‘三白’石榴再生体系的构建

为建立适用于遗传转化和育种研究的‘三白’石榴再生体系,以带芽茎段为外植体进行组织培养研究。结果表明,最佳初代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L+ PVP 2 g/L,成芽率达83.1%,成芽个数为4.9;最佳增殖培养基为B5+ BA 0.8 mg/L+ IBA 0.5 mg/L+ AgNO3 0.2 mg/L+ GA3 0.2 mg/L+椰汁100 ml/L+PVP 2 g/L,增殖系数达5.6;最佳生根培养基为B5+ IBA 1.0 mg/L+椰汁100 ml/L,生根率达95.6%,移栽成活率达87.3%,由此建立了‘三白’石榴的再生体系。     

直接诱导不定芽的矮牵牛再生体系的建立

以矮牵牛的叶片作为外植体,研究了不同浓度的激素配比对叶片直接诱导不定芽、诱导愈伤组织分化不定芽及生根的影响。得到了最适的直接诱导不定芽培养基的激素配6-BA1.5mg/L+IBA0.5mg/L、诱导愈伤组织分化不定芽的培养基的激素配比6-BA1.5 mg/L+NAA0.3~0.5 mg/L及生根培养基IBA0.03~0.05 mg/L。并在时间上,从芽的长势、芽的生根情况进行比较,结果表明：直接诱导的不定芽比诱导愈伤组织分化的不定芽所需的时间短、长势好、生根快。     

‘蕲山药’离体再生及试管微块茎的形成

为解决生产上‘蕲山药’脱毒种药供不应求的问题,以其茎节为试验材料,研究不同植物生长调节剂配比对‘蕲山药’不定芽再生的影响以及不同碳源对试管微块茎形成的影响,建立‘蕲山药’的离体再生体系及高效形成试管微块茎的方法。结果表明,在不同植物生长调节剂配比对‘蕲山药’诱导不定芽分化的影响中,MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L或MS+ ZT 0.2 mg/L+ NAA 0.2 mg/L对‘蕲山药’不定芽分化较好,形成不定芽频率分别达到81.33%、82.67%;MS+ 6-BA 0.2 mg/L + NAA 0.02 mg/L对‘蕲山药’不定芽增殖效果最好,增殖系数高达4.7;MS+ NAA 0.02 mg/L适合‘蕲山药’不定芽生根,生根率高达96.32%。150 mg/L PVP能有效降低‘蕲山药’组织培养的褐化现象。试验还发现,MS+ BA 0.5 mg/L+ NAA 0.05 mg/L+ 60 g/L蔗糖,最有利于‘蕲山药’试管微块茎的形成与生长,其微块茎形成率最高,达到了97.50%;其60、120天微块茎质量分别达到了0.18 g和0.39 g。     

春兰‘金荷鼎’ב赤蕙’杂交根状茎芽分化及生根的研究

以‘金荷鼎’ב赤蕙’根状茎为材料,研究根状茎芽分化和生根情况,包括BA与IBA的浓度配比对分化的影响和BA与NAA的浓度配比对生根的影响。结果表明,1/2MS+ IBA 0.2 mg/L+ BA 2 mg/L为春兰‘金荷鼎’ב赤蕙’根状茎的最佳分化培养基;春兰杂交兰最佳生根培养基为1/2MS+ BA 0.1 mg/L+ NAA 2 mg/L。杂交育种与组织培养技术结合是国兰新品种选育的有效方法。     

‘黑珍珠’番茄植株再生体系的研究

为了研究‘黑珍珠’番茄植株再生,以‘黑珍珠’番茄幼嫩叶片为外植体诱导愈伤组织,通过愈伤组织诱导培养、愈伤组织分化培养、不定芽增殖培养、生根培养和试管苗移栽,建立高效快速的‘黑珍珠’番茄再生体系。结果表明：最适宜的诱导叶片愈伤组织的培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA,叶片外植体愈伤组织诱导率最高可达98.2%;诱导出的愈伤组织在MS+ 1.5 mg/L 6-BA+ 0.2 mg/L IBA培养基上能很好的分化出不定芽;MS+4.0 mg/L KT+ 0.01 mg/L IBA 培养基可实现不定芽芽增殖;最适宜的生根培养基为1/2MS+ (0.05~0.08) mg/L NAA,试管苗移栽成活率达92%。     

正交设计在彩色马蹄莲组织培养中的应用

本试验通过正交设计方法,着重研究彩色马蹄莲组织培养过程中的基本培养基及植物生长调节剂6-BA、KT、IAA、NAA,对不定芽诱导、继代培养和诱导生根的影响。结果显示：初代培养BA2.0mg/L和B5培养基搭配效果最好,继代培养最优组合B5＋BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L,诱导生根1/2MS＋NAA0.1mg/L+IBA0.3mg/L对生根率的诱导效果最好。     

