鸡传染性喉气管炎活疫苗生产工艺的改进——鸡胚绒毛尿囊膜渗透法接种应用实验

采用鸡胚绒毛尿囊膜渗透法给鸡胚接种病毒,收获感染的鸡胚绒毛尿囊膜制备鸡传染性喉气管炎活疫苗,相比于传统的人工气室绒毛尿囊膜接种法和尿囊腔接种法可降低鸡胚的早死亡率,提高鸡胚利用率,降低生产成本,提高单产量。     

采用鸡胚尿囊腔接种培养鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗的试验

采用鸡胚尿囊腔接种培养鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗的试验王少英，赵丽明，陈任重，赵素霞（广东省生物药厂，广州．５１０６３０）鸡传染性喉气管炎病毒（ＬＴＶ）在鸡胚复制的位置主要在鸡胚绒毛尿囊膜（ＣＡＭ），传统的生产方法是采用在鸡胚做人工气室，通过人工气室接...     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产工艺改进试验

鸡传染性喉气管炎（ILT）是由疱疹病毒科喉气管炎病毒引起的鸡的一种急性呼吸道传染病，我国已有许多地区爆发流行，给养鸡业带来了严重危害。通过疫苗接种可以有效防止本病的爆发和流行。我国使用的国产鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗基本上都是采用鸡胚绒毛尿囊膜接种鸡胚，收获感染的鸡胚绒毛尿囊膜，混合研磨，加适当的稳定剂，经冷冻真空干燥制成。但是这种方法要制造人工气室，操作难度大，并且接毒后死胚率较高。为了简化生产工艺、降低生产成本，在不影响产品质量的前提下，我们采用直接接种尿囊腔培养病毒的方法，生产出几批传染性喉气管炎弱毒疫苗，质量检测达到《兽用生物制品质量标准汇编》（以下简称标准》）要求，并且使用效果较好，现将试验过程报告如下。     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫异常的分析

鸡传染性喉气管炎(ILT)弱毒疫苗系用鸡传染性喉气管炎病毒弱毒株接种SPF鸡胚，收获感染鸡胚的绒毛尿囊膜，混合研磨，加适宜稳定剂，经冻干制成。该苗用于预防鸡传染性喉气管炎。     

鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗生产工艺改进试验

采用人工气室绒毛尿囊膜和尿囊腔两种接种方法制备鸡痘活疫苗，结果表明经尿囊腔接种的结果和经人工气室绒毛尿囊膜接种的结果相同。因此，以尿囊腔接种代替人工气室绒毛尿囊膜接种，可以降低成本，简化工艺。本试验为以后采用机械化接种生产鸡痘苗提供了可靠的数据。     

鸡传染性喉气管炎疫苗生产工艺改进初探

在鸡传染性喉气管炎活疫苗生产中，用尿囊腔接种法代替绒毛尿囊膜接种法，收获的胚液和绒毛尿囊膜的含毒量(EID5D)均可达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》对制苗的要求，提高了种蛋的利用率。     

鸡传染性法氏囊炎活疫苗(B87株)生产工艺的改进--鸡胚绒毛尿囊膜渗透接种法应用试验

采用绒毛尿囊膜渗透法给鸡胚接种病毒,收获感染的胎儿及绒毛尿囊膜,制备鸡传染性法氏囊炎（B87株）活疫苗,相比于传统的人工气室绒毛尿囊膜接种法和尿囊腔接种法,可降低鸡胚早死率且无存活鸡胚,提高了鸡胚利用率,降低了生产成本.     

鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产工艺的改进

在鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗生产中,通过改用尿囊腔接种种毒,减少鸡胚绒毛尿囊（ＣＡＭ）的含量,加入适量尿囊液,制备了鸡传染性喉气管炎混合型弱毒疫苗。这一改进简化了生产工艺,可使生产成本大幅度下降;用此法生产３批共１３５０万羽份疫苗,经在山东、河南、辽宁、黑龙江等省应用,其免疫效果与单纯性ＣＡＭ弱毒疫苗一样。     

一种新的鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗生产工艺改进试验--绒毛尿囊膜渗透法

采用一种新的鸡胚绒毛尿囊膜接种方法,即绒毛尿囊膜渗透法来制备鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗.此法不必做人工气室,减少了鸡胚早死率及人为污染率,减化了生产工艺并使鸡胚利用率大大提高.     

