烟碱型乙酰胆碱受体β4亚基点突变体的构建

利用PCR介导的定点突变技术构建包含β4亚基的烟碱型乙酰胆碱受体点突变体模型,同时采用双电极电压钳技术,对激动剂ACh和拮抗剂α-CTx RegIIA对突变受体的活性进行检测。结果表明:β4亚基胞外N端序列第168位的异亮氨酸(Ile)成功突变成了丝氨酸(Ser),突变后的受体对激动剂ACh的活性降低,对拮抗剂α-CTx RegIIA的活性降低了1.4倍,半阻断剂量(IC_(50))为170 nmol·L~(-1)。     

微波对雏鸡的认知功能和NMDA受体亚基基因表达的影响（摘要）

[目的]研究微波对鸡胚生长发育及雏鸡认知功能的影响。[方法]采用磁控管发射2450MHz的微波来模拟微波辐射源辐射种蛋,直到雏鸡孵出后,分别采用一次性被动回避学习和RT-PCR检测微波对雏鸡的认知功能和NMDA受体NR1亚基与NR2亚基表达量的影响。[结果]微波辐射后暴露组的回避率显著低于对照组,特别在辐射强度最高组的回避率极显著低于对照组。同时暴露组有2组雏鸡体重增加,其中一组的孵化时间有所增加。经RT-PCR分析,NR2亚基表达量在第10天而及15天时都上调,NR1亚基表达量只在第15天时才下调。[结论]微波对个体发育具有一定影响,通过使端脑中NMDA受体结构组成和功能发生改变,使自身的调节能力下降,从而对认知功能有一定损害。     

微波对雏鸡的认知功能和NMDA受体亚基基因表达的影响

[目的]研究微波对鸡胚生长发育及雏鸡认知功能的影响。[方法j采用磁控管发射2450MHz的微波来模拟微波辐射源辐射种蛋，直到雏鸡孵出后，分别采用一次性被动回避学习和RT—PCR检测微波对雏鸡认知功能和NMDA受体NRl亚基与NR2亚基表达量的影响。f结果]微波辐射后，暴露组的回避率显著低于对照组，特别在辐射强度最高组的回避率极显著低于对照组。同时暴露组有2组雏鸡体重增加，其中一组的孵化时间有所增加。经RT—PCR分析，NR2亚基表达量在第lO天及15天时都上调，NRl亚基表达量只在第15天时才下调。[结论]微波对个体发育具有一定影响，通过使端脑中NMDA受体结构组成和功能发生改变，使自身的调节能力下降，从而对认知功能有一定损害。     

基于同源模建方法对玉米夜蛾信息素结合蛋白三维结构的预测与分析

玉米夜蛾食性杂,危害作物多,分布范围广。该研究用同源模建的方法构建了玉米夜蛾信息素结合蛋白的三维结构。Procheck、Verify 3D、Errat、ProSa2003等程序的评价结果表明模建结构是可靠的。模建结构显示玉米夜蛾的信息素结合蛋白由6个α-螺旋和连接这些螺旋的回折构成,底物结合口袋成锥形。6个保守的半胱氨酸形成3个对结构起稳定作用的二硫键。     

烟夜蛾气味结合蛋白的同源模建

[目的]预测烟夜蛾(Helicoverpa assulta)的气味结合蛋白。[方法]用同源模建的方法构建烟夜蛾(Helicoverpa assulta)气味结合蛋白的三维结构,并用Procheck、Verify_3D、Errat、ProSa2003等程序进行评价。[结果]程序评价结果表明模建结构是可靠的。模建结构显示烟夜蛾的气味结合蛋白由6个α-螺旋和连接这些螺旋的回折构成,底物结合口袋成锥形;6个保守的半胱氨酸形成3个对结构起稳定作用的二硫键。[结论]预测结构可靠,为烟夜蛾的研究及虫害的防治提供了理论依据。     

用同源模建方法预测蔷薇科斜条卷叶蛾信息素结合蛋白的三维结构

[目的]预测蔷薇科斜条卷叶蛾(Choristoneura rosaceana)信息素结合蛋白的三维结构。[方法]用同源模建的方法构建蔷薇科斜条卷叶蛾信息素结合蛋白的三维结构,并分别用Procheck、Verify_3D、Errat、ProSa2003等程序对模建结构的可靠性进行评价。[结果]模建结构显示蔷薇科斜条卷叶蛾的信息素结合蛋白由6个α-螺旋和连接这些螺旋的回折构成,底物结合口袋成锥形的特征,6个保守的半胱氨酸形成3个对结构起稳定作用的二硫键。[结论]预测结构可靠,为蔷薇科斜条卷叶蛾的研究及虫害的防治奠定了理论基础。     

