铁皮石斛组培苗多糖含量的变化规律

以组培生产的铁皮石斛原球茎、丛生芽和植株茎段为材料提取石斛,测定其多糖含量,计算多糖累积效率,以了解不同形态铁皮石斛组培苗的多糖含量及其变化规律。结果表明,不同形态的铁皮石斛组培苗多糖含量差异较大,植株茎段的多糖含量相对最高,可达26.20%,原球茎多糖含量次之,为25.26%,二者均可达到《中华药典》中对石斛中药材多糖含量要求的规定;原球茎和植株茎段的多糖含量与培养时间呈正相关;原球茎多糖的积累效率相对最高,可以成为生产石斛多糖的原料新来源。     

铁皮石斛无公害标准化种植技术及产品质量分析

【目的】明确铁皮石斛无公害标准化种植技术规程及产品质量标准。【方法】以野生＂红皮软脚＂铁皮石斛种质作为组培材料,探讨不同规格组培苗（优质、合格）、不同栽植方式（床架栽、地厢栽）对铁皮石斛生长势、生长量及成药茎条产量的影响,同时测定鲜茎和枫斗中石斛碱和石斛多糖的含量。【结果】不同栽植方式对铁皮石斛组培苗种植成活率影响不大,但优质苗栽后成活率、生长势和成药茎条产量均明显优于合格苗,床架栽的生长势、生长量和成药茎条产量均明显优于地厢栽;地厢栽产品中检测到部分有机磷农药残留,床架栽因远低于限量标准而未检出;1年生、2年生鲜茎及枫斗中石斛多糖含量分别为19.72%、18.54%、29.41%;在生长年限不超过2.5年范围内,石斛碱含量随种植年限增长而增加。【结论】在广西自然气候条件下,采用优质组培苗、搭床架栽植及生态防治病虫害是实现铁皮石斛无公害标准化种植的关键。实际生产中,可以鲜茎多糖含量≥18%、枫斗多糖含量≥25%、重金属和农药残留量不超过无公害食品规定标准作为无公害铁皮石斛产品质量鉴定指标。     

铁皮石斛无公害标准化种植技术及产品质量分析

【目的】明确铁皮石斛无公害标准化种植技术规程及产品质量标准。【方法】以野生“红皮软脚”铁皮石斛种质作为组培材料,探讨不同规格组培苗（优质、合格）、不同栽植方式（床架栽、地厢栽）对铁皮石斛生长势、生长量及成药茎条产量的影响,同时测定鲜茎和枫斗中石斛碱和石斛多糖的含量。【结果】不同栽植方式对铁皮石斛组培苗种植成活率影响不大,但优质苗栽后成活率、生长势和成药茎条产量均明显优于合格苗,床架栽的生长势、生长量和成药茎条产量均明显优于地厢栽;地厢栽产品中检测到部分有机磷农药残留,床架栽因远低于限量标准而未检出;1年生、2年生鲜茎及枫斗中石斛多糖含量分别为19.72%、18.54%、29.41%;在生长年限不超过2.5年范围内,石斛碱含量随种植年限增长而增加。【结论】在广西自然气候条件下,采用优质组培苗、搭床架栽植及生态防治病虫害是实现铁皮石斛无公害标准化种植的关键。实际生产中,可以鲜茎多糖含量≥18%、枫斗多糖含量≥25%、重金属和农药残留量不超过无公害食品规定标准作为无公害铁皮石斛产品质量鉴定指标。     

铁皮石斛种子组织培养条件的优化

以铁皮石斛种子为材料,通过组织培养技术,对比原球茎和丛生芽的增殖能力,并比较种子消毒方式、琼脂、有机物、活性炭等添加物对铁皮石斛丛生芽增殖和壮苗生根的影响,优化前期铁皮石斛组培技术体系。结果显示:原球茎增殖能力远高于丛生芽的增殖能力且增殖速度快;铁皮石斛种子消毒方式以75%乙醇(浸泡30 s)+8.0%次氯酸钠(浸泡8 min)效果较好,生产中可取代传统升汞溶液消毒方式;液态培养基显著优于半液态和固态培养基;培养基中添加10%香蕉汁和0.5%活性炭有利于芽苗的壮苗生根。     

