2对引物,可鉴定津甜100甜瓜种子。     

RAPD和SRAP分子标记在真姬菇菌种鉴定中的应用

利用RAPD及SRAP分子标记技术对从国内外收集到的12个真姬菇菌株进行遗传多样性分析.结果表明,20条RAPD引物共扩增出多态性条带285条,18对SRAP引物共扩增出多态性条带176条.在相似系数0.800水平时,RAPD和SRAP分子标记分别将12个真姬菇菌株分为5个和6个类群.两种方法均适用于真姬菇种内鉴定,而SRAP标记较RAPD标记稳定性好,更适于真姬菇的种内鉴定.