辽宁杨叶片高频植株再生体系的建立

为了提高辽宁杨的抗逆性及扩大它的适生区域,本研究以辽宁杨叶片为外植体材料,通过对附加不同浓度BA和NAA的MS培养基的筛选,建立了辽宁杨叶片高频植株再生体系,其不定芽诱导率及生根率都达到100%,辽宁杨最佳不定芽分化培养基配方为MS+BA 0.3 mg/L+NAA 0.05 mg/L,生根培养基配方为1/2MS+IBA 0.3 mg/L,为辽宁杨的抗性改良及分子育种实践奠定了基础。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

甜杨叶片高频率植株再生体系的建立

为了利用甜杨的抗冻性基因并利用生物技术手段对杨属进行抗寒性改良,本研究以甜杨叶片为外植体,研究了不同激素组合对甜杨不定芽诱导、分化及生根的影响,建立了甜杨叶片高频率植株再生体系。结果表明,诱导甜杨叶片不定芽分化的最适培养基配方为,MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,再生频率及平均不定芽数分别为98.8%和23.0,最适生根培养基配方为,1/2MS+IBA 0.3 mg/L,生根率可达100%。为杨属的抗寒性改良及其分子育种实践奠定了基础。     

黄花牛耳朵离体叶片不定芽的诱导及植株再生

以黄花牛耳朵的(Primulina lutea Yan LiuY.G.Wei)叶片为外植体,通过不定芽的诱导、增殖培养、生根培养等步骤建立其离体再生体系。结果表明,诱导黄花牛耳朵不定芽产生的最佳培养基为MS+6-BA 4.5 mg/L+NAA 0.03 mg/L,诱导率为93.67%,在此诱导培养基上获得的不定芽多;不定芽增殖的最佳培养基为MS+KT 3.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L,增殖系数为9.82,在此增殖培养基上获得的不定芽长势好、健壮;不定芽生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.3 mg/L,生根率为94.67%,生根时间最短。本研究以黄化牛耳朵的叶片为外植体,通过不定芽诱导途径成功获得了其再生植株,建立了离体培养体系。     

4种地被菊再生及遗传转化条件的比较

为建立地被菊‘神韵’、‘繁星粉’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’的离体再生体系,明确其遗传转化条件,为通过转基因技术培育地被菊新品种奠定基础,以叶片为外植体,研究了激素配比对4种地被菊再生芽诱导的影响;通过农杆菌介导比较了4种地被菊的遗传转化条件。研究结果表明,‘神韵’、‘繁星粉’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’可分别在含有NAA 1.0 mg/L+ BA 1.0 mg/L、NAA 0.3 mg/L+ BA 1.0 mg/L、NAA 1.5 mg/L+ BA 0.5 mg/L、NAA 0.5 mg/L+ BA 1.5 mg/L的MS培养基上获得最佳分化率;其叶片外植体的遗传转化条件为24 h预培养、OD600分别为0.4、0.5、0.3和0.4的农杆菌侵染10 min、共培养48 h、延迟培养2天、甘露糖筛选浓度为10 g/L、头孢霉素抑菌浓度为300 mg/L。部分抗性植株经PCR检测获得了目的条带,初步证明目的基因已经整合到4种地被菊的基因组中。     

人参果‘长丽’叶片再生体系的建立

为了建立人参果遗传转化再生体系,以‘长丽’品种试管苗叶片为材料,研究了培养基种类、pH对人参果试管苗生长和激素组合对人参果叶片不定芽再生的影响。结果表明：培养基pH 5.7~6.0时,MS培养基有利于人参果试管苗的生长,培养24天时平均株高达8.5 cm;GS培养基有利于试管苗生根,培养24天试管苗的生根量达到13.8个/株。6-BA与TDZ配合使用,可显著提高叶片不定芽的再分化能力,在MS+6-BA 2.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L培养基上叶片的再分化率达到83.3%,再分化系数达8.5。本试验研究发现人参果叶片不定芽再生的适宜培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+TDZ 0.5 mg/L。     

大花绣球‘无尽夏’组培苗叶片再生植株的研究

为建立大花绣球‘无尽夏’规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以‘无尽夏’组培苗叶片为外植体,研究叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片诱导形成愈伤及分化不定芽的影响。结果表明,‘无尽夏’组培苗植株中上部叶片的愈伤诱导效果好,适宜的外植体取样叶位为第3~6位叶片。初始暗培养有利于叶片形成愈伤,暗培养15~25天的效果最佳。诱导‘无尽夏’组培苗叶片形成愈伤的适宜培养基为MS+CPPU 3.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L,其愈伤诱导率达到98%以上;愈伤增殖与不定芽分化培养基为MS+6-BA 1.0~2.25 mg/L+IBA 0.1 mg/L。     

窄冠白杨组培快繁与再生体系的建立

以窄冠白杨为试材,对其组培快繁与再生体系的建立进行了初步的研究。研究表明,抗氧化剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和抗坏血酸（Vc）能有效降低外植体的褐化;该品种外植体增殖的最适培养基为1/2MS+BA0.3mg/L+NAA0.05mg/L,平均分化率为87%,增殖系数达7.5倍,与其它处理组合均呈极显著差异。硝普钠（SNP）12mg/L极显著地促进叶片不定芽分化,其再生频率与再生芽个数分别达到96.5%与8.2。窄冠白杨适宜的生根培养基为1/2MS+IBA0.3mg/L。     

