中药多糖对人工感染大肠杆菌和金黄色葡萄球菌小鼠的免疫增强作用研究

目的:通过测定感染大肠杆菌或金黄色葡萄球菌小鼠服用黄芪多糖、淫羊藿多糖前后的IgG水平、脾脏指数等,探讨黄芪多糖、淫羊藿多糖对小鼠免疫功能的影响。方法:大肠杆菌组:设有空白对照组、黄芪多糖组、淫羊藿多糖组、黄芪-淫羊藿多糖组、黄芪多糖大肠杆菌组、淫羊藿多糖大肠杆菌组、黄芪-淫羊藿多糖大肠杆菌组、空白大肠杆菌组,取80只昆明白雌鼠,平均分为8组,每组10只。金黄色葡萄球菌组的分组同大肠杆菌组。实验期为8 d,分别于第1、4、7天进行腹腔注射,最后一次腹腔注射完毕24 h,处死小鼠,测定体质量、脾脏质量,计算脾脏指数,观察小鼠免疫器官质量的变化;用ELISA法检测小鼠血清中IgG水平的变化。结果:黄芪-淫羊藿多糖金黄色葡萄球菌组比空白金黄色葡萄球菌组小鼠血清中IgG含量显著提高(P0.05),黄芪-淫羊藿多糖组比空白对照组小鼠血清中IgG含量显著提高(P0.05);黄芪多糖大肠杆菌组、淫羊藿多糖大肠杆菌组比空白大肠杆菌组小鼠血清中IgG含量显著提高(P0.05),黄芪-淫羊藿多糖组比空白对照组小鼠血清中IgG含量显著提高(P0.05);黄芪多糖组、黄芪-淫羊藿多糖大肠杆菌组、黄芪多糖金黄色葡萄球菌组均能够增加小鼠免疫器官质量。结论:黄芪多糖、淫羊藿多糖对小鼠具有免疫增强作用。     

黄芪和淫羊藿超微粉粉体粒度及破壁情况研究

应用JL 9200激光粒度分析仪和扫描电镜对黄芪和淫羊藿两种中药超微粉的粉体粒度及其破壁情况进行了初步研究。结果表明,黄芪和淫羊藿两种中药超微粉的粒度分布中心D50 分别为6.82μm和8.40μm,且90%以上的两种中药粉体的粒径大小均未超过40.72μm。经电镜观察,两种中药超微粉的破壁情况良好,均难以看到完整的细胞形态。     

中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响

为筛选增强免疫作用较好的中药成分和研制新型复方中药成分免疫增强剂,比较了4种浓度的当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶     

响应面法优化纤维素酶辅助提取淫羊藿多糖工艺

利用纤维素酶辅助热水浸提法从淫羊藿中提取淫羊藿多糖,在单因素试验结果的基础上,选择酶浓度、酶提温度、酶提时间为自变量,采用三因素三水平的Box-Behnken响应面设计,优化淫羊藿多糖的提取工艺。试验结果表明,淫羊藿多糖酶辅助提取的最佳工艺参数：酶浓度110U/uL,酶提温度60℃,酶提时间100min,且酶提温度对多糖提取率的影响最大。在最佳优化条件下淫羊藿多糖提取率为10.06%,接近模型的最大预测值（10.199%）。试验为淫羊藿多糖的临床开发应用提供了依据。     

几种中药成分的免疫增强活性及其作用效果

测定了黄芪多糖等9种中药成分对正常小鼠脾和外周血淋巴细胞增殖反应的影响，并观察了这些中药成分对兔瘟组织灭活疫苗的增强免疫效果。结果表明，人参皂甙、黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖和蜂胶黄酮能显著增强伴刀豆球蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠淋巴细胞增殖，提高免疫兔抗体水平和延长抗体持续时间；板蓝根多糖能增强ConA和LPS的诱导活性，蜂胶多糖能促进ConA的诱导活性，黄芪皂甙和淫羊藿黄酮能促进LPS诱导的淋巴细胞增殖，但它们都不能提高兔瘟组织灭活疫苗的免疫抗体水平。     