灵芝中真菌免疫调节蛋白LZ-8和LZ-9的比较分析

利用生物信息学方法从蛋白质基本理化特性、蛋白质三维结构以及蛋白表面电荷性质等方面,对灵芝中两种真菌免疫调节蛋白LZ-8和LZ-9进行了预测和比较分析。结果表明:LZ-9蛋白结构柔性较好,N端疏水性更强;利用同源建模构建的LZ-9三维结构模型具有稳定的空间立体结构。比较分析LZ-9与LZ-8蛋白表面静电势能,发现LZ-9中5个突变(R9G、K41Q、D45G、N58D和T89K)改变了蛋白表面静电性质,影响了LZ-9与细胞表面受体的结合,从而产生了与LZ-8不同的生物功能。     

球孢白僵菌硝酸还原酶基因同源重组载体的构建

根据已报道球孢白僵菌(Beauveria bassiana)硝酸还原酶基因(nitrate reductase,NR)序列设计引物,从球孢白僵菌D1-5菌株基因组DNA中扩增并克隆该基因上下游片段NR1和NR2,成功构建了球孢白僵菌NR基因同源重组敲除载体,以期敲除球孢白僵菌的NR基因,建立白僵菌同源重组基因敲除体系。     

猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

应用SMART技术构建猪肾上皮细胞(PK-15)酵母双杂交cDNA文库,为进一步筛选与副猪嗜血杆菌(HPS)细胞致死膨胀毒素(CDT)不同亚基蛋白相互作用蛋白奠定基础。提取PK-15的总RNA,经LD-PCR合成双链cDNA,运用SMART技术,再通过同源重组的方法,构建了PK-15细胞的酵母cDNA文库。经检测,文库滴度达到了2.8×108CFU·mL-1,插入的双链cDNA片段范围为300～1 000 bp,片段平均大小为500 bp。此文库可用于筛选与HPS CDT不同亚基蛋白相互作用的蛋白,这将为治疗靶点的选择、基因缺失弱毒活疫苗的设计提供科学依据。     

鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

选取对新城疫病毒(NDV)易感的鸡胚成纤维细胞(CEF),Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质(M)蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响.结果表明:提取的细胞总RNA的D260nm/D...     

Kinesin superfamily motor protein KIF17 and mLin-10 in NMDA receptor-containing vesicle transport

Experiments with vesicles containing N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor 2B (NR2B subunit) show that they are transported along microtubules by KIF17, a neuron-specific molecular motor in neuronal dendrites. Selective transport is accomplished by direct interaction of the KIF17 tail with a PDZ domain of mLin-10 (Mint1/X11), which is a constituent of a large protein complex including mLin-2 (CASK), mLin-7 (MALS/Velis), and the NR2B subunit. This interaction, specific for a neurotransmitter receptor critically important for plasticity in the postsynaptic terminal, may be a regulatory point for synaptic plasticity and neuronal morphogenesis.     

烟粉虱B型和Q型竞争能力的室内比较分析

【目的】烟粉虱（Bemisia tabaci）B型和Q型均为外来入侵种类。近年田间调查表明,Q型在中国大部分地区已经取代B型成为优势种,有必要研究烟粉虱生物型之间的取代机制及其影响因素。论文在实验室条件下比较这两种生物型的取食能力及竞争能力,以期为烟粉虱有效治理提供依据。【方法】利用刺吸电位（electrical penetration graph,EPG）技术测定烟粉虱B型和Q型雌、雄成虫在黄瓜叶片上的取食行为,并在室内黄瓜上混合饲养两种烟粉虱生物型,多代监测其种群动态和雌雄比例,以比较其在室内无农药压力条件下的竞争力。【结果】 EPG结果显示,（i）总体上,烟粉虱B型的总刺探次数（P=0.020）和刺探的总持续时间（P=0.048）显著高于Q型;在第2阶段B型E波时间百分比显著低于Q型（P=0.001）,刺探时间百分比差异不显著;B型Pd波总次数（P=0.012）和Pd波总持续时间（P=0.016）均显著高于Q型;（ii）烟粉虱B型雌性非刺探波Np的时间百分比显著低于雄性（P=0.035）;而第2阶段刺探时间的百分比显著大于雄性（P=0.011）,与唾液分泌相关的第2阶段E波百分比却显著短于雄性（P＜0.001）;但B型雌、雄性成虫在第3阶段吸食韧皮部汁液的时间则差异不显著（P＞0.05）。Q型雌性不仅在第2阶段刺探的百分比显著高于雄性（P=0.031）,而且在整个记录时间内的总持续时间也显著高于雄性（P=0.039）,而雌性的非刺探时间Np波却显著短于雄性（P=0.038）;（iii）对于雌性,烟粉虱B型被动吸食植物汁液的E2＞10 min的个数显著多于Q型（P=0.036）;但是,烟粉虱Q型雌性第2阶段E波百分比显著高于B型雌性（P＜0.001）。两种生物型混合饲养结果显示,随烟粉虱世代增加,B型和Q型所占比例逐步出现分化。第1代时,B型种群数量在混合种群中所占比例已接近80%;而第5代和第6代时,B型所占比例已达到98%,Q型近乎完全被B型取代。同种生物型烟粉虱两性间的比例变化趋势一致,且同种生物型烟粉虱雌性所占比例均略高于其雄性。【结论】室内EPG记录和多代混养种群动态结果都表明,在室内没有农药压力的环境下,烟粉虱B型在黄瓜上的取食能力和种群竞争能力均高于Q型,而且两种生物型雌性的取食和竞争能力均高于雄性。     

