落叶松不同类型胚性和非胚性愈伤组织的生理生化差异

以华北落叶松替代、增殖培养的不同类型的胚性及非胚性愈伤组织为材料，测定其氨基酸、糖类、酚酸、激素以及离子的含量。结果表明：氨基酸含量的差异十分明显，质地硬的非胚性愈伤组织中18种游离氨基酸含量为胚性愈伤组织的2倍以上，经ABA处理后，胚性愈伤组织中多糖及邻苯二酚含量急剧升高；三糖含量与不同基因型密切相关；乙烯释放量 在非胚性愈伤组织中高于胚性愈伤组织；金属离子CO^ 的含量，胚性愈伤组织是非胚性愈伤组织的12倍，胚性愈伤组织中铵态氮（NH4^ ）与硝态氮（NO3^-)的比值是非胚性愈伤组织中的10倍以上;实验结果为进一步探讨针叶树体细胞胚胎发生的生理生化机理提供依据。     

楸树不同类型胚性和非胚性愈伤组织的细胞学观察

以楸树幼嫩茎段为外植体,接种在诱导培养基上诱导初始愈伤组织,以初始愈伤组织诱导胚性和非胚性愈伤组织,分别利用扫描电镜和透射电镜对愈伤组织进行了观察。结果表明:不同类型愈伤组织在形态学和细胞学特性方面存在显著差异。III型白色愈伤组织I、V型褐色愈伤组织为非胚性愈伤组织;I型绿色愈伤组织、II型紫色愈伤组织可能为楸树胚性愈伤组织。为楸树体细胞胚胎发生提供了理论基础。     

香樟胚性与非胚性愈伤组织间的差异研究

【目的】通过组织细胞学观察、扫描电镜观察、生理生化指标测定三种方法为香樟胚性和非胚性愈伤组织的区分提供了可靠的判断依据,建立起愈伤组织的胚性发生能力与生化代谢间的关系,以此为基础可以提高香樟体胚诱导率、优化体胚发生体系。【方法】以长沙7月初采摘的香樟Cinnamomum camphora L.的未成熟合子胚为材料,诱导出四种不同类型的愈伤组织,对其进行组织细胞学观察以及生理生化测定。【结果】研究结果表明:胚性愈伤组织多为白色,表面散布淡黄色颗粒,细胞壁厚质浓、细胞体积较小,排列紧密,在电镜下表面细胞成团分布,大小近似,细胞核大核仁明显,细胞器丰富。而非胚性愈伤组织多为灰色、白色或深黄色,细胞壁薄,内含物少,空泡化明显,细胞多数衰老、破碎,在电镜下非胚性愈伤表面细胞不饱满大部分死亡破裂,且表面存在附着物,内部几乎没有细胞器。且胚性愈伤组织的适应性、抗逆性强于非胚性愈伤组织。对于胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织发生的位置来说,非胚性愈伤组织先发生在两片子叶的中间向外部扩增。胚性愈伤组织的发生位置有三种:一种是发生在胚根端,第二种发生在已形成的愈伤组织的外侧,第三种褐化的愈伤组织边缘。【结论】四类愈伤组织中有三类为非胚性愈伤组织,一类为胚性愈伤组织。     

