肝包虫囊周肝组织遗传特性分析

为了研究肝包虫囊周肝组织的遗传特性,使用RAPD技术对病旁肝脏组织和外囊组织基因组DNA进行检测,以期获得病灶组织中基因变化的信息.结果显示,在病旁肝脏组织基因组DNA中,出现了一些多态性位点的缺失和部分多态性位点的增加;在外囊组织DNA只出现了多态性位点缺失的现象.     

文冠果枝条韧皮部蛋白质双向电泳体系的建立

以文冠果当年生硬枝韧皮部为材料,通过TCA/丙酮法提取总蛋白,研究了不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在胶条选择、蛋白质上样量和等电聚焦时间等方面进行了优化。结果表明,TCA/丙酮提取法适用于提取文冠果韧皮部组织总蛋白,得到的图谱背景低,蛋白质点清晰;样品溶解于含有尿素和硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著地提高蛋白质的溶解性,获得的总蛋白溶液浓度远大于裂解液Ⅰ提取的总蛋白溶液浓度。在适宜的时间范围用超声波破碎仪处理蛋白质粉溶液有助于大幅度提高裂解液中蛋白质的浓度。等电聚焦条件宜根据样品特性选择,80 000Vh能够使得文冠果韧皮部蛋白质双向凝胶碱性端的横条纹大大减少。     

日本囊对虾性腺蛋白质双向电泳的样品制备方法的改进

采用一种能同时提取RNA、DNA和Protein的试剂（RDP试剂）进行日本囊对虾性腺总蛋白质的制备，并通过双向电泳（2-DE）技术与传统的裂解液法比较提取效果．RDP法所得2-DE图谱清晰，条纹少，蛋白质点数多，而裂解液法存在横向和纵向拖尾，其碱性端蛋白质点大量缺失，说明RDP法能有效去除蛋白质样品中盐离子、脂类等干扰成分．结果不仅为后续的日本囊对虾性腺蛋白质组学研究提供了技术保障，也为其他甲壳类动物性腺总蛋白质的提取提供了借鉴．     

宝石鲈肝胰脏蛋白质双向电泳方法的摸索与优化

选取宝石鲈肝胰脏作为样品,通过优化裂解配方及摸索裂解液与样品的最适比例,设计两个等电聚焦程序,建立和优化宝石鲈鱼肝胰脏蛋白质双向电泳实验方法,为宝石鲈肝胰脏内目标蛋白的研究提供参考。结果表明,采用裂解液配方:8 M Urea,2 M Thiourea,0.5%(W:V)CHAPS,40 mMTris-Base,1%DTT,2%(W:V)Pharmalyte pH 3～10,1 mM PMSF;裂解液和样品液比为1∶3时裂解效果较好;等电聚焦程序I(S1:0～500 V,500 V.h;S2∶500 V,500 V.h;S3∶500～3 500 V,10 000V.h;S4∶3 500 V,50 000 V.h,S5∶3 500～5 000 V,8 000 V.h)具有最好的等电聚焦效果。     

银杏小孢子叶球蛋白提取和双向电泳体系优化(Ⅱ)

以银杏小孢子叶球为材料,比较了不同的提取的方法、蛋白质裂解液组成、pH值范围以及不同质量浓度SDS-PAGE凝胶对双向电泳的影响.结果表明:TCA/丙酮/酚法比TCA/丙酮法更适合于银杏小孢子叶球蛋白的提取;含有硫脲的蛋白质裂解液Ⅱ,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出748个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ...     

绵羊卵泡液蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析

为了获得绵羊卵泡液蛋白质组表达图谱,采用2-D clean-up kit法和热的SDS直接裂解法制备卵泡液蛋白质样品,进行双向凝胶电泳,运用PDQuest8.0对图谱进行初步分析,最后与血浆蛋白质表达图谱做初步对比.结果显示:热的SDS直接裂解法处理的蛋白质样品图谱蛋白质斑点较多,更能真实反映卵泡液蛋白质组的全貌;卵泡液蛋白质图谱与血浆蛋白质图谱匹配率达75.62%.研究表明,热的SDS直接裂解法处理蛋白质样品效果较好;卵泡液蛋白质成分与血浆蛋白质成分比较相似,可以用处理血浆样品的方法来优化处理卵泡液蛋白质样品.     

适于SDSPAGE分析的高粱叶片蛋白质提取方法

为了探索适于高粱叶片蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析的样品制备方法,对TCA/丙酮沉淀后的蛋白质分别用裂解液Ⅰ(尿素+硫脲+CHAPS+DTT)和裂解液Ⅱ(尿素+DTT)2种裂解液进行裂解,用改良的Bradford法进行定量分析,并进行SDS-PAGE分离检测。结果表明,裂解液Ⅰ所得蛋白质质量浓度(2.538g/L)高于裂解液Ⅱ所得蛋白质质量浓度(1.905g/L),且两者呈极显著差异(P<0.05),但裂解液Ⅰ所得蛋白质电泳条带出现1条杂带;而裂解液Ⅱ所得蛋白质能满足上样要求且电泳条带清晰无杂带。因此,TCA/丙酮沉淀并用裂解液Ⅱ进行裂解的方法适用于高粱叶片的SDS-PAGE分析。     

金鱼胚胎蛋白质双向凝胶电泳方法建立及优化

以金鱼胚胎为材料,以不同样品制备方式、裂解液成分、固相pH梯度胶条的选择、凝胶浓度为侧重点,建立并优化金鱼胚胎总蛋白质组最佳双向凝胶电泳技术条件.研究表明,采用匀浆器匀浆含硫脲和NP-40裂解液提取蛋白,应用pH值为3～10的非线性IPG胶条和浓度14%的SDS-PAGE凝胶进行双向电泳,经优化电泳电流、时间等参数后,获得了重复性和分辫率理想的金鱼胚胎总蛋白质双向电泳图谱,为金鱼胚胎蛋白质组分析莫定了基础,为揭示金鱼单倍体发育异常的机制提供了技术保障.     

2种提取棉花籽粒中蛋白质简易方法的比较及确立

植物籽粒中的蛋白质含量的多少直接决定着作物产量的高低,因此寻求籽粒中蛋白质快速、便捷的测定方法是目前急需解决的首要问题。通过对动物组织提取蛋白质方法的研究,利用配制动物提取蛋白的裂解液来提取植物籽粒中的蛋白质,和常规的上样缓冲液提取方法相比,裂解液法提取的蛋白质条带多而且清晰度高,电泳效果好,且操作便捷,有利于在实际操作中应用和推广。     

绵羊卵泡液蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析

为了获得绵羊卵泡液蛋白质组表达图谱,采用2-Dclean-upkit法和热的SDS直接裂解法制备卵泡液蛋白质样品,进行双向凝胶电泳,运用PDQuest8.0对图谱进行初步分析,最后与血浆蛋白质表达图谱做初步对比。结果显示：热的SDS直接裂解法处理的蛋白质样品图谱蛋白质斑点较多,更能真实反映卵泡液蛋白质组的全貌;卵泡液蛋白质图谱与血浆蛋白质图谱匹配率达75.62%。研究表明,热的SDS直接裂解法处理蛋白质样品效果较好;卵泡液蛋白质成分与血浆蛋白质成分比较相似,可以用处理血浆样品的方法来优化处理卵泡液蛋白质样品。