IWF诱导小麦悬浮细胞产生NO及其与Ca2+的关系

 【目的】以感染叶锈菌的小麦叶片细胞间隙液IWF-260作为激发子,刺激小麦洛夫林10悬浮细胞,探讨悬浮细胞受激发子刺激引发的NO变化情况及其产生的可能分子机制。【方法】采用Greiss试剂法及荧光分子探针DAF-2DA标记法检测胞内NO的动态变化,同时借助药物学试验探讨Ca2+和NO的关系。【结果】IWF-260能诱导小麦悬浮细胞产生NO,NO在IWF-260刺激诱发的细胞死亡过程中发挥重要作用。药物学抑制剂试验证明NOS和NR及胞外钙离子内流均与IWF-260刺激小麦悬浮细胞产生的NO有密切关系,且在NO的产生途径中,NR途径为主要途径。【结论】IWF-260能够诱导小麦悬浮细胞产生NO,NOS、NR及胞外Ca2+内流参与了此过程。     

猪组成型雄烷受体激动剂高通量药物筛选模型的建立

构建猪组成型雄烷受体(pgCAR)激动剂体外高通量筛选模型。利用RT-PCR技术从猪肝脏总RNA中扩增出pgCAR基因序列,将测序后正确的pgCAR片段连接到pcDNA 3.1 vector上构建表达载体pcDNA 3.1-CAR;将合成的5个拷贝NR1(Nuclear receptor sites)插入PGL3-TK-promoter构成报告质粒(NR1)5-TK-luc,与PRL-TK报告质粒构成双荧光报告系统。用PEI转染技术将表达载体与报告质粒共转染HepG 2细胞株中,通过检测荧光素酶基因表达状况评价具有生物活性配体化合物对pgCAR激动活性。阳性药苯妥英钠明显提高荧光素酶的表达,最大上调倍增数可达约2.53倍,并且在一定浓度下阳性药与相对荧光酶的活性表达有较好量效关系。     

烤烟感染赤星病后4种酶动态的研究

 本文研究11个烤烟品种接种赤星病病菌后,过氧化物酶(POD)同工酶、多酚氧化酶(PPO)、硝酸还原酶(NR)和抗坏血酸氧化酶(AAO)活性的变化规律,结果表明,相对抗赤星病强的品种,PPO在接种36h内活性升高,以后下降;POD同工酶活性变幅大,变化快,接种初期活性稍下降,然后增强,其中以阴极端2,4同工酶带增加较快,接种180h后就由弱酶带变为强带;NR活性变化不大;AAO活性提高.相反,抗赤星病弱的品种,ppo活性低于对照;POD同工酶变化不大,呈下降趋势;NR活性变幅大;AAO在接种初期活性下降,84h后回升.通过对不同品种的烤烟烟株接种赤星病菌后的4种酶活性的测定,探察到了一些抗病机理,为进一步筛选烟草抗赤星病的生化指标作了研究.     

Enhanced and delayed stress-induced alcohol drinking in mice lacking functional CRH1 receptors

There is a relation between stress and alcohol drinking. We show that the corticotropin-releasing hormone (CRH) system that mediates endocrine and behavioral responses to stress plays a role in the control of long-term alcohol drinking. In mice lacking a functional CRH1 receptor, stress leads to enhanced and progressively increasing alcohol intake. The effect of repeated stress on alcohol drinking behavior appeared with a delay and persisted throughout life. It was associated with an up-regulation of the N-methyl-d-aspartate receptor subunit NR2B. Alterations in the CRH1 receptor gene and adaptional changes in NR2B subunits may constitute a genetic risk factor for stress-induced alcohol drinking and alcoholism.     

Expression of high-affinity binding of human immunoglobulin E by transfected cells

The receptor with high affinity for immunoglobulin E (IgE) on mast cells and basophils is critical in initiating allergic reactions. It is composed of an IgE-binding alpha subunit, a beta subunit, and two gamma subunits. The human alpha subunit was expressed on transfected cells in the presence of rat beta and gamma subunits or in the presence of the gamma subunit alone. The IgE binding properties of the expressed human alpha were characteristic of receptors on normal human cells. These results now permit a systematic analysis of human IgE binding and a search for therapeutically useful inhibitors of that binding.