半胱氨酸对猪卵母细胞体外发育潜力及谷胱甘肤水平的影响

探讨mTCM199中添加不同浓度的半胱氨酸对猪卵母细胞体外成熟及体外受精的影响,并研究了体外成熟过程中谷胱甘肽(GSH)浓度的变化.结果表明:0.10 mg/mL半胱氨酸可明显改善猪卵母细胞体外成熟和体外受精的效果(P<0.05),经测定,猪卵母细胞内GSH浓度随着半胱氨酸浓度提高与培养时间的延长而逐渐升高,且添加0.05 mg/mL和0.10 mg/mL半胱氨酸的猪卵母细胞培养48 h时可使GSH浓度达到最大值(P<0.05).因此,GSH的浓度可作为卵母细胞细胞质成熟度的一个特征性指标,且0.10 mg/mL半胱氨酸的猪卵母细胞成熟培养48 h的效果最好.     

羊体外胚胎高效生产技术研究现状

体外胚胎生产技术作为胚胎工程技术的基础,在提高繁殖潜力、加速良种繁育等多方面具有重要意义,包括卵母细胞采集、体外成熟、体外受精、体外胚胎培养等技术。文章主要介绍羊体外胚胎高效生产技术研究现状,分析卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养影响因素,并提出了羊卵泡的预测标记、卵母细胞新型质检手段、模拟羊体内环境的培养体系,以期为羊卵母细胞体外培养技术的研究及在胚胎高效生产中的应用提供参考。     

影响山羊卵母细胞体外成熟和受精的因素

卵母细胞体外成熟作为胚胎体外生产技术的开始步骤,具有非常重要的作用。卵巢卵母细胞体外成熟的情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率。而卵母细胞的体外成熟和受精是在众多因素共同作用下完成的,当其中任何因素发生     

卵母细胞体外成熟的影响因素

随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。     

糖对牦牛卵母细胞体外成熟及其发育能力的影响

试验旨在研究不同种类、不同浓度的糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响,进一步探索和优化牦牛卵母细胞培养体系,提高卵母细胞体外成熟和胚胎生产效率。在牦牛卵母细胞成熟液中添加不同浓度（0、5和10 mmol/L）的葡萄糖或蔗糖,培养24 h或预培养2 h后移入无糖培养基中继续培养22 h,统计卵母细胞体外成熟率及体外受精（IVF）后的胚胎卵裂率和囊胚率。结果显示,与对照组（0 mmol/L）相比,5和10 mmol/L葡萄糖组牦牛卵母细胞核成熟率和体外受精胚胎卵裂率均显著提高（P<0.05）,10 mmol/L葡萄糖组的囊胚率最高,且与对照组相比差异显著（P<0.05）。添加10 mmol/L蔗糖可以显著提高牦牛卵母细胞核成熟率（P<0.05）,但胚胎囊胚率与对照组相比差异不显著（P>0.05）。此外,用10 mmol/L葡萄糖预处理牦牛卵母细胞后其核成熟率、胚胎卵裂率和囊胚率最高,且均显著高于对照组（P<0.05）。由此可见,糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育有一定的影响,在成熟过程中添加适当浓度的糖能提高卵母细胞成熟率及体外受精胚胎发育能力。     

牛卵母细胞体外受精和培养技术

本文综述了牛卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展,包括精子的体外获能、卵母细胞成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等,并且对影响该技术的主要原因进行了分析。     

影响牦牛卵母细胞体外成熟的因素分析

牦牛是青藏高原地区的重要畜种,为牧民提供生产和生活资料。但是牦牛的繁殖力较低,通常为2年1胎或3年2胎,选育改良进展缓慢。卵母细胞体外成熟培养作为体外受精和胚胎发育必不可少的步骤,已被应用于牦牛科学研究和繁殖生产上。由于牦牛卵母细胞体外成熟能力远远低于体内,因此完善体外培养条件,提高牦牛卵母细胞体外培养的成熟率,对牦牛繁育技术研发和育种生产都有重要的意义。本文从卵巢保存、卵母细胞采集、卵母细胞培养、培养基添加剂等方面对卵母细胞体外成熟的影响因素进行了分析,旨在提高卵母细胞体外成熟发育质量,为牦牛体外受精技术提供技术参考。     

柠檬苦素对小鼠卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50 μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0 μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0 μmol/L Lim组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P＜0.05),后续试验均用20 μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P＜0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P＜0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P＜0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P＜0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P＜0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20 μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。     

