甘薯瘟两种不同致病型的初步研究

为明确甘薯瘟Ⅰ型菌与Ⅱ型菌接种同一甘薯品种后具有不同致病力的原因,对2种菌系进行了形态学观察和基因组DNA多态性差异分析.研究结果如下:(1)用甘薯瘟Ⅰ型菌与Ⅱ型菌分别接种金山57,结果表明金山57对Ⅰ型菌表现高抗,对Ⅱ型菌表现高感;(2) 400倍显微镜和10 000倍电镜下观察结果表明,2种菌均为杆状菌、有极生鞭毛,两端钝圆或尖圆,形态学结构无差别;(3)经16SrDNA扩增检测,确认所提取2个菌系的DNA为细菌DNA,运用RAPD分子标记方法对2个菌系的基因组DNA进行PCR扩增,10条RAPD引物共扩增出104条带,其中多态性条带有25条,多态性条带比率为24.04％,2个菌系基因组DNA之间存在明显多态性,基因组DNA之间的差异可能是导致其致病力显著不同的内在原因.     

甘肃省玉米大斑病菌交配型组成及遗传多样性分析

为明确甘肃省玉米大斑病菌交配型组成及遗传结构,利用交配型鉴定特异引物对采自该省不同地区的玉米大斑病菌进行交配型测定,并采用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)分子标记技术对供试菌株进行遗传多样性分析。结果表明：甘肃省玉米大斑病菌主要包括3种交配型,即A交配型、a交配型和Aa交配型,其比例约为8∶8∶1。24条ISSR引物共扩增出136条条带,平均每个引物扩增出5.67条,其中多态性条带134条,多态性条带比例为98.53%。利用PopGen 32软件分析发现甘肃3个地区玉米大斑病菌间的亲缘关系更近,遗传距离均小于0.08;陇南地区与陕西省的菌株有更高的遗传相似度,为0.933 8;用NTSYS-pc软件对陇东地区的菌株聚类分析,发现ISSR类群的划分与菌株交配型间并没有直接关系。说明玉米大斑病菌遗传类群和交配型之间无明显相关性,但与菌株地理来源有一定的相关性。     

马铃薯晚疫病菌交配型检测方法比较

晚疫病是云南省马铃薯第一大病害,近年在云南省种植区有逐年加重的趋势,从1998年发现晚疫病菌的2种交配型以来,有性生殖的风险也随之增加。文章以2010年来自云南省马铃薯主产区的86个晚疫病菌菌株为材料,以对峙培养检测法检测结果为准,比较分析了CAPs标记和A2特异性DNA片段扩增方法的准确性。研究证实了2种分子标记检测方法均可以准确检测出晚疫病菌A1和A2交配型,但不能区分A2和A1A2交配型。A2交配型占总菌株的82.56%,在云南省所有马铃薯主产区都存在,已成为云南省晚疫病菌群体中的优势交配类型。     

基于酯酶和ISSR技术的平菇单核菌株遗传多样性分析

应用酯酶同工酶和ISSR分子标记技术对69个野生平菇单核菌进行遗传多样性研究。结果表明,69个单核菌株的酯酶同工酶酶谱共检出6条酶带,多态性带型占83.3%;ISSR分子标记技术从7个ISSR引物中扩增出56条清晰的DNA片段,多态性位点占87.5%;2种方法的聚类结果显示,当GS值为0.67左右时,根据样本量的多少均可将69个单核菌株依此划分为A、B、C、D等4个类群;将交配型、酯酶同工酶和ISSR分子标记3种分类结果进行对比后发现,交配型为A2B2的P11、P12、P34、P59、P73、P85和P90这7个单核菌株均同属于一类,分类结果并没有严格按照交配型来进行归类。说明酯酶同工酶和ISSR分子标记技术可用于平菇单核菌株的遗传多样性研究,并可作为交配型鉴定的辅助手段,为平菇杂交育种过程中优良亲本单核体的选择提供理论依据。     

甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系优化与引物筛选

以甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)交配型菌株基因组DNA为模板,在单因素优化试验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,对影响甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系的Mg2+、dNTPs、引物、r Taq DNA聚合酶和模板用量5个因素进行优化,建立优化的甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系:DNA模板12.50ng、dNTPs 0.17mmol/L、引物0.46μmol/L、Mg2+1.7 mmol/L、r Taq DNA聚合酶0.85U、1×Buffer(Mg2+free),总体积25μL。应用优化体系从30条SCoT引物中筛选扩增条带清晰且多态性丰富的10条引物,并利用这10条引物对10份地理来源和寄主来源不同的甘蔗黑穗病菌交配型菌株基因组DNA进行SCoT标记,结果共扩增出86条带,多态性比率为58.67%,平均每条引物扩增8.60条。UPGMA聚类分析结果表明:在遗传相似系数为0.75的水平上,可将10个菌株分为3类,聚类结果与菌株的地理来源有一定的相关性。     

广东省烟草青枯茵的菌系和遗传多样性

从广东省韶关和梅州2个烟草产区采集了来自8个县市的共38个烟草青枯菌菌株，对病菌的生物型、致病型和遗传多样性进行了测定，结果表明广东烟草青枯菌全部为生物型Ⅲ。通过在红花大金元，K326，岩烟97和系3等4个烟草鉴别品种上的致病性反应，将广东烟草青枯菌分为强致病力、中等致病力和弱致病力3种致病型，其中以中等致病力菌株为主，占78．9％；强致病力菌株占13．2％；弱致病力菌株占7．9％。从116个RAPD通用引物中筛选出10条引物，用于对38个烟草青枯菌株DNA的RAPD分析，扩增条带表现出明显的多态性，条带主要聚集在0．3～4．0kb之间。聚类分析这38个菌株可分为2个组群，即组群A和组群B。组群A中又可以分为7个亚组（A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7）；组群B也含有4个亚组（B1、B2、B3、B4）。研究结果还表明，广东烟草青枯菌菌株RAPD组群的划分与菌株的寄主来源有一定的相关性，但与地理区域、生物型和致病型没有明显的相关性；生物型不能反映烟草青枯菌菌系的差异。 04—0463—06     

小麦条锈菌鉴别寄主Lee中抗性基因Yr7的微卫星标记

【目的】对近等基因系Taichung29*6/Lee对条锈菌（PST）菌系CYR27的抗性谱进行遗传分析，并运用微卫星技术对近等基因系Taichung29*6/Lee中的抗条锈性基因进行标记。【方法】将Taichung29*6/Lee 与Taichung29杂交、自交和测交并对双亲及其杂交后代进行苗期抗性鉴定。采用SSR技术，利用抗性供体Lee中含有目的基因Yr7的小麦抗条锈病近等基因系Taichung29*6/Lee，选用Yr7所在的2B染色体上88 对和Yr22、Yr23所在4D、6D染色体上22对SSR引物，对供试的Taichung29*6/Lee、Taichung29和Lee基因组DNA进行PCR扩增和电泳分析。【结果】根据F2分离群体的抗感单株分离比例，确定Taichung29*6/Lee对CYR27菌系的抗性为1个显性基因，2B染色体上的Xgwms526引物扩增出多态性谱带为Xgwms526/212bp和Xgwms526/216bp，并证明其DNA片段位点与抗条锈基因Yr7存在遗传连锁关系；用标记Xgwms526扩增F2作图群体的单株DNA，在75株抗病单株中，有22株扩增出A型带（Xgwm526-212bp），51株扩增出H型带（Xgwm526-212bp和Xgwm526-216），2株扩增出B型带（Xgwm526-216）；在31株感病株中，有4株扩增出H型带，27株扩增出B型带。【结论】通过Map Manager QTX 17b软件计算，确定Xgwm526标记位点与Yr7基因位点的遗传距离为5.3cM，标准差为2.3，LOD值为18.4。该标记Xgwm526可作为Yr7基因的SSR标记利用。     

云南省马铃薯晚疫病菌交配型分布及发生频率

1998－1999年，将云南省不同类型马铃薯主要种植区内12个马铃薯产区分离的大量晚疫病菌菌株与A1和A2交配型标准菌株进行了交配型测定。 结果表明：253个晚疫病菌株中，A1交配型有204株，仍为优势侵染病原，分布于所有马铃薯产区；A2交配型菌株41株，发生频率为16．2％，除昭通、沾益、嵩明、寻甸和大理外，其余7个产区均有分布。8个自育型菌株被检测到，对其形态特征及有性结构分别进行了描述。本文还讨论了A2交配型的扩散对云南省马铃薯生产造成的潜在威胁，并据此提出了对种薯调运的一些建议。     