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒中药多糖复方的体外筛选

为了筛选出抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)效果较好的多糖复方,以前期筛选出的枸杞多糖、当归多糖、板蓝根多糖、淫羊藿多糖、黄芪多糖、黄精多糖组成8个多糖复方,以OD570值和病毒的抑制率为评价指标,采用MTT法测定3种不同的作用方式下各多糖复方抗PRRSV感染细胞能力。结果表明,多糖复方的3种作用方式,以对病毒的直接杀灭作用效果最好,其中复方②(淫羊藿-黄精-当归-黄芪)和复方③(淫羊藿-黄精-板蓝根-黄芪)3种加药方式的抗病毒效果均较好,可作为抗PRRS的候选方剂。     

淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的调节作用研究

为研究淫羊藿多糖(EPS)体外增强免疫活性,采用酶学检测法测定淫羊藿多糖活性及对鸡脾脏淋巴细胞的增殖作用。根据活性检测结果,选择用50%的乙醇醇沉的淫羊藿多糖进行安全浓度试验;根据安全浓度检测结果,选择2 500.00μg/mL、1 250.00μg/mL、625.00μg/mL、312.50μg/mL、156.25μg/mL 5个浓度,用MTT法测定淫羊藿多糖单独和协同LPS刺激对鸡脾脏淋巴细胞增殖率的影响。结果显示:不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,但乙醇浓度为50%醇沉的淫羊藿多糖活性最佳。淫羊藿多糖对鸡脾脏淋巴细胞的安全浓度为2 500.00μg/mL。淫羊藿多糖无论是单独还是协同LPS刺激脾脏淋巴细胞,均显示出不同程度增强脾脏淋巴细胞的活性,且均在浓度为1 250.00μg/mL时显示出较强的体外增强鸡脾脏淋巴细胞增殖的能力,说明淫羊藿多糖在安全浓度范围内可刺激鸡脾脏淋巴细胞增殖,从而实现调节免疫功能的作用。     

淫羊藿多糖醇沉工艺优化及其对巨噬细胞释放NO的影响

旨在优化淫羊藿多糖醇沉条件并研究不同浓度乙醇醇沉的淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。采用乙醇沉淀法从淫羊藿多糖提取物中获得淫羊藿多糖,在单因素试验基础上,选择浓缩比、乙醇浓度、乙醇体积倍数、醇沉时间为自变量,采用L9(34)的正交试验设计,优化淫羊藿多糖最佳醇沉条件。用浓度为400、500、600、700、800mL/L乙醇醇沉的淫羊藿多糖,采用体外培养法,测定淫羊藿多糖对巨噬细胞释放NO的影响。结果表明,淫羊藿多糖最佳醇沉条件为浓缩比为1∶2,乙醇浓度为800mL/L,乙醇体积倍数为4倍,醇沉时间为12h;每个乙醇浓度醇沉的淫羊藿多糖均具有良好的活性,500mL/L乙醇醇沉的多糖活性最好。结果显示,淫羊藿多糖对巨噬细胞具有良好的刺激作用。     

淫羊藿多糖提取工艺的优化及对小鼠细胞免疫功能的影响

淫羊藿为小檗科淫羊属植物,是传统的补肾助阳中药.现代药理试验结果表明,淫羊藿能增加心脑血管流量,促进造血功能、免疫功能及骨代谢,具有抗衰老、抗肿瘤的功效.多糖是淫羊藿发挥免疫调节作用的有效成分之一,试验在传统水提醇沉法的基础上运用超声波法提取淫羊藿多糖,通过正交设计优化并建立淫羊藿多糖的最佳提取工艺,并进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验和淋巴细胞转化试验,以探讨淫羊藿多糖对小鼠细胞免疫功能的影响.     

10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响

将鸡胚成纤维细胞(CEF)分别与当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪黄酮(AF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)等10种中药成分一起加入到96孔细胞培养板中培养，分别在培养24、36、48、60、72h时用MTT法测定中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，所有中药成分均能显著促进CEF增殖，并有一定的量效和时效关系。     

两个黄芪亚种染色体数目与核型分析

前人研究认为膜荚黄芪（Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.）与蒙古黄芪（Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus （Bge.）Hsiao）染色体数目为2n=16。本试验采用根尖染色体常规制片方法,观察了膜荚黄芪与蒙古黄芪种子根尖有丝分裂相。结果显示：膜荚黄芪与蒙古黄芪染色体数目为2n=18,这2种植物各有4条小染色体。膜荚黄芪染色体核型公式为K（2n）=2x=18=4sm+14m,核型类型为2B型。蒙古黄芪染色体核型公式为K（2n）=2x=18=6sm+12m,核型类型为2C型。     