鸡传染性喉气管炎病毒培养特性的研究

本试验从发病鸡群分离一株鸡传染性喉气管炎病毒(命名为NM98a)，并用分离株和ILT王岗株对鸡胚绒毛尿囊膜、鸡胚尿囊腔及鸡胚肾细胞上培养进行比较研究。结果表明：ILTV经不同途径接种鸡胚和鸡胚肾细胞上培养，在鸡胚绒毛尿囊膜和鸡胚肾细胞上引起的病变不同，但最终增殖达到的感染性病毒量没有明显区别。鸡胚尿囊腔接种是ILTV增殖最佳途径。     

冻干种毒在制备鸡传染性喉气管炎和鸡痘活疫苗生产中的应用

生产设苗制备能长期保存且稳定性好、高滴度的生产种毒(种毒批 )是生产的关键。笔者结合生产实际 ,制备了鸡传染性喉气管炎和鸡痘冻干种毒 (种毒批 ) ,实践应用效果很好 ,现介绍给同行以供参考。1　材料和方法1.1　生产种毒鸡痘基础种子由中国兽医药品监察所提供的冻干鸡痘鹌鹑化弱毒Ｆ2 82Ｅ4株。经ＳＰＦ鸡舍提供的ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 ,于 - 2 0℃保存。鸡传染性喉气管炎基础种子由广东生物药厂提供的Ｋ3 17株。经黑龙江省生物制品一厂ＳＰＦ舍提供ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 - 2 0℃保存。1.2　鸡胚由…     

鸡传染性喉气管炎的诊断

从发病鸡场病场鸡管中分离到一株能使鸡胚绒毛尿囊膜产生典型痘斑的病毒，鸡胚分离物能使健康鸡发生与病鸡同样的临床症状，病愈后的血清与鸡传染性喉气管炎诊断抗原出现阳性反应，并能中和鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗，使绒毛尿囊膜不产生痘斑，鸡胚发离物置400倍“畜禽消毒液”和“抗毒威”溶液中，室温30分钟，失去在鸡胚中产生痘斑的特性，从临床症状和鸡胚分离物的各种特性，该场流行的 喉气管炎。     

利用鸡胚胎或鸡胚胎加适量鸡胚绒毛尿囊膜生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的初步试验

利用鸡胚胎或鸡胚胎加适量鸡胚绒毛尿囊膜生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的初步试验齐铁英，张亚华，崔浩，张继东（黑龙江省生物制品一厂，哈尔滨１５００６９）目前国内生产鸡传染性喉气管炎活疫苗均按１９９０年规程委员会审查通过的鸡传染性喉气管炎活疫苗制造及检验试行...     

采用新生产工艺生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的体会

近年来 ,在生产鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗中 ,我们改变了生产工艺 ,采用鸡胚尿囊腔接种方法生产本苗 ,取得良好的效果。1　生产材料1.1　种毒 ,由广东生物制品厂提供鸡传染性喉气管炎病毒Ｋ317弱毒株 ,用本厂ＳＰＦ鸡胚传代作为生产种毒。1.2　生产用鸡胚 ,由中日合资化血研生物技术有限公司提供的ＳＰＦ种蛋 ,自行孵化至 11日龄鸡胚。1.3　生产检验用雏鸡 ,黑龙江省生物制品一厂监察室提供 3～ 4周龄易感雏鸡。1.4　稀释液和冻干保护剂 ,自行备制灭菌生理盐水和 5 %蔗糖脱脂奶。2　生产过程2 .1　两种生产工艺的比较 ,将不同稀释倍数的种毒…     

鸡传染性喉气管炎的诊断

从发病鸡场病鸡气管中分离到一株能使鸡胚绒毛尿囊膜产生典型痘斑的病毒。鸡胚分离物能使健康鸡发生与病鸡同样的临床症状。病愈后的血清与鸡传染性喉气管炎诊断抗原出现阳性反应,并能中和鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗,使绒毛尿囊膜不产生痘斑。鸡胚分离物置400倍“畜禽消毒液”和“抗毒威”溶液中,室温30分钟,失去在鸡胚中产生痘斑的特性。从临床症状和鸡胚分离物的各种特性证明,该场流行的为鸡传染性喉气管炎。     