LIF对小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的影响

卵母细胞的体外成熟、体外受精(IVM/IVF)技术广泛应用于发育生物学的研究, 如受精后早期胚胎的营养积累、早期基因表达调控、减数分裂能力的获得等, 也可以用于畜牧生产中优良种群的扩群.影响卵母细胞体外成熟与卵裂的因素众多,卵母细胞的体外成熟率通常为40%～80%,优化培养条件是提高体外培养卵母细胞成熟与卵裂的关键,大量的研究是通过在培养液中添加细胞因子来促进卵母细胞成熟与卵裂[1].本文通过不同浓度LIF对小鼠卵母细胞体外成熟、体外受精的观察,对其体外成熟率、体外受精率进行比较, 从而为提高哺乳动物卵母细胞的体外成熟、体外受精效果提供参考依据.     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

在体外受精过程中,绵羊卵巢卵母细胞体外成熟情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率.影响卵母细胞成熟的因素很多,主要包括卵泡大小、卵巢的发育阶段、培养基、激素生长因子等.试验从屠宰场采集屠宰后的绵羊卵巢,抽取卵巢表面卵泡中的卵母细胞,选择一级和二级卵母细胞进行体外成熟培养.试验证明,绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养时间以24h为佳,FCS浓度以20%最适宜.试验还发现无菌条件、温度、湿度以及在体外对卵母细胞的操作时间对试验的结果都有很大的影响.通过试验初步探明了适宜绵羊卵母细胞体外成熟的一些基本条件,为全面掌握绵羊卵母细胞体外成熟培养以至整个体外受精技术的完善和规范提供了有益的资料.     

Influence of Cysteamine on In Vitro Maturation, In Vitro and In Vivo Fertilization of Equine Oocytes

The effect of cysteamine on in vitro nuclear and cytoplasmic maturation of equine oocytes collected by transvaginal ultrasound guided follicular aspiration was assessed. Oocytes were matured in vitro with (cysteamine group) or without (control group) cysteamine. The nuclear stage after DNA Hoechst staining, penetration rates after two different in vitro fertilization (IVF) techniques (IVF media with ionophore and Hepes buffer with heparin) and the embryo yield following oocyte intra-oviductal transfer were used as a criterion for assessing nuclear and cytoplasmic maturation, respectively. Contrary to the data described in other domestic species, there was no effect of cysteamine on in vitro nuclear maturation, IVF or in vivo embryonic development under our conditions. Ovum pick up yields (52%) and maturation rates (control group: 47% and cysteamine group: 55%) were similar to those previously reported. From 57 oocytes transferred to the oviduct in each group, the number of embryos collected was 10 (17%) in the control group and five in the cysteamine group (9%). Those two percentages were not statistically different (p > 0.05). No effect of IVF technique was seen on the success rate (6%) in each group.     

猪胚胎的体外生产技术

应用体外受精技术,可以有效地利用屠宰的青年母猪卵巢巾的未成熟卵,大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速我国良种猪群的繁殖是一项行之有效的胚胎工程技术。借鉴国内外实验室生产猪胚胎的经验及根据我们实验室的实践,本文比较详细地叙述了体外受精猪胚胎的生产过程,包括卵母细胞的获得、培养、精子获能、体外受精以及受精后的体外培养、冷冻保仃与移植等。     

In Vitro Cerclage Wiring Analysis

The ability of six different instruments to apply a cerclage wire under tension to a tension gage was compared. The loop knot produced greater final wire tension than the twist knot, both before and after bending. No significant difference in tension was found between the Swiss Osteo and A.S.I.F. instruments. The Rhinelander and Richards instruments gave approximately the same tension before the bend. The Rhinelander, Richards, and Vise Grip instruments showed no statistical difference in tension produced after the bend. The Bowen instrument developed the least amount of tension, both before and after bending the twist. All twist knots lost a significant amount of tension during the bending process. The twist-type knots that were twisted until breakage in the middle of the knot produced greater tension than those that were cut once they were tight. Cutting the twisted knot caused a significant decrease in wire tension. No correlation was found between operator pull and final cerclage wire tension.     