长白落叶松胚性愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生

【目的】以长白落叶松的未成熟合子胚为外植体,进行胚性愈伤组织的诱导、增殖培养及体细胞胚胎发生的相关研究,揭示影响长白落叶松胚性愈伤组织诱导的关键因素,并探讨继代培养过程中添加不同种类、浓度的生长调节剂对胚性愈伤组织增殖及体胚发生的影响。【方法】采集长白落叶松3个家系优良单株的种子,诱导胚性愈伤组织,比较外植体采集时间、家系、2,4-D浓度及基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。诱导出的胚性愈伤组织继代于含不同种类、浓度生长调节剂的增殖培养基,通过体胚发生途径获得体细胞胚。选取发育正常的体胚进行萌发,待体胚生根后移栽。【结果】不同时间采集的未成熟合子胚,其胚性愈伤组织诱导率存在较大差别,授粉后63天的合子胚诱导率为5.61%,授粉后70天诱导率为22.35%,而授粉后80天未诱导出胚性愈伤组织;‘长77-22’、‘长77-37’和‘长73-50’3个家系胚性愈伤组织的平均诱导率分别为6.69%,11.17%和3.11%;2,4-D浓度对长白落叶松胚性愈伤组织诱导具有一定影响,在一定范围内胚性愈伤组织的诱导率会随2,4-D浓度升高而升高,当其浓度为1.5 mg·L~(-1)时胚性愈伤组织的诱导率最高,达到11.11%,而当2,4-D浓度超过1.5 mg·L~(-1)时,胚性愈伤组织的诱导率则开始下降;BM,MS,S培养基均能诱导出胚性愈伤组织,其中,BM培养基的诱导率最高,S培养基的诱导率次之,MS培养基的诱导率最低。胚性愈伤组织在含2,4-D 0.3 mg·L~(-1)、6-BA0.1 mg·L~(-1)及KT 0.1 mg·L~(-1)的BM培养基上增殖15天可获得相对较多的胚性愈伤组织,增殖率为345.93%;在含2,4-D 1.5 mg·L~(-1)、6-BA 0.5 mg·L~(-1)及KT 0.5 mg·L~(-1)的BM培养基上培养14天,再经诱导可获得较多的体细胞胚胎,每克愈伤组织平均诱导179.87个体胚,并且这些体胚的萌发率及植株再生率相对较高,分别为75.00%,66.67%;再生植株移栽成活率为27.08%。【结论】不同长白落叶松家系的胚性愈伤组织诱导率不同,散粉后70天的合子胚适合诱导胚性愈伤组织,基本培养基为BM,添加2,4-D 1.5 mg·L~(-1)。胚性愈伤组织长期继代在含高浓度生长调节剂的培养基上易丧失胚性,且增殖速度慢,但体胚的发生量及萌发率相对较高;适当降低生长调节剂浓度利于愈伤组织保持胚性及增殖,但体胚的发生量及体胚的萌发率有所下降;当培养基中生长调节剂浓度较低时,不利于愈伤组织的增殖,但仍能使其胚性长期保持;采用浓度为0.5 mg·L~(-1)的NAA代替0.15 mg·L~(-1)的2,4-D有助于胚性愈伤组织的增殖,并能在一定程度上提高体胚的萌发率。因此,可根据不同阶段的培养目的,选择添加不同种类和浓度生长调节剂的增殖培养基进行继代。     

水曲柳不同外植体胚性愈伤组织诱导及植株再生

本研究以水曲柳不同外植体(无菌苗叶片和下胚轴、未成熟合子胚、成熟和未成熟合子胚子叶)为材料，在胚性愈伤组织诱导、胚性愈伤组织增殖、体胚形成、体胚萌发生根培养基上诱导分化。结果表明，附加了5.0 mg·L^-1 NAA和2.0 mg·L^-1 6-BA的激素配比的MS培养基，为诱导水曲柳胚性愈伤组织最适培养基；在5种不同的外植体中，成熟和未成熟合子胚子叶更适合作为诱导胚性愈伤组织的外植体；在诱导胚性愈伤组织中，成熟合子胚子叶诱导率为11.7%,未成熟合子胚子叶诱导率为9.7%;胚性愈伤组织在继代培养过程中，WPM为最佳基础培养基，附加0.1 mg·L^-1 6-BA和0.15 mg·L^-1 2,4-D的激素配比，胚性愈伤组织的增殖系数可达到1.54。在体胚成熟过程中，MS培养基内添加1.0 mg·L^-1 ABA时，体胚的诱导率最高，达到55%。在生根萌发的WPM基础培养基中附加1.0 mg·L^-1 IBA和1.0 mg·L^-1 IAA的激素配...     

杂种落叶松胚性愈伤组织诱导的研究

以杂种落叶松兴7×日77-2、日12×兴9、日3×兴9、日3×兴2、日5×兴9未成熟合子胚为外植体,初步建立杂种落叶松胚性愈伤组织诱导体系。结果表明:不同杂种落叶松在不同培养基和蔗糖浓度下的诱导情况不尽相同,基本培养基中MSG与MS培养基的诱导效果比较好,激素浓度的差异对杂种落叶松也有影响,2,4-D浓度为2.0 mg/L时,诱导率高,蔗糖浓度为30 g/L能诱导出胚性愈伤组织,高浓度的蔗糖反而抑制了胚性愈伤的形成。ABA分别为0、5、10、20、30 mg/L的5个处理中,除对照及ABA30 mg/L时没有诱导出体细胞胚,其他试验组均有一定数量的体细胞胚,但诱导率较低。几种杂种落叶松胚性愈伤组织诱导最适合的采样时间是7月中旬。     

