苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ　Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ　Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明，ＲＡＰＤ反应体系中，ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０ Ｕ、０．２ｕｍｏｌ·Ｌ－１和３．０ｕｍｏｌ·Ｌ－１。采用该优化体系，以 ＯＰＪ０３为引物，构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个品种的ＲＡＰＤ指纹图谱，分析了其遗传多样性，区分了供试的２８个苹果品种中的１５个，区分率达５３．６％。讨论了ＲＡＰＤ鉴定苹果品种的应用及其主要影响因素。     

RAPD技术在金针菇杂交育种中的应用

本文以金针菇不同亲本菌株及其杂交种为材料，用２０个随机引物进行了ＲＡＰＤ分析，结果表明，两个随机引和的扩增出特异的ＤＮＡ片段，经三次重复，均获得相同结果，且能明显地区别鉴定出真正的杂交种，因此，在杂交育种中，ＲＡＰＤ分析是一种简便、快速、有效地从杂交后代中区别鉴定出真正杂交种的方法。     

苹果RAPD分析体系的建立

对富士苹果（Ｍａｌｕｓ Ｐｕｍｉｌａ Ｍｉｌｌ．ｃｖ．Ｆｕｊｉ）ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ）分析体系的优化研究表明，ＲＡＰＤ反应体系中，ＤＮＡ、Ｔａｑ酶、引物和Ｍｇ＾２＋４种主要成分的最适用量分别为：２０ｎｇ、１．０Ｕ、０．２μｍｏｌ．Ｌ＾－１和３．０μｍｏｌ．Ｌ＾－１。采用该优化体系，以ＯＰＪ０３为引物，构建了我国及世界范围内苹果生产中重要的２８个     

分子生物学技术在菇类研究中的应用

本文报道了应用ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术分析香菇类缘关系，鉴别品系及分析木耳杂交后人攻原体质体融合子的结果，发现供试的３２个香菇菌株的总ＤＮＡ限制性内切酶片段长度存在多态性；木耳杂交后代、融合子及其亲株间ＤＮＡ ＰＣＲ扩增产物谱带型出现差别，这充分说明ＲＦＬＰｓ和ＲＡＰＤ技术在分析遗传变异、鉴别品系、鉴定杂种和融合子研究中的重要作用。     

中国枣种质资源的RAPD分析

利用ＲＡＰＤ技术对枣６４个品种及类型的遗传变异进行了研究。从１２０个１０ｂｐ随机引物中筛选出４０个多态性引物用于正式扩增，共扩增出４９２条ＤＮＡ带，其中多态性ＤＮＡ带２９３条，占５９．５５％，平均每个引物扩增的ＤＮＡ带的数目为１２．３１条。有１３个品种及类型扩增出了１个以上的特有ＲＡＰＤ标记，据此可以进行品种鉴定或早期性状预选。利用ＤＮＡ扩增结果进行聚类分析，把供试的６４个品种及类型分为８类，并对     

厚皮甜瓜亲缘关系及纯度的RAPD标记

利用２０个随机引物对厚皮甜瓜８个亲本与４个杂交种进行ＲＡＰＤ分析。１０个引物的扩增ＤＮＡ谱带具有多态性，亲本具有各自的特异谱带，绝大部分Ｆ１的扩增带型是双亲的互补带。各试材的相似系数范围为６３．６％－９６．５％。遗传距离聚类分析图表明，Ｆ１易与双亲或其一聚在一起。上述结果说明，可以利用ＲＡＰＤ标记在ＤＮＡ水平上进行厚皮甜瓜的亲缘关系及纯度的鉴定。     

厚皮甜瓜亲缘关系及纯度的RAPD标记

利用２０个随机引物对厚皮甜瓜８个亲本与４个杂交种进行ＲＡＰＤ分析。１０个引物的扩增ＤＮＡ谱带具有多态性，亲本具有各自的特异谱带，绝大部分Ｆ１的扩增带型是双亲的互补带。各试材的相似系数范围为６３．６％－９６．５％。遗传距离聚类分析图表明，Ｆ１易与双亲或其一聚在一起。上述结果说明，可以利用ＲＡＰＤ标记在ＤＮＡ水平上进行厚皮甜瓜的亲缘关系及纯度的鉴定。     

番茄种子宇宙飞行后的过氧化物同工酶及RAPD分析

番茄种子经搭载返地卫星宇宙飞行３５５ｈ，回收后地面种植，选择３个同工酶有差异的宇宙飞行处理群体植株进行ＲＡＰＤ检测。结果表明：在５０个供试引物中，有１８个扩增出了ＤＮＡ带，共有１６６条，其大小在２００～２０００ｂｐ之间。与地面对照相比，宇宙飞行处理植株的ＤＮＡ在５个引物出现差异，其突变的程度分别为４．５％、１．３％和３．２％。     

黑籽南瓜DNA导入西瓜后子代RAPD标记的变化

应用花粉管通道导入技术将黑籽南瓜ＤＮＡ导入受体早花西瓜，经两次传代后，得到有变异性状的子代Ｄ２－１、Ｄ２－２、Ｄ２－３，对三个子代及原始亲本黑籽南瓜和早花西瓜进行了ＲＡＰＤ分析。     

PEG渗调引发处理对菜薹老化种子DNA损伤的修复作用

利用ＲＡＰＤ技术对菜薹人工老化种子ＤＮＡ的损伤及ＰＥＧ渗调引发处理的修复作用进行了研究。在６１种引物中，有６种在菜薹人工老化的种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为２．１６，多态性ＤＮＡ带数为１．１７，有１１种引物在ＰＥＧ渗调引发的菜薹老化种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为３．９１，多态性ＤＮＡ带数也是３．９１。人工老化对菜薹种子基因组Ｄ     