铁皮石斛不同来源材料多糖和氨基酸含量的比较

通过对铁皮石斛不同来源材料的主要药用成分多糖和氨基酸含量进行比较,结果表明:铁皮石斛不同来源材料的多糖含量不同;原球茎与野生品的多糖和总氨基酸含量相近,两者都含有7种人体必需的氨基酸,但野生品的必需氨基酸含量高于原球茎的,两者的含量分别占总量的37.9%、26.2%。初步证明以组织培养获得的铁皮石斛原球茎代替其野生品是解决铁皮石斛资源紧缺的有效途径。     

不同种植月龄铁皮石斛试管苗生长及活性成分含量比较

[目的]研究不同种植月龄铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimuraet Migo）试管苗生长及成分含量变化动态。[方法]通过测定不同种植月龄铁皮石斛试管苗的茎高、茎粗、平均鲜重和多糖、氨基酸的含量,分析其动态变化状况。[结果]随着栽培时间的延长,铁皮石斛试管苗茎高及生物产量逐渐增加,而茎粗反而变小,其多糖含量先升后降,在第12个月达到高峰,氨基酸总量及主要氨基酸含量都呈直线上升趋势,但各阶段升高幅度不同。[结论]该研究揭示了栽培铁皮石斛试管苗生长及含量变化规律,可为合理利用铁皮石斛试管苗提供参考。     

遮阴对铁皮石斛生长与品质的影响

为了明确铁皮石斛农艺性状和糖类成分之间的相互关系,为铁皮石斛种植和新品种选育提供理论依据,探讨了遮阴对铁皮石斛农艺性状与糖类成分积累的影响,测定遮阴条件下铁皮石斛农艺性状和糖类成分的变化情况,并对农艺性状与糖类成分进行相关性分析、多元回归分析和通径分析。结果表明：遮阴组的叶长、叶宽、纤维素、半纤维素显著小于对照组,而茎粗、生物量、可溶性多糖含量、甘露糖含量、甘露糖/葡萄糖值显著大于对照组;对生物量负向影响最大的是叶数（-0.840）;对可溶性多糖含量正向影响最大的是茎长（0.864）;对甘露糖/葡萄糖值负向作用最大的是茎长（-1.230）,其次是茎粗（-0.427）。可见遮阴处理能显著提高铁皮石斛甘露糖含量以及甘露糖/葡萄糖值,减少粗纤维的积累,从而促进了石斛茎粗的生长和生物量的积累。因此,可将遮阴处理适时应用于铁皮石斛人工种植中,生产中也可以通过控制茎长、茎粗等性状指标来筛选高品质、高产量的铁皮石斛品种。     

不同培养基对铁皮石斛种子萌发和壮苗生根的影响

以铁皮石斛种子为材料,通过组织培养技术,不添加植物生长调节剂直接得到丛生芽,并比较天然有机物、活性炭等添加物对铁皮石斛丛生芽壮苗生根的影响,优化铁皮石斛组培快繁技术体系.结果显示,铁皮石斛种子分化最佳培养基为MS+6 g/L琼脂+20 g/L蔗糖+80 g/L香蕉泥;芽苗的壮苗生根试验中,最佳培养基为1/2 MS+0.4 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂+80 g/L香蕉泥+0.5 g/L活性炭,有利于芽苗的壮苗和生根.该研究可以一次性直接得到优质铁皮石斛幼苗,减少了试验步骤,节省人工、降低成本,提高了试验效率,促进原球茎增殖、提高分化率,促进壮苗和生根,可为铁皮石斛快繁和大规模化生产提供技术支持.     