马尾松幼胚胚性愈伤组织诱导的研究

利用马尾松未成熟胚为外植体,在预备实验的基础上,通过对不同时期不同家系马尾松幼胚的采集、接种,诱导产生胚性愈伤组织,计算实验数据,利用SPSS13进行数据分析。结果表明:以LP为基本培养基,最易诱导出胚性愈伤组织的采种时期是4月中旬至5月下旬;在这一时期不同家系对诱导率影响的差异不显著;随着幼胚成长,胚性愈伤组织的诱导率也逐步下降;马尾松幼胚的胚性愈伤组织诱导过程需在暗培养条件下进行;在初步试验中,诱导胚性愈伤组织最佳的是第③号激素处理。     

思茅松胚性愈伤组织的诱导

以思茅松成熟胚和不同发育时期的未成熟胚为外植体,在DCR、1/2LM和1/2P6培养基上分别添加不同种类及质量浓度组合的植物激素,进行胚性愈伤组织诱导试验.结果表明:一定激素质量浓度范围内的DCR和1/2LM培养基上,成熟胚可以诱导愈伤组织,但都为非胚性愈伤组织;思茅松不同发育时期的未成熟胚在含2,4-D 1.1 mg.L-1、BA 0.45 mg.L-1和KT 0.43 mg.L-1的1/2P6培养基上也可以诱导产生愈伤组织,但只有用处于顶端分生组织原基还不能明显可见时的未成熟胚为外植体进行诱导,才可以得到胚性愈伤组织,诱导率为1.8%;思茅松未成熟球果在普文林场思茅松种子园内最佳采样时期为7月下旬.     

构树胚性愈伤组织及体胚诱导研究

以野生构树组织培养无菌苗茎段为外植体,探讨不同种类、质量浓度的植物生长调节剂对胚性愈伤组织诱导及体胚发生的影响,初步建立愈伤组织诱导及体胚发生技术途径。结果表明,TDZ是影响构树茎段胚性愈伤组织诱导的主要因素,NAA和2,4-D是次要因素,构树胚性愈伤组织最佳培养基为MS+0. 05 mg/LTDZ+1. 0 mg/L NAA+0. 1 mg/L 2,4-D。最佳体胚诱导培养基为MS+0. 1 mg/L NAA+1. 0 mg/L 6-BA,体胚诱导率达到41. 33%。     

落叶松胚性愈伤组织悬浮培养体系的优化

【目的】以落叶松胚性系为研究对象,建立和优化适合落叶松胚性愈伤组织增殖的悬浮培养体系,在此基础上对悬浮组织进行体细胞胚的成熟诱导。旨在为实现落叶松胚性愈伤组织的快速增殖及体细胞胚的规模化繁育奠定基础。【方法】对已诱导获得的长白落叶松、兴安×日本杂种落叶松及日本×长白杂种落叶松胚性愈伤组织进行继代培养,取新鲜增殖的组织进行悬浮培养。采用L9(34)正交试验设计,以胚性愈伤组织的增殖量及增殖率为响应值对悬浮培养条件进行筛选和优化,并对选出的最适培养条件进行验证。以悬浮增殖的胚性组织进行体细胞胚成熟培养,统计体胚发生量。【结果】在落叶松胚性愈伤组织的悬浮培养过程中,接种量、震荡强度及培养时间对胚性组织增殖具有显著的影响。在一定范围内,落叶松胚性组织的增殖量及增殖率随初始接种量的增加而降低,随震荡强度的升高呈先增加后下降,而随培养周期的延长而增加。以4 g·L~(-1)接种于含2,4-D 0.15 mg·L~(-1)、6-BA 0.05 mg·L~(-1)及KT 0.05 mg·L~(-1)的BM培养基(SCM),在120 r·min~(-1)避光条件下悬浮培养,3个落叶松胚性系的胚性组织均能快速、稳定地增殖,培养15天的增殖率分别为2 569.42%、4 189.96%及3 001.67%,表现出较明显的种间差异。成熟培养方式对落叶松胚性悬浮组织的体胚发生量影响极显著(P=0.000)。悬浮培养获得的胚性组织接种到含琼脂6.0g·L~(-1)的固体增殖培养基(PCM)上继代15天后,转接到添加肌醇10 g·L~(-1)且无生长调节剂的1/4BM过渡培养基(TCM)上培养14天,再转入含有ABA 20 mg·L~(-1)、Ag NO35 mg·L~(-1)、PEG400080 g·L~(-1)的体胚成熟培养基上培养8周,体胚发生量显著提高(P=0.000)。在此条件下,3个落叶松胚性系OO-A1、GK-F1及KO-H的体胚发生量分别为(101.69±11.19)、(93.09±9.34)及(5.78±1.47)个·g~(-1)。【结论】悬浮培养能在短期内获得大量分散均匀、质量较高的落叶松胚性愈伤组织,且不会影响体细胞胚的发生和成熟。在BM液体培养基(SCM)中,接种量为4 g·L~(-1)、震荡强度为120 r·min~(-1)、暗培养15天,落叶松胚性组织的鲜质量可增加26.99~42.90倍。悬浮培养获得的胚性组织经固体增殖培养基(PCM)继代15天及过渡培养基(TCM)预培养14天后,再进行体胚成熟诱导可明显提高其体胚发生量。     