中药复方在鸡胚水平上抗鸡新城疫病毒的作用研究

本试验以中药百花蛇舌草、金银花等清热解毒药为主药,辅以黄芪、甘草等补气药组成中药复方,以水萃取浓缩制备中药复方流浸膏。以鸡新城疫病毒（NDV）为模式病毒,在鸡胚水平上以鸡胚平均死亡时间（MDT）和鸡胚尿囊液血凝价作为检测指标。结果表明,中药复方流浸膏与NDV感作和不感作均对NDV有明显的抑制作用,延长鸡胚死亡时间,降低血凝价,为临床用药提供了试验依据。     

动物免疫增效剂黄芪多糖化学组分及其结构分析

应用微波辅助提取技术从内蒙古黄芪的干燥根中获得黄芪多糖（Astraglus Polysaccharides,APS）;确定中性蛋白酶与APS质量比为1：200,50℃水浴酶解2h为脱除APS中蛋白质的最佳条件;除蛋白后的APS过DEAE-cellulose 52柱、透析袋和Sephadex G-100柱纯化,经醇沉、真空干燥后,高效凝胶过滤色谱法（HPGPC）测得其分子量（Mw）为1．1×10^4Da,纯度为97．16％;以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）为衍生剂,经柱前衍生化HPLC分析。确证APS的单糖组成为Rha、Glc、GalA和Ara,其摩尔比为1．19：72．01：5．85：20．95;红外光谱、^13C核磁共振和^1H核磁共振技术确定本实验所得APS其主链由葡萄糖以α-型糖苷键连接而成,前期实验证实其具有增强机体免疫功能和抗氧化作用。     

肉仔鸡日粮中添加补益生长素效果探讨

在肉仔鸡日粮中分别添加0.5%、1%和2%由黄荆、黄芪、白术、紫菊、山药、常春藤、四季青、白芍、陈皮、甘草配成的补益生长素进行饲喂效果试验研究。结果表明,含1%补益生长素的试验2组比未添加补益生长素的对照组以及含0.5%补益生长素的试验1组和含2%补益生长素的试验3组肉仔鸡平均日增重分别提高12.89%、10.24%和12.26%(P0.05),饲料增重比分别降低了12.91%、8.17%和9.59%(P0.05),日粮中分别添加0.5%和2%补益生长素的试验组与对照组差异均不显著(P0.05)。添加补益生长素以1%比例为佳,并能改善肉仔鸡生产性能。     

基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的作用

【目的】基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的有效活性成分及其作用机制。【方法】从TCMSP数据库搜集黄芪中药化合物成分,并获取其潜在靶点。利用GeneCards和OMIM数据库搜集肠道菌群失调性腹泻(flora imbalance diarrhea)的作用靶点,将两者预测的潜在作用靶点进行映射,获得共同作用靶点。运用STRING数据库构建靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)关系,用Cytoscape_3.8.0软件对其网络进行拓扑分析,用DAVID数据库对共同作用靶点进行富集分析,用AutoDuck_4.2.6软件对其核心成分与核心靶点进行分子对接。【结果】黄芪含有11个调控仔猪肠道菌群失调性腹泻核心成分,其对应靶点基因65个,疾病靶点854个,交集靶点25个。PPI网络中显示肿瘤坏死因子(TNF)、转录因子AP-1(JUN)、半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、白细胞介素-6(IL6)、NF-κB抑制剂α(NFKBIA)、IL1B、IL10、细胞肿瘤抗原p53(TP53)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、C-C基序趋化因子2(CCL2)为关键靶点。GO功能和KEGG通路富集分析发现,黄芪有效成分主要通过美国锥虫病、炎症性肠病、阿米巴病、细胞因子-细胞因子受体相互作用、A型流感、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路参与转录调控、免疫反应、细胞对脂多糖的反应等生物过程。分子对接结果显示,槲皮素、山奈酚、芒柄花素等核心成分与TNF、IL1B等关键靶点结合紧密,亲和力较好。【结论】黄芪可能通过槲皮素、山奈酚、芒柄花素等主要活性成分作用于TNF、IL1B等靶点,通过参与美国锥虫病、炎症性肠病、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路进而治疗仔猪肠道菌群失调性腹泻。     