高产和高生物活性的铁皮石斛液体培养体系研究

通过对野生铁皮石斛的定向诱导和逐步驯化,筛选适合液体悬浮生长的铁皮石斛原球茎,并对其ITS(内转录间隔区)和Rbcl进行分子鉴定。在此基础上,建立了适合铁皮石斛原球茎快速生长的液体培养体系,对蛋白、多糖、醇浸出物、金属含量等成分进行检测分析。结果发现,以1/2MS+2.0 mg/L KT(激动素)+0.5 mg/L NAA(萘乙酸)+2.5%蔗糖+0.6%甘露糖+30 g/L马铃薯提取物为铁皮石斛原球茎液体培养基,经5周液体培养,采收原球茎(318.3±22.5) g/L(鲜质量),平均生长率为(9.7±0.59) g/(L·d)(鲜质量),单个最大鲜质量为23.7 g,多糖含量为(19.09±1.05)%,醇浸出物含量为(37.82±3.50)%,蛋白质含量为42.51%,其中精氨酸含量高达19.23 mg/g,铅、镉、砷、汞、铜等金属含量远低于最高限定标准。结果表明,采用该液体培养体系,可培育生产出高产和高生物活性的铁皮石斛。     

铁皮石斛原球茎与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性比较

【目的】比较铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性,为铁皮石斛组织培养物的应用提供依据。【方法】以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)为供试菌,用抑菌圈法测定2种铁皮石斛多糖对目标菌的抗菌活性;分别用羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-·2)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基(DPPH·)法和硫代巴比妥酸法(TBA法)结合分光光度法检测2种铁皮石斛多糖清除·OH、O-·2和DPPH·及抗脂质过氧化的能力,比较2种铁皮石斛多糖的抗菌及体外抗氧化活性。【结果】铁皮石斛原球茎多糖与野生铁皮石斛多糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均具有显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖的抑菌效果比铁皮石斛原球茎多糖优;2种铁皮石斛多糖对·OH、O-·2和DPPH·均有极显著的清除作用,对小鼠肝组织脂质过氧化均有极显著的抑制作用,且野生铁皮石斛多糖比铁皮石斛原球茎多糖效果更好,2种铁皮石斛多糖的抗菌及抗氧化活性与多糖质量均存在剂量效应关系。【结论】与野生铁皮石斛多糖相比,铁皮石斛原球茎多糖在抗菌、抗氧化能力方面虽存在一定差距,但仍具有进一步开发的价值。     

外源一氧化氮对铁皮石斛原球茎生长和多糖积累的影响

以硝普钠（SNP）为一氧化氮（NO）供体,研究了不同浓度的外源NO对铁皮石斛原球茎生长、叶绿素含量、蔗糖合成酶（SS）活性和多糖积累的影响。结果总体表现为低浓度的SNP有利于铁皮石斛原球茎的生长,而高浓度的SNP可以促进多糖的合成。在添加0.50 mmol·L-1SNP的培养基中培养28 d时其干质量比对照高36.9％,总叶绿素含量在14 d时为对照的1.33倍;在添加1.00 mmol·L-1 SNP的培养基中培养7 d时其多糖含量为对照的1.59倍,同时SS活性显著升高。综合多糖产量来看,0.50 mmol·L-1SNP效果最佳,在处理期间显著高于其他处理,且对其干质量、叶绿素含量、SS活性和多糖积累均有促进作用。添加NO清除剂（cPTIO）后,铁皮石斛原球茎的生长、SS活性和多糖合成受到抑制。     

不同石斛的生物学特性及主要成分比较研究

研究不同石斛的生物量和在不同月份的多糖及总生物碱含量,为确定最佳采收期提供指导,为评价不同石斛品质和人工种植的前景提供依据。以上一年生长的石斛茎为材料,采用苯酚浓硫酸法测定多糖含量,酸性染料比色法测定总生物碱含量,以株高乘以茎粗粗略估计生物量。结果表明,不同石斛的多糖含量均在3月时较高,但不同年份具有一定的差异,不同石斛生物碱含量最高的时期各不相同;在3月份采收时,铁皮石斛的多糖含量最高,束花石斛的生物碱含量最高,紫瓣石斛和金钗石斛二者的多糖和生物碱含量均较高,且其生物量也较大。以多糖含量为主的石斛类药材在广州种植时3月份进行采收较佳;以多糖含量来评价石斛品质时,铁皮石斛最佳;以总生物碱含量来评价石斛品质时,束花石斛最佳;而以多糖、总生物碱和生物量来综合评价时,紫瓣石斛具有良好的应用前景。     