小叶杨原生质体培养中的激素和氨含量变化

以小叶杨（Ｐｏｐｕｌｕｓｓｉｍｏｎｉｉｃａｒｒ．）原生质体培养的愈伤组织为供试材料，用高压波相色谱法（ＨＰＬＣ），测定它们在四种不同分化培养基上四大类内源激素（ＩＡＡ，ＧＡ３，ＣＴＫ，ＡＢＡ）的含量变化，并检定有关Ｎ的生化反应。结果表明，不同分化培养基上的愈伤组织中内源激素含量和种类差异很大。导致细胞分裂素（ＣＴＫ）含量高，种类多以及细胞分裂素与生长素的比值（ＣＴＫ／ＩＡＡ）高的处理，有利于愈伤组织分化；但若愈伤组织中含有内源脱落酸（ＡＢＡ），则抑制分化。测定结果还表明，小叶杨原生质体培养的愈伤组织分化过程中，其硝酸还原酶活力与氨基态Ｎ含量互为消长。分化频率高的愈伤组织中，硝酸还原酶活力低，而氨基态Ｎ含量高．     

Efficient embryogenic callus induction and plant regeneration from embryonic axis explants inQuercus acutissima

Embryogenic callus ofQuercus acutissima was successfully induced from embryogenic cultures, and plants were regenerated from the callus. The development of the techniques involved will allow mass propagation and gene transformation in this species. Embryogenic cultures were formed from embryonic axis explants (i.e., embryos without cotyledons) excised from immature embryos, after culture on Murashige and Skoog (MS) medium containing indolebutyric acid and benzyladenine. Attempts to induce embryogenic cultures from cotyledon explants were unsuccessful. Embryogenic calli were induced at high frequency from embryogenic cultures on MS medium containing 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. However, benzyladenine inhibited embryogenic callus formation. Somatic embryo development from embryogenic calli occurred on MS medium in all of the seven cell lines tested. Germination of somatic embryos was induced on half strength MS medium without plant growth regulators. Finally, acclimated plants growing in soil were obtained.     