黄芪多糖对小鼠免疫细胞信号转导相关分子的影响

为探讨黄芪多糖(APS)免疫调节的作用机理，观察了黄芪多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成、对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞内游离钙离子水平和蛋白激酶C(PKC)活性的影响。结果显示黄芪多糖能明显促进小白鼠腹腔巨噬细胞NO生成，显著升高小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子的水平，引起细胞PKC活性明显升高。提示黄芪多糖通过NO介导信号传递通路，调节脾淋巴细胞内游离钙离子的浓度，升高细胞蛋白激酶活性而影响机体免疫细胞的信号转导，发挥其免疫调节作用。     

不同施肥配比对蒙古黄芪产量及品质的影响

为研究不同肥料配施对土壤营养状况及黄芪生长和药效成分积累的影响，本研究以1年生蒙古黄芪（Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge.）Hsiao）为试材，采用正交设计L₉（3⁴），研究因素A（硝普钠sodium nitroprusside，SNP）、B（黄芪茎叶绿肥）、C（黄芪固氮菌T₁₆）、D（黄芪固氮菌T₂₁）配施后对土壤有机质及氮磷钾含量、黄芪生物量、有效成分含量及产量的影响。结果表明：与对照相比，4种因素配合施用，均对蒙古黄芪的生长及产量品质起到了积极作用，尤其处理4（A2B1C2D3）提高了土壤有机质、有效氮、有效钾、全氮、全磷含量，增加了黄芪生物量，提高了叶片3种抗氧化物酶的活性，降低了丙二醛含量，且黄芪总多糖、总皂苷、总黄酮含量及其总产量分别比对照提高了91.89%，161.54%，155.56%，118.64%。综上分析可知处理4即SNP15 mmol·L^-1、绿肥含量1.2 kg·（15m²）^-1，T₁₆10⁶·mL^-1，T₂₁10⁹·mL^-1为肥料最佳配施方案。本研究可为黄芪专用肥的研制提供理论参考。     

种子液传代次数对益生菌FGM株发酵黄芪转化多糖的影响

益生菌FGM株发酵黄芪后,产物粗多糖得率显著提高。为进一步提高FGM株发酵黄芪转化多糖的稳定性,本试验将连续传代的FGM株种子液接种黄芪进行液体发酵,采用细菌平板计数法和苯酚-硫酸法分别测定发酵前、后的细菌总数和发酵后黄芪多糖的含量,并对结果进行了统计学分析。结果表明菌种在多次连续传代后会产生菌种退化现象,发酵产物中多糖含量与种子液细菌总数呈极显著相关（P=0.007）,其中第4代种子液发酵黄芪转化多糖的性能最高。     

响应面法优化益生菌FGM发酵黄芪多糖的提取工艺

为确定益生菌FGM发酵黄芪多糖的最佳提取工艺,本试验以发酵黄芪多糖含量为考察指标,采用响应面法对工艺的提取参数进行优化,并建立回归模型。结果显示,提取时间、提取温度和料液比对发酵黄芪多糖的含量影响显著,并且两两因素间存在一定的交互作用;影响发酵黄芪多糖提取含量的工艺因素按主次顺序排列为：料液比 > 提取温度 > 提取时间;乳酸菌发酵黄芪液多糖提取最佳工艺为：提取时间65 min、提取温度80℃、料液比为1：9,在此条件下,发酵黄芪多糖的含量为6.72 mg/mL。试验证明该工艺可行,可为新兽药开发提供参考。     

Optimization of Polysaccharides Extraction from Astragalus membranaceus Fermented by FGM Strain with Response Surface Method

Response surface method was used to optimize main process parameters for the polysaccharides extractions from Astragalus membranaceus fermented by probiotic FGM strain.A regression model equation was fitted.The results showed that extraction time, extraction temperature and solid-liquid ratio were significant factors on polysaccharide content fermented from Astragalus membranaceus and there was interactive effects between every two factors.Polysaccharide content was significantly affected by solid-liquid ratio,followed by extraction temperature and extraction time.The optimum conditions were found to be that the extraction time was 65 min, extraction temperature was 80℃,solid-liquid ratio was 1:9,and the polysaccharide content was 6.72 mg/mL at this condition.The results showed that the model was practical that could provide a base for exploitation new medicine.