盐酸克仑特罗单克隆抗体的研制

本研究通过将盐酸克仑特罗分别与自制血清白蛋白、牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联后,制成免疫原和包被抗原,利用单克隆抗体制备技术,制备了能够分泌抗盐酸克仑特罗的单克隆抗体细胞株。而以自制血清白蛋白效价最好,且该株细胞分泌的抗体特异性强,与其它克仑特罗类药物无交叉反应。     

盐酸克仓特罗单克隆抗体的研制

本研究通过将盐酸克仑特罗分别与自制血清白蛋白、牛血清白蛋白和卵清蛋白相偶联后,制成免疫原和包被抗原,利用单克隆抗体制备技术,制备了能够分泌抗盐酸克仑特罗的单克隆抗体细胞株.而以自制血清白蛋白效价最好,且该株细胞分泌的抗体特异性强,与其它克仑特罗类药物无交叉反应.     

盐酸克仑特罗单抗检测试剂盒的研制

在筛选盐酸克仑特罗单克隆抗体的基础上，首次研制出利用单克隆抗体对动物组织中残留的盐酸克仑特罗进行检测的试剂盒，本研究通过对几种包被抗原种类和包被浓度进行筛选，并对单抗和二抗最佳工作效价进行严格的筛选和研究。本试剂盒的最低检测限为0．1ng／m1，检测范围在0．1～10ng／ml，通过对24份阳性样品检测并与德国r—b1opharm公司和英国的RANDOX公司同类试剂盒作对比试验，阳性符合率95．8%。     

盐酸克仑特罗单抗检测试剂盒的研制

在筛选盐酸克仑特罗单克隆抗体的基础上,首次研制出利用单克隆抗体对动物组织中残留的盐酸克仑特罗进行检测的试剂盒,本研究通过对几种包被抗原种类和包被浓度进行筛选,并对单抗和二抗最佳工作效价进行严格的筛选和研究。本试剂盒的最低检测限为0.1ng/ml,检测范围在0.1～10ng/ml,通过对24份阳性样品检测并与德国r-biopharm公司和英国的RANDOX公司同类试剂盒作对比试验,阳性符合率95.8%。     

恩诺沙星免疫抗原与检测抗原的制备及鉴定

采用N-羟基琥珀酰亚胺法将恩诺沙星（Enro）半抗原与载体蛋白-牛血清白蛋白（BSA）相偶联，制备出了抗Enro单克隆抗体的免疫抗原Enro-BSA。同样的方法，将Enro与卵清白蛋白（OVA）相偶联制备了抗Enro单克隆抗体的检测抗原Enro-OVA。紫外扫描光谱及动物免疫试验结果表明，其偶联成功。     

用于检测孔雀石绿的全抗原的合成与鉴定

采用重氮化法,将半抗原副品红(Pararosaniline,PA)分别与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,反应得到免疫抗原和包被抗原,其偶联最佳结合比分别为8.8∶1,12.7∶1,6.9∶1,经紫外扫描光谱和蛋白电泳鉴定得到全抗原。用制备的抗原乳化后免疫小鼠获得了效价较高的多克隆抗体。为进一步制备抗孔雀石绿单克隆抗体打下基础。     

盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

磺胺甲(噁)唑单克隆抗体的制备及初步鉴定

以重氮化方法将磺胺甲噁唑分别与人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA)载体蛋白连接,分别作为免疫原与包被原进行抗血清制备及酶联免疫吸附测定法(ELISA)试验,经筛选产生了特异性单克隆抗体。交叉试验表明:产生的特异性抗体与磺胺甲噁唑反应明显,与其他类似物交叉反应不明显。     

磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的研制

本研究将磺胺二甲嘧啶与人血清白蛋白、卵清白蛋白联接 ,分别作为免疫原、包被原 ,建立 EL ISA筛选方法 ,并利用杂交瘤技术 ,制备了分泌抗磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的细胞株。经鉴定的单克隆抗体的蛋白亚型为 Ig G1 ;染色体数为 88～94条 ;分子量为 170 .2 KDa;亲和常数为 2 .5× 10 1 0 M- 1 ;与其他 6种磺胺药 (SDM、SDEP、SMM、SMZ、SD、SQ)无交叉反应     

应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究

应用酶联免疫吸附法(ELISA)，检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗残留，实现了肉猪活体盐酸克仑特罗快速测定。实验结果表明，盐酸克仑特罗的线性范围为200—2000ng/kg，最小检出限为100ng/L,样品不用前处理可直接检测，1个样品的2个平行样测定时间为45min。     

畜产品兽药残留检测技术获突破

继“磺胺二甲嘧啶和盐酸克仑酶联免疫试剂盒”成果通过农业部组织的专家鉴定后,“玉米赤霉醇、克仑特罗、氯霉素、恩诺沙星和链霉素单克隆抗体试剂盒”及“四环素类酶联免疫试剂盒”又通过了农业部组织的专家鉴定。     

农业部发布饲料中盐酸克仑特罗测定的行业标准

农业部今年 2月印发的农市发 [2001]2号文通知：“饲料中盐酸克仑特罗的测定”等 5项标准业经农业部审查批准为中华人民共和国行业标准，其中“ NY 438－ 2001饲料中盐酸克仑特罗的测定”属强制性标准。 农业部发布饲料中盐酸克仑特罗测定的行业标准     