天山云杉体细胞胚的成熟及萌发条件

【目的】建立天山云杉体细胞胚成熟及萌发阶段的适宜培养条件,为该树种的体细胞胚大规模繁殖和工厂化生产提供基础。【方法】以天山云杉成熟合子胚为外植体所诱导形成的胚性愈伤组织为材料,通过14个株系、4种成熟培养基、接种量(100、150、200mg的新鲜胚性愈伤组织)、ABA浓度(1.9、3.8、7.6、19、38μmol·L^-1)等体细胞胚成熟培养条件,以及对不同起源(体细胞胚、合子胚和种子)的幼苗形态特征的比较,筛选出最优的天山云杉体细胞胚成熟与萌发条件。采用SPSS18.0等统计软件对体细胞胚进行统计分析。【结果】1)天山云杉14个株系诱导体细胞胚的结果表明,不同株系在同一成熟培养基上诱导体细胞胚的数量存在差异;其中4个株系及其接种量对体细胞胚形成数量影响的结果表明,不同株系及其接种量诱导体细胞胚的数量也存在差异,当接种量为100mg时,T36株系的体细胞胚诱导数量最高,为3470±546个,显著高于其他接种量和株系(P<0.05)。2)在4种不同成熟培养基上,均形成了成熟的体细胞胚,在1/2BLG+30g·L^-1麦芽糖培养基上形成的体细胞胚数量高于其他培养基,分别为2044个(T6株系)和2282个(T36株系),且与其他培养基差异显著(P<0.05)。3)不同ABA浓度对天山云杉体细胞胚诱导数量的影响无显著性差异(P>0.05),在ABA浓度为1.9~38μmol·L^-1时,其体细胞胚平均诱导数量为2850~2913个,其中以7.6μmol·L^-1ABA的浓度处理效果较好,平均获得2913个正常体细胞胚,高于其他处理。4)将不同起源(体细胞胚、合子胚和成熟种子)萌发的小植株进行对比,结果表明,体细胞胚和合子胚幼苗发育阶段基本一致,但合子胚的幼苗比体细胞胚的幼苗约大1倍,但二者间差异不显著(P>0.05);体细胞胚与合子胚子叶的平均数量一致,二者无显著差异(P>0.05),多数幼苗子叶数量为7~8个。【结论】天山云杉体细胞胚成熟阶段的适宜培养条件为胚性愈伤组织接种量100mg,1/2BLG培养基添加7.6μmol·L^-1的ABA及75%PEG4000、30g·L^-1麦芽糖,并添加750mg·L^-1的L-谷氨酰胺或50mg·L^-1L-天冬酰胺。不同株系在诱导体细胞胚的数量上存在差异。体细胞胚再生植株与合子胚植株在形态上相似。研究结果可为天山云杉体细胞胚的大规模繁殖和工厂化生产提供基础。     

拉枝刻芽对苹果幼树1年生枝条萌芽和内源激素含量的影响

以3a生烟富3苹果为试材,研究了拉枝刻芽处理对苹果幼树1a生枝条萌芽率和叶片4种内源激素(IAA、GA_3、ZT、ABA)含量的影响。结果表明,刻芽处理的枝条萌芽率是未刻芽处理的1.34倍,平拉枝条的萌芽率最高,显著高于下拉枝和直立枝;下拉枝的赤霉素(GA_3)、生长素(IAA)和玉米素(ZT)含量均最高,显著高于直立枝,而脱落酸(ABA)含量以直立枝最高,下拉枝最低;GA_3/ABA、ZT/ABA、(GA_3+IAA)/ABA、(GA_3+ZT)/ABA均以下拉枝最大,直立枝最低;直立枝中,GA_3和ABA含量在下部最高,IAA和ZT含量在上部最高;平拉枝中,GA_3、IAA和ABA含量均以上部最高,ZT含量在中部最高;下拉枝中,GA_3含量在中部最高,IAA和ABA含量在上部最高,ZT含量在上部和中部无显著差异,两者显著高于下部。     

Plantlet regeneration through somatic embryogenesis in Nordmann's fir (Abies nordmanniana)

I studied the influence of various combinations of auxin and cytokinin concentrations, and the increased content of zinc and enzymatic casein hydrolizate in SH medium on initiation and proliferation of embryogenic callus of Abies nordmanniana(Steven) Spach. Additionally, the effect of ABA, PEG-4000 and different wavelengths on the maturation of somatic embryos was tested.The use of optimum composition of modified SH medium with BA, KIN and 2.4-D while simultaneously ensuring appropriate external conditions resulted in 15.5 % embryogenesis. Finally, satisfactory results of micropropagation of A. nordmanniana by somatic embryogenesis were obtained providing seven lines of embryogenic callus with high proliferation capacity. Those lines gave properly developed seedlings in white LED light with a wavelength of 400-700 nm, preceded by eight-week vernalization treatment of the callus. This paper may provide a protocol by which all stages of somatic embryogenesis of A. nordmanniana can be carried out, including the preceding 24-h seed disinfection with Na OCl and PVP, which resulted in 100 % frequency of uninfected zygotic embryos that were capable of starting embryogenesis.     