新疆小叶桦及其新变种的ISSR分析

用ISSR(inter-simple sequence repeat)技术对60份小叶桦(Betula microphylla Bunge)及变种进行了系统进化分析;从100个引物中筛选出8个可以扩增出多态、重复性好的引物;用该8个引物对全部供试材料的DNA多态性进行检测,共扩增出3 029条谱带,其中多态性条带为2 525条,多态性比率为83.4%。聚类分析结果表明,供试材料相似系数介于0.84~0.90之间,平均相似系数为0.85。取相似系数0.847可将供试材料分为6个类群。小叶桦及其变种在DNA水平上的遗传多样性与形态学特征较一致。该研究为小叶桦类群间的鉴别和优良类群确定及杂交育种等提供了重要的理论依据。     

河北省马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans)A2交配型的分布

对 1996— 1997年采自河北省马铃薯主产区的 2 8个马铃薯晚疫病菌的菌株在白云豆 -V8蔬菜汁培养基上进行了交配型测定。结果发现 ,在 2 8个菌株中 ,18个菌株为A1交配型 ,占被测总菌株数的 6 4.3% ;10个菌株为A2交配型 ,占被测总菌株数的 35 .7% ,其中 9个菌株采自承德市围场县 ,1个菌株采自张家口市康保县。说明在河北省的 2个马铃薯主产区均存在A2交配型 ,且在同一块田中同时存在A1和A2交配型。同时还发现该病菌单位面积产生卵孢子的数量差异很大 ,为 10～ 2 30 0个·cm-2 。并对藏卵器、雄器、卵孢子的大小、颜色、形态等进行了描述     

福建致病疫霉（Phytophthora infestans）群体遗传多样性分析

从150条RAPD随机引物中筛选出多态性引物12条,对分离自福建省10个不同市(县)的番茄或马铃薯晚疫病标样中的63个致病疫霉菌株进行遗传多样性分析,共产生92条RAPD条带,其中85条为多态性条带,多态检测率为92.4%。利用NTSYSpc Version 2.1软件对供试菌株间的遗传距离进行聚类分析并构建系统树状图,供试63个菌株被划分为6个遗传聚类组,RAPD分组与菌株的地理来源、寄主均无明显相关性。聚类分析结果表明,福建省不同地区的致病疫霉菌株整体亲缘关系相近,但各菌株间存在遗传差异,病原菌随病果运输迁移及A2交配型的存在可能是导致这种现象的原因。     

Analysis on Genotypic Differentiation of Phytophthora infestans by Using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)

A total of 104 isolates including two Korean isolates and three Japanese isolates of Phytophthora infestans collected from Heilongjiang and Jilin Provinces from 2006 to 2008 were used to determine their mating types,metalaxyl resistance,and RAPD genotypes.All the isolates of P.infestans collected from Heilongjiang and Jilin Provinces belonged to A 1 mating type,and no A 2 mating type was detected.Frequencies of metalaxyl resistant isolates were 94.4%,47.8% and 75.0% in 2006,2007 and 2008,respectively.Accord...     

几种植物上串珠镰孢霉群体遗传结构的比较

用9条引物对不同来源的串珠镰孢霉菌菌株进行RAPD扩增,共产生88个条带的RAPD分子标记,其中97.73%具有多态性.根据RAPD谱带计算出菌株间的遗传相似性进行聚类分析表明,整个群体的多态性与菌株的寄主和地区来源间不存在相关性.而分别以寄主和交配群划分的不同群体进行聚类时,A、D两交配群体间遗传差异较小,遗传变异量为0.0538:寄主为水稻和玉米的菌株群体问遗传差异最大,遗传变异量为0.2530;在A、D交配群中,亚群体的划分与玉米寄主有一定的相关性.     