降血脂益生菌体外筛选模型的建立

心血管疾病是对人类危害最大的疾病之一，而血清胆固醇含量的升高是引起这一疾病的重要因素。实验证明特殊种类益生菌具有降低血清胆固醇的功能。不过还需要大量的人体临床实验来证实。本文的工作是建立一种筛选具有降血清胆固醇功能益生菌的体外模型。在前人实验结论的基础上。经过大量实验我们建立了从菌种分离，培养，扩增到最后培养物中胆固醇含量测定的一整套实验方法；菌源经过72小时的平板厌氧培养后分离出单菌落，再经72小时的平板划线扩增，然后接种到含有胆固醇和牛胆汁的液体培养基中培养24小时，最后用高铁硫酸比色法测定培养物中的胆固醇含量。目前这个体外模型已经通过动物实验的验证，是行之有效的。     

山羊卵母细胞体外成熟的研究

在38℃和39℃不同温度条件下培养山羊卵母细胞,结果表明:在38℃和39℃下成熟率分别为63.6%和57.3%,二者之间差异不显著,说明只要培养温度在山羊正常体温的变动范围内,对其卵母细胞的成熟率没有影响;在38℃温度条件下用10?S的M199培养液成熟率为62.5%,而10 mg/ml BSA的M199培养液成熟率为58.7%,二者之间差异不显著,说明无血清培养可以代替血清培养.     

牛腔前卵泡的体外培养

通过在α- MEM和 D- MEM/ F1 2 基础液中添加不同比例的 ITS、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤和血清 ,观察了不同基础液对牛腔前卵泡体外生长发育的影响 ,从而筛选出较好的组别。在筛选出的基础液组别中添加 3个水平的FSH、L H、E2 ,观察了其对牛腔前卵泡体外生长发育的影响。结果表明 ,α- MEM和 D- MEM/ F1 2 2种基础液中以α-MEM为好 ,不同的基础培养液组合对牛腔前卵泡的体外培养有一定的影响。添加不同水平的激素对牛腔前卵泡体外培养也有显著影响。试验初步筛选出最佳的培养液成分为α- MEM ITS(I- 5 m g/ L ,T- 5 mg/ L ,S- 5μg/ L ) 丙酮酸钠(0 .2 3mmol/ L) 谷氨酰胺 (1.5 m mol/ L) 次黄嘌呤 (2 m mol/ L) 血清 (7.5 % ) FSH(0 .2 5 mg/ L) L H(5 IU/m L ) E2 (0 .5 mg/ L )。     

Developmental Capacity In Vitro of Prepubertal Oocytes

A 2-year comparative study was carried out to evaluate the effect of ovary size, follicle size and oocyte quality of 3-month-old Simmental calves and the efficiency of using calf ovaries in an in vitro fertilization (IVF) programme. We evaluated the effects of different concentrations of follicle-stimulating hormone (FSH) and oestradiol-17beta (E-17beta) in the maturation medium on the in vitro development of calf oocytes into morula and blastocysts. The proportion of recovered oocytes (62.1%; 42.8%; 25.3%) and the percentage of good quality cumulus oocyte complexes (84.2%: 59.8%; 45.9%) decreased significantly (P < 0.01) with decreasing ovary size (L, M and S). The rates of two or more cells on Day 2 and of blastocysts on Day 7 and Day 9 were significantly lower (P < 0.01) for calf oocytes (61.5%; 18.9%: 15.9%) compared with those from sexually matured females (70.1%: 32.3%; 22.2%). Calf oocytes. matured in medium supplemented with 20 microg/ml or 10 microg/ml FSH plus 2 microg/ml E-17beta had higher rates of cleavage on Day 2 (64.1% and 64.7%) and blastocysts on Day 7 (24.5% and 22.4%) than the control supplemented with 10 microg/ml FSH (55.6% and 19.2%, respectively). Groups supplemented with 20 microg/ml FSH plus 2 microg/ml E-17beta and 10 mg/ml plus 4 mg/ml E-17beta showed a significantly lower developmental rate of blastocysts on Day 7 (14.6% and 14.5%). High concentrations of E-17beta (4 microg/ml) resulted in a significantly lower development of blastocysts on Day 9 (8.1%) and hatched blastocysts on Day 13 (3.5%) (P < 0.01). We conclude that the proportion of calf oocytes obtained from immature animals and their suitability for IVF are lower than those of cows. Thus, the use of oocytcs from sexually immature females would decrease the relative efficiency of IVF programmes. Supplementation with high concentrations of FSH can improve the maturation and developmental capacity of oocytes from prepubertal calves.