‘北林雄株1号’和‘北林雄株2号’叶片再生体系的建立

为了解决白杨杂种三倍体‘北林雄株1号’和‘北林雄株2号’无性繁殖困难问题,以白杨杂种三倍体‘北林雄株1号’和‘北林雄株2号’的半木质化嫩枝为材料,对外植体消毒方法以及不同激素组合对叶片诱导不定芽的效果进行研究。结果表明：（1） ‘北林雄株1号’和‘北林雄株2号’启动培养最佳的消毒处理方法为20%浓度的84消毒液处理20 min;（2）激素6-BA以及TDZ对‘北林雄株1号’叶片不定芽再生率以及再生系数的影响显著,NAA对叶片不定芽再生率影响不显著,对再生系数的影响极显著,筛选出‘北林雄株1号’叶片再生的适宜培养基为MS+ 0.2 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA+ 0.005 mg/L TDZ;（3）激素6-BA、NAA以及ZT对‘北林雄株2号’叶片再生率和再生系数的影响均达到了显著水平,筛选出‘北林雄株2号’叶片再生的适宜培养基为MS+ 1.0 mg/L 6-BA+ 0.05 mg/L NAA+ 1.2 mg/L ZT。‘北林雄株1号’与‘北林雄株2号’高效叶片再生技术体系建立,为该品种的规模化无性繁殖以及后续的基因工程育种等研究提供了技术基础。     

杂种小叶杨叶片外植体离体再生体系的建立

为了开发新的小叶杨基因保存技术并提高其抗病虫害能力,本研究以杂种小叶杨(Populus simonii Carr.× P. deltoides cv. ‘Shanhaiguanensis’)无性系的叶片作为外植体,研究了杂种无性系的的离体培养及叶片再生体系,探讨了不同激素组合对杂种无性系不定芽的诱导、分化以及生根的影响。结果表明：最适于杂种小叶杨叶片分化的培养基是MS+0.1 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ,不定芽分化率和平均分化芽芽数分别达到最高的90%和6.8,芽长为2.14 cm;最佳生根培养基为1/2 MS+0.1mg/L IBA,生根率达90%。最后将这些再生植株成功驯化并移栽到温室。10 mg/L的卡那霉素可以抑制杂种小叶杨的诱导分化,20 mg/L的卡那霉素可以抑制杂种小叶杨不定芽的生根。本研究结果将有助于小叶杨抗病虫害等方面的遗传转化及相关研究,同时也将为小叶杨基因库的保存提供重要技术支撑。     

利用横向薄层培养技术建立番木瓜植株再生体系

建立一个高效稳定的植株再生系统是番木瓜生物技术育种和品种改良的关键。本研究通过横向薄层培养技术,以‘一尺瓜’番木瓜品种为材料,通过对田间成年结果树截干后萌生的侧芽进行消毒处理,经过初代培养和增殖培养后获得大量丛生分化芽。以健壮分化芽为材料横向切取1~2.5 mm厚度的薄层6~10片,经不定芽诱导和增殖培养后进行生根培养,成功获得植株再生。研究结果表明,采用300 mg/L利福平溶液浸泡并在摇床上140 r/min振荡处理1 h、75%酒精处理30 s、0.1%的氯化汞溶液(W/V)处理7~8 min的组合递进式消毒处理方法,可使侧芽接种培养成功率达到85%以上。分化芽薄层在MS培养基+30 mg/L蔗糖+0.1 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA+0.3 mg/L KT+0.1 mg/L IBA的条件下诱导培养20 d,单个分化芽切取的薄层平均可获得7.04个不定芽,其中第3号薄片出芽能力最强,平均出芽数可达到3.4个,最高5.0个。采用将叶尖代替分化芽茎基部插入培养基的茎段悬空植叶促根方法进行分化芽的促根培养,生根培养基组成为1/2MS培养基+3%蔗糖(W/V)+2 mg/L IBA,20~25 d后平均出根率可达到87.5%,根系无结构疏松和愈伤化现象,假植成活率可高达95%以上,有效改善了常规生根技术存在的根系质量差和假植成活率低的问题。本研究结果可提高番木瓜组培快繁效率,并为番木瓜诱变育种和分子育种提供技术支撑。     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

不同植物生长调节剂处理对陆地棉子叶节再生的影响

为了建立高效的棉花子叶节再生体系用于遗传转化,以3个陆地棉品种的子叶节为材料,对棉花子叶节再生体系进行了优化,特别对子叶节诱导生根进行了探讨。结果表明：在子叶节丛生芽诱导中,不同材料的最佳诱导培养基存在差异,‘百棉1号’适宜的培养基为MSB+1.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L IBA;‘百棉2号’适宜的培养基为MSB +2.5 mg/L 6-BA +2.5 mg/L KT;‘珂字312’适宜的培养基为MSB +2.0 mg/L 6-BA,每个外植体可以得到3~4个芽,且大部分芽都可以伸长。生根培养基为MSB+0.5 mg/L NAA。