Somatic Embryogenesis and Plantlet Regeneration in Callus Cultures Derived from Mature Zygotic Embryos of Slash Pine

1TheworkwassupportedbyChineseNationalHighTechnologyDevelopmentProgram"863project"IntroductionSomaticembryogenesishasagreatpotentiaIforrapidProPaationofsuPCriorconifcrspccics.ThefirstreportonsomaticembryogenesisandplantlctrcgencrationinconifersPeCieswasach…     

不同盐浓度对木麻黄无性系愈伤组织的影响

以短枝木麻黄4个无性系幼枝茎段为外植体，在不同NaCl浓度的培养基上进行愈伤组织诱导，观察不同盐浓度对木麻黄外植体愈伤组织分化的影响。试验结果表明：培养基中NaCl浓度达到0．064mol／L(0．374％)，比正常浓度高出320倍的情况下木麻黄外植体表现出很强的耐盐性，仍然能诱导出正常的愈伤组织；不同的NaCl浓度的各个处理之间愈伤组织的诱导率、大小、出芽率、继代愈伤组织的大小均没有显著差异；但无性系之间的愈伤组织的诱导率及愈伤组织的大小均有极显著差异；不同继代间愈伤组织的大小有极显著差异。     

Plantlet regeneration through somatic embryogenesis in Nordmann’s fir (<Emphasis Type="Italic">Abies nordmanniana</Emphasis>)

I studied the influence of various combinations of auxin and cytokinin concentrations, and the increased content of zinc and enzymatic casein hydrolizate in SH medium on initiation and proliferation of embryogenic callus of Abies nordmanniana (Steven) Spach. Additionally, the effect of ABA, PEG-4000 and different wavelengths on the maturation of somatic embryos was tested. The use of optimum composition of modified SH medium with BA, KIN and 2.4-D while simultaneously ensuring appropriate external conditions resulted in 15.5 % embryogenesis. Finally, satisfactory results of micropropagation of A. nordmanniana by somatic embryogenesis were obtained providing seven lines of embryogenic callus with high proliferation capacity. Those lines gave properly developed seedlings in white LED light with a wavelength of 400-700 nm, preceded by eight-week vernalization treatment of the callus. This paper may provide a protocol by which all stages of somatic embryogenesis of A. nordmanniana can be carried out, including the preceding 24-h seed disinfection with NaOCl and PVP, which resulted in 100 % frequency of uninfected zygotic embryos that were capable of starting embryogenesis.     

长蕊杜鹃扦插内源激素变化及解剖结构观察

以野生长蕊杜鹃半木质化茎段为试材,采用植物生长激素KIBA,KNAA和Hormodin对插穗进行处理,测定不同生根期内源激素IAA、GA3、ZR、ABA含量,对扦插不同时期插穗茎段进行电镜扫描。结果表明:先快蘸液态KNAA(3 000mg·L-1),再迅速蘸取粉状Hormodin#1处理对插条生根具有显著影响,插穗生根率达到了81.25%;较高浓度的内源IAA含量有利于根原基分化形成,GA3含量上升与插穗愈伤组织的诱导、不定根的形成呈正相关性,低水平的ABA更有利于长蕊杜鹃扦插生根;插穗在根原基分化和愈伤组织形成时期消耗內源ZR,在不定根长出后自身合成ZR;通过对淀粉粒研究表明扦插期补充糖类物质是必要的,簇状晶体产生表明钙调控等生理机制形成。     

Somatic embryogenesis from cell suspension cultures of aspen clone

Suspension cultures initiated from callus derived from petiole explants of aspen hybrid (Populus tremuloides × P. tremula) produced somatic embryos. Callus was induced on a MS medium supplemented with 5 mg·L–1 2,4-D and 0.05 mg·L–1 zeatin under light conditions. Embryogenic calli were obtained when a subsequent subculture of calli was suspended in the same basal me-dium with 10 mg·L–1 2,4-D. The highest number of globular embryos were induced from embryogenic calli by cell suspension cul-ture in a MS liquid medium supplemented with 10 mg·L–1 2,4-D. Genotype and 2,4-D concentration were vital to the induction of embryogenic calli producing competent cells. Embryogenic calli for each genotype were heterogeneous. Green calli with gel-like consistency could yield more competent cells than light yellow embryogenic calli. However, some globular embryos broke into slices and some developed abnormally after one month of culture under the same or other hormonal conditions.