铁皮石斛组培苗生根条件优化研究

【目的】培养生根优良的铁皮石斛组培苗,提高移栽成活率。【方法】在生根培养基中添加不同激素配比（1.0~3.0 mg/L NAA、0.5 mg/L 6-BA）进行铁皮石斛组培苗生根培养,并采取正交试验考察光照强度、pH和琼脂用量对铁皮石斛组培苗生根效果的影响。【结果】随着MS培养基中NAA浓度的升高,试管苗的鲜重和生根率呈逐渐降低的趋势,以添加NAA 1. 0 mg/L（处理1）和NAA 2. 0 mg/L（处理3）的试管苗长势最好。极差分析和方差分析结果表明,在3个培养条件中,对试管苗生根的影响大小表现为光照强度>琼脂用量>pH值,生根培养基3因素最优水平组合为光照强度2000 lx,pH 5.5,琼脂用量8.0 g/L。【结论】铁皮石斛试管苗适宜的生根培养基为1/2MS + 10%香蕉泥 + NAA 1.0 mg/L + 2%蔗糖 + 0.05%活性炭,适宜的生根条件为光照强度2000 lx、琼脂用量8.0 g/L、pH 5.5。     

不同有机肥对铁皮石斛生长、产量及多糖含量的影响

以嘟乔山种和广南种铁皮石斛为材料,研究了施用不同有机肥对铁皮石斛植株生长、栽培产量及植株多糖含量的影响。结果表明:施用有机肥能够促进铁皮石斛植株生长,提高栽培产量,但不利于铁皮石斛植株多糖积累;嘟乔山种铁皮石斛施用发酵花生麸有机肥能够获得较高的栽培产量和品质,栽培产量比对照提高58.8%,多糖含量比对照下降0.2%;广南种铁皮石斛施用发酵混合料有机肥(牛粪+羊粪+花生麸,各1/3)能够获得较高的栽培产量和品质,栽培产量比对照提高70.2%,多糖含量比对照下降0.8%。     

种植地域和采收时间对铁皮石斛品质影响

[目的]分析云南省不同产地和不同采收时间对铁皮石斛品质的影响.[方法]通过对云南省3个栽培基地所生产的铁皮石斛进行为期一年的跟踪调查,检测其多糖含量以及醇溶液浸出物含量,分析云南省不同产地生产的铁皮石斛之间品质差异,以及同一产地生产的铁皮石斛品质与采收时期之间的相关性.[结果]同一地点两年生铁皮石斛在全年各个采收期中采收时,其多糖和醇溶液浸出物的含量有所差异,3个地区的多糖含量和醇溶液浸出物含量在全年中都呈现出稳定的、相似的趋势.3个地区大棚产铁皮石斛的多糖含量在春季、冬季出现显著性差异,其醇溶液浸出物含量在春、秋、冬季都有显著性差异.[结论]该研究为铁皮石斛栽培选址的选择以及采收品质的控制提供参考.     

超微技术对铁皮石斛粗多糖浸出的影响

通过苯酚-硫酸法测定铁皮石斛超微粉与铁皮石斛常规粉水溶性粗多糖的含量,探讨超微技术对铁皮石斛粗多糖浸出的影响。结果表明,铁皮石斛超微粉中水溶性粗多糖含量为484.6 mg/g,常规粉水溶性粗多糖含量为370.2 mg/g,铁皮石斛超微粉水溶性粗多糖含量比常规粉水溶性粗多糖含量高30.9%,二者的差异具有统计学意义(P<0.05)。超微技术有助于铁皮石斛粗多糖的浸出。