鸡传染性喉气管炎病毒和肾型支气管炎病毒同胚增殖的研究

将鸡传染性喉气管炎(ILT)病毒悬液和鸡传染性支气管炎(IB)病毒悬液，采取不同浓度，不同时间在同一个鸡胚上进行接种，可使两种病毒之间互不干扰，并能在同一鸡胚上共同增殖。取鸡胚绒毛尿囊膜检测传染性喉气管炎病毒(ILTV)，其EID50为10^55/0.2ml，取尿囊液检测传染性支气管炎病毒(IBV)，其EID50为10^63/0．2ml。与单项接种对照组相同；用同胚增殖的绒毛尿囊膜和尿囊液按一定比例混合，制造二联油乳剂灭活苗，免疫后30d和6个月后分别用ILT、IB强毒进行攻毒试验，结果免疫后30d，ILT和IB的保护率均为100％，免疫后6个月，ILT和IB的保护率分别为95.3％、86．7％。本试验结果表明，用此方法增殖病毒，既降低了成本，又保证了免疫效果，为今后制造二联苗提供了科学的依据。     

提高鸡传染性喉气管炎冻干活疫苗单位产量的研究

在鸡传染性喉气管炎冻干活疫苗的生产中，寻找一个恰当的种毒稀释倍数注毒，并以新的“竖旋式”手术方法代替以前的“倾倒术”方法挑出鸡胚尿囊膜，研究证明，提高了鸡胚的单产，降低污染，节省了原材料。     

鸡传染性喉气管炎病毒适应性细胞的筛选

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功筛选出具有稳定病毒滴度的病毒适应性细胞——鸡胚肝细胞。然后采用新的克隆方法缩短了克隆时长并对筛选的鸡胚肝细胞进行克隆纯化,通过与原代鸡胚肝细胞进行比较,结果显示本试验所采用的克隆方法具有高几率的特点,并且能够克隆出高活性的鸡胚肝细胞,并能够繁殖较高效价的鸡传染性喉气管炎病毒,为解决鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗在生产上存在的瓶颈问题提供了重要的基础条件。     

鸡新城疫（Ⅰ系）和鸡传染性法氏囊炎（B87株）活疫苗生产接种工艺的改进试验

此前的工艺按照<中华人民共和国兽用生物制品规程>的要求,采用接种后死胚的尿囊液(I系)和胚胎(B87株)制备鸡新城疫(Ⅰ系)和鸡传染性法氏囊炎(B87株)活疫苗,而接种后活胚的尿囊液(Ⅰ系)和胚胎(B87株)的病毒含量极少或达不到规定的配苗最低效价标准而被弃掉,造成很大浪费.为此,对制备这两种活疫苗的接种工艺进行了改进,由原来的经尿囊腔接种法改为绒毛尿囊膜渗透接种法,现报道如下.     

鸡传染性喉气管炎病毒和肾型支气管炎病毒同胚增殖的研究

将鸡传染性喉气管炎(ILT)病毒悬液和鸡传染性支气管炎(IB)病毒悬液,采取不同浓度,不同时间在同一个鸡胚上进行接种,可使两种病毒之间互不干扰,并能在同一鸡胚上共同增殖。取鸡胚绒毛尿囊膜检测传染性喉气管炎病毒(ILTV),其EID50为105.5/0.2ml,取尿囊液检测传染性支气管炎病毒(IBV),其EID50为106.3/0.2ml。与单项接种对照组相同;用同胚增殖的绒毛尿囊膜和尿囊液按一定比例混合,制造二联油乳剂灭活苗,免疫后30d和6个月后分别用ILT、IB强毒进行攻毒试验,结果免疫后30d,ILT和IB的保护率均为100%,免疫后6个月,ILT和IB的保护率分别为95.3%、86.7%。本试验结果表明,用此方法增殖病毒,既降低了成本,又保证了免疫效果,为今后制造二联苗提供了科学的依据。