马铃薯晚疫病菌群体遗传结构研究进展

 本文较全面地综述了马铃薯晚疫病菌的交配型、生理小种及其对甲霜灵的敏感性等表现型群体遗传结构特征的研究进展，阐述了世界各国晚疫病菌交配型的分布、生理小种组成及病菌对瑞毒霉抗性菌株的出现频率。同时综述了几种分子标记，如mtDNA指纹、RFLP、RAPD、AFLP和SSR在研究晚疫病菌基因型及遗传多样性方面的应用及研究成果。并指出了中国今后对马铃薯晚疫病菌研究工作的重点。     

石斛种质资源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD技术对10种石斛种质资源的遗传多样性及亲缘关系进行了分析。从100条10bp的RAPD引物中筛选获得17条多态性引物,对石斛属的10个种的基因组DNA进行扩增。共获得200条多态性带,平均每个引物产生11.8个多态性条带。材料间遗传相似系数变化范围为0.356～0.676。根据RAPD标记的结果,采用UPGMA法进行聚类分析,将石斛属的10个种区分开来,划分为4类。结果表明:RAPD标记技术较好地从分子水平上揭示石斛种质资源的遗传背景、亲缘关系。     

棉花黄萎病菌田间动态的分子监测

 分别于1994年3月和1995年3月从同一棉田,采集分离了48个大丽轮枝菌菌株.应用RAPD技术,从240个随机引物中筛选了17个扩增效果好的引物,对供试菌株进行了DNA指纹分析.结果表明:17个引物对48个菌株扩增出120条DNA分子片段,其中43条分子片段为多态带,占35.83%.将扩增结果输入计算机,用PHYLIP分析软件(3.5版本),UPGAME程序进行类聚分析,结果表明95年的5个菌株与其它菌株存在明显的遗传差异.     

18个黑麦草品种(系)的RAPD分析

用RAPD分子标记技术对18个黑麦草(Loluim sp)品种进行遗传多样性研究.从110个10 bp的随机引物中筛选获得26个多态性引物,然后对18份黑麦草种质资源的基因组DNA进行扩增,共获得197条DNA扩增片断带.其中多态性带187条,平均多态检出率为94.9%.18份材料的Jaccard相异系数为0～0.846 7,采用UPGMA法聚类分析,结果显示:雅晴、特高、沃土、潘多拉、安格斯、意大利黑麦草、邦德、普通一年生、嘉宝、绿神、普通二倍体、小黑麦为一群,匹克、凯琳特、顶峰、明星、首相为一群,冬牧70为单独一群.     

4种卫矛属园林植物的RAPD分析

卫矛属(Celastraceae L.)植物为常绿灌木或稀小乔木,以其对寒、盐、有害气体等逆境的强抗性而为人们所关注。但是,林木品种真实性和纯度的鉴定已经成为困扰苗木质量管理最突出的问题之一。笔者用RAPD分子标记对4种卫矛属植物进行基因组DNA遗传多样性分析,从35个随机引物中筛选出扩增谱带清晰并呈现多态性的20个随机引物,每个引物产生1~10条RAPD片段,多态性条带占67.61%。利用UPGMA聚类法对4种卫矛属植物的176条谱带进行聚类分析。结果表明,北海道黄杨和扶芳藤聚类成一组,大叶黄杨和金心黄杨聚类成另一组。可见,RAPD技术对卫矛属植物的分类鉴定和遗传多样性评价有效可行。     

新疆梨种质资源亲缘关系的ISSR和RAPD分析

[目的]探讨新疆梨种质资源亲缘关系以及遗传多样性,旨在为供试梨资源的分类提供科学依据.[方法]采用ISSR和RAPD分子标记对48份梨种质资源进行聚类分析和遗传关系研究.[结果]14条ISSR引物共扩增出113条清晰的谱带,其中101条显示多态性,平均每个引物扩增出7.2条多态性谱带.19条RAPD引物共扩增出163条清晰的谱带,其中多态性谱带138条,平均每个引物扩增出7.2条多态性谱带.基于ISSR和RAPD两种标记,利用UPGMA分别构建了48份梨资源的聚类树状图.ISSR和RAPD分别聚类以及两种标记混合聚类均将48份梨种质分为3类:第Ⅰ类群中包括1份种质;第Ⅱ类群中包括23份种质;第Ⅲ类群中包括24份种质.[结论]两种标记适合于梨种质资源亲缘关系和遗传多样性分析,可为梨资源的开发利用及新品种的选育提供科学依据.     

27种大麻资源的RAPD聚类分析

采用RAPD技术对27个大麻品种进行了分类研究。从300个10bp随机引物中筛选出34个扩增效果较好的引物进行扩增,共产生261条带,其中233条为多态性带,占89．27％,根据扩增结果构建反映品种间亲缘关系的UPGMA聚类图,27个品种可划分为3大类。