禽腺病毒血清4型中国流行株fiber2蛋白单克隆抗体制备与鉴定

旨在制备禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)中国流行株的fiber2蛋白的特异性单克隆抗体。以纯化的FAdV-4中国流行株CH/HNJZ/2015免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾脏与SP2/0细胞融合，采用基于fiber2蛋白的间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，经过5次亚克隆，获得2株分泌抗fiber2蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2C3和7B4。以制备的2C3和7B4腹水进行亚型鉴定、反应原性、特异性以及中和活性测定。结果显示，成功制备了抗FAdV-4 fiber2蛋白的特异性单克隆抗体，获得的单克隆抗体均为IgM亚型，可特异性识别FAdV-4及其fiber2蛋白，为FAdV-4的免疫检测和fiber2蛋白功能研究提供了研究材料。     

重金属镉离子免疫抗原初步制备与鉴定

选用螫合剂Isothiocyanobenzyl-EDTA（IEDTA）分别桥接载体蛋白KLH和BSA。络合重金属镉离子，初步制备免疫抗原和检测抗原，免疫Balb／C小鼠并制备抗血清；利用紫外分光光度法、三硝基苯磺酸法（TNBs）和测定抗体效价初步鉴定抗原。建立了重金属镉离子ELISA快速检测技术及单克隆抗体高效特异的免疫与检测抗原。抗原紫外吸收峰与载体蛋白紫外吸收峰有明显差异，2种抗原游离氨基酸含量在33％～40％之间，抗原蛋白含量均高于70％，血清效价在1：81920以上。结果提示，免疫抗原特异性较好。可用于单克隆抗体制备。     

全国停产停售盐酸克仑特罗片剂曾被用作瘦肉精

据《北京晨报》9月30日报道，目前，国家食品药品监督管理局发出通知，停止盐酸克仑特罗片剂在我国的生产、销售和使用，撤销批准证明文件。此前经媒体曝光的“双汇健美猪”曾被不法分子使用了从非法渠道流入的盐酸克仑特罗。     

国家食药监局：“瘦肉精”不许用了

盐酸克仑特罗有个不太光彩的名字，俗称“瘦肉精”，但其实它是主要用于支气管哮喘治疗的药物。国家食品药品监督管理局日前发出通知，决定停止盐酸克仑特罗片剂在我国的生产、销售和使用，撤销批准证明文件；已生产的药品由当地食品药品监督管理部门监督销毁。     

瘦肉精的有害性研究及检测与管理

“瘦肉精”学名盐酸克仑特罗，英文名Clenbuteral（CLB），属于G一肾上腺类激素的一种。盐酸克仑特罗是由美国Cyanamid公司经化学合成而制得的一种呼吸系统药物，临床用于治疗哮喘病。20世纪80年代初研究发现，将一定量的克仑特罗添加到饲料中，可以显著促进动物生长，提高瘦肉率，20世纪90年代，我国开始作为饲料添加剂引入并推广，     

气相色谱-质谱联用法测定饲料中盐酸克仑特罗的分析

<正>盐酸克仑特罗易溶于水,由于饲料中成分复杂,若直接用水溶液提取,则提取液中含大量杂质。利用克仑特罗易溶于乙酸乙酯和水的特性,采用二次提取方法来溶出和纯化样品,即将饲料中的盐酸克仑特罗     

猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及鉴定

[目的] 纯化猪塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV）SVV-CH-HB2016毒株，并制备其结构蛋白VP1、VP2和VP3的单克隆抗体。[方法] 以蔗糖密度梯度离心法纯化的SVV-CH-HB2016病毒颗粒作为抗原，免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行细胞融合。通过间接免疫荧光试验（IFA）结合间接ELISA筛选阳性细胞株，制备能特异性分泌针对结构蛋白的杂交瘤细胞株。采用Western blotting和IFA方法分别检测单克隆抗体与重组表达蛋白及天然结构蛋白的反应性，并对单克隆抗体的病毒中和保护效果进行测定。利用空斑试验和实时荧光定量PCR方法探究中和性单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株吸附过程的影响，最后用抗体相加试验来分析14株单克隆抗体的抗原表位。[结果] 在蔗糖密度梯度为5%~45%（W/V）时获得了纯度较好、浓度较高的SVV-CH-HB2016毒株结构蛋白，免疫小鼠血清抗体效价均达到了1：12 800，成功制备了17株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经验证14株单克隆抗体能与重组结构蛋白发生Western blotting反应，17株单克隆抗体能与病毒发生IFA作用；2G6、4A3和4C11 3株单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株感染的BHK-21细胞具有明显中和保护作用，也能有效抑制SVV-CH-HB2016毒株对293T细胞的吸附。经分析发现，除1F5与2E1、4B8与4F11外，其余10株单克隆抗体分别针对不同抗原表位。[结论] 本研究初步建立了SVV的纯化方法，制备了17株特异性针对SVV-CH-HB2016毒株的单克隆抗体，为后期进一步开展SVV全病毒灭活疫苗的研发、ELISA检测方法的建立及保护性抗原表位的鉴定奠定了基础。     

克伦特罗单克隆抗体的研制及初步鉴定

为制备克伦特罗(clenbuterol,CL)单克隆抗体,鉴定其特性,采用重氮化法合成克伦特罗-人血清白蛋白(CL-HSA)作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效价和特异性.将细胞反复冻存和传代,考察稳定性.获得细胞株C611...