利用RAPD技术快速鉴定番茄杂种纯度

从两个番茄杂种Ｌ４０２、Ｌ４０４及它们的亲本共６份材料的叶片中提取ＤＮＡ,使用国产ＰＣＲ仪,建立了适合番茄ＲＡＰＤ分析的ＰＣＲ条件,进一步在１００个随机引物中找到了５个可用于鉴定这两个杂种纯度的引物,其中ＯＰＫ１４引物可同时用来鉴定两个杂种。利用该法鉴定杂种纯度不仅简单、迅速、可靠,而且因ＤＮＡ的用量少,不影响被检植株的后期生长。     

应用RAPD技术对香菇融合菌株进行遗传鉴定

本文应用RAPD技术与聚类分析方法,对香菇细胞融合菌株F1及亲本S1、465进行遗传分析.根据DNA扩增的指纹图谱,估算融合子与亲本的DNA相似系数并构建遗传相关性聚类图.结果表明,RAPD技术与聚类分析方法可应用于香菇细胞融合菌株的遗传鉴定.     

A PCR-based assessment of genetic diversity,and parentage analysis among commercial mango cultivars and hybrids

Summary

Three different PCR methods [Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), Inter-Simple Sequence Repeats (ISSR), and Directed Amplification of Minisatellite DNA (DAMD)] were used to analyse genetic diversity and parentage among 20 mango cultivars, including 18 landraces and two hybrids (‘Amrapali’ and ‘Mallika’). These hybrids together with a third hybrid (‘Ratna’), and an out-group species (Mangifera sylvatica) were also analysed for parentage. Fifteen, seven and four primers were used to amplify a total of 158, 69 and 59 distinct DNA fragments by RAPD, ISSR and DAMD, respectively. Of these, approx. 85%, 64% and 90% were polymorphic, respectively. Genetic distances between pairs of mango cultivars were measured separately by each method and depicted graphically as a Neighbor Joining (NJ) tree. The three methods revealed different groupings of cultivars and hybrids. A NJ tree based on the cumulative data from all methods correlated well with the parentage of the mango hybrids, and the grouping of cultivars on a regional basis. Genetic markers likely to be associated with important agronomic traits were identified by further analysing the hybrids, with their respective parents, using all three methods. On the basis of the highest number of polymorphic bands observed (90%), DAMD was judged to be the best method with which to analyse mango germplasm.     

利用RAPD技术快速鉴定辣椒杂交种纯度的研究

以新椒系列辣椒杂交种父母本和一代杂种为材料,采用液氮-SDS法提取辣椒基因组DNA,研究PCR反应的主要影响因子,建立适合辣椒杂交种纯度RAPD分析的PCR反应体系,从120个随机引物中筛选出1个能鉴定新椒10号杂种纯度的引物S1220,从7个随机引物中筛选出1个能鉴定新椒3号杂种纯度的引物S1213。     

Segregation patterns of several morphological characters and RAPD markers in interspecific hybrids between Dianthus giganteus and D. carthusianorum

The segregation ratio of morphological characters (15 quantitative and 4 qualitative) and random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers in 55 interspecific hybrids between Dianthus giganteus and D. carthusianorum and their parents were studied. Interspecific hybrids exhibited either intermediate characteristics between parents shorter, fewer characteristics than parents except for stem length and height of corolla where heterosis was found. Segregation of four qualitative characters such as profile of the lower part of the corolla, stigma color, the main secondary color of petal blade, and arrangement of individual flowers, were exhibited as either characteristics of female parent or male parent.Two hundred and sixteen polymorphic RAPD bands detected in 55 interspecific hybrids were divided into four types: AB type (both-parental type) which was presented in both female parent and male parent, Ab type (female parental type) which was presented in only female parent, aB type (male parental type) which was presented in only male parent, and ab type (non-parental type) which was presented in only hybrids except their parents. The number of AB, Ab, aB, and ab type bands were 33 (15.3%), 56 (26.0%), 50 (23.1%), and 77 (35.6%), respectively. The proportion of parental type bands to non-parental type bands was two to one and only 54.6% of four type bands coincided with expected ratio.     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

荧光标记紫孢侧耳和糙皮侧耳原生质体融合研究

异硫氰酸荧光素(FITC)标记的紫孢侧耳单核原生质体与未标记的糙皮侧耳单核原生质体经PEG融合后,在倒置显微镜下,用显微操纵仪直接吸取一方带有荧光另一方不带荧光的原生质体对,经培养后,根据“锁状联合”这一形态特征挑选出融合子,融合率为5.2×10~(-3).进一步鉴定结果表明,融合菌株的酯酶同工酶谱发生了明显的变化,其生物量和生长速度有不同程度的提高,子实体形态也与双亲有所不同.     

西瓜杂种及其亲本同工酶分析

以西瓜的10个杂种及其16个亲本为试材分析了干种子、发芽期、子叶期的根及子叶的过氧化物酶(POD)同工酶和酯酶(EST)同工酶。结果表明西瓜POD同工酶和EST同工酶酶谱在不同时期,不同部位不尽相同。发芽期及子叶期POD同工酶和子叶期EST同工酶存在着杂种与亲本差异,杂种酶谱表现为父本相同、母本相同、双亲相同、出现“杂种酶”带及缺少双亲某些酶带五种类型。其中POD同工酶与其父本相同和EST同工酶与其母本或父本相同的杂种多表现较强的杂种优势。