苹果轮纹病菌DNA提取方法研究

由贝氏葡萄座腔菌梨专化型引起的苹果枝干轮纹病是苹果生产上发生最严重的病害之一,致病菌基因组DNA提取是其分子生物学研究的基础。针对其菌丝富含多糖、纤维素及其他次生代谢物质而且菌丝培养缓慢的特点,用采自辽宁兴城的6个苹果轮纹病菌菌株为试材,进行菌丝的液体和PDA平板培养,然后采用改良的CTAB法从菌丝中提取DNA。通过752型紫外光栅分光光度计检测,所提取的DNA的0D260nm／OD280nm比值介于1．80—2．07之间,最后将所提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳得到了较清晰的图谱。证明这两种菌丝培养方法都可用于苹果轮纹病菌DNA提取,但是PDA平板培养是一种更快捷地获得病原菌菌丝的方法;本试验采用的改良CTAB法是提取苹果轮纹病菌DNA的一种有效方法。     

5种金边瑞香基因组DNA提取方法比较研究

[目的]研究不同提取方法对金边瑞香基因组DNA提取质量的影响,筛选最佳提取方法。[方法]以金边瑞香叶片为试材,以SDS法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐低pH法和尿素法5种方法提取基因组DNA,并从DNA纯度、浓度、酶切电泳结果和ISSR-PCR扩增产物电泳等方面进行比较分析。[结果]高盐低pH法和尿素法提取的金边瑞香基因组DNA富含蛋白质和多糖等杂质,DNA纯度低;SDS法提取的基因组DNA含有一些酚类物质和盐等杂质,DNA纯度较低;改良CTAB法提取的基因组DNA纯度较高,但浓度和产率低。SDS-CTAB法提取的基因组DNA纯度、浓度和产率最高,酶切和ISSR-PCR产物电泳检测效果最好。[结论]SDS-CTAB法提取的金边瑞香基因组DNA质量与产量最佳,可以满足后续分子生物学研究的需求。     

油菜茎基溃疡病菌基因组DNA提取方法的比较

比较了油菜茎基溃疡病菌基因组DNA的尿素提取法、SDS-CTAB提取法、CTAB提取法和试剂盒提取法的提取过程、DNA纯度和对PCR扩增的影响,旨在筛选能替代昂贵试剂盒法的方法.结果表明,尿素提取法可以满足DNA的PCR扩增要求,并取得与试剂盒提取法相似的效果.尿素提取法还具有操作简便、成本低廉等优点,在植物检验检疫中...     

苦瓜DNA提取方法的比较

采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法、试剂盒法4种方法提取苦瓜(Momordica charantiaL.)叶片基因组DNA,并使用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测提取所得DNA的纯度和浓度.结果表明,SDS-CTAB法和试剂盒法提取的基因组DNA纯度高于CTAB法和SDS法,其中SDS-CTAB法提取的DNA浓度和产率高于其他方法.     

一种快速微量提取橡胶树胚基因组DNA的方法

为了建立一套快速检测橡胶树早期胚基因组变异情况的微量检测体系,需先建立一种快速微量提取橡胶树胚中基因组DNA的方法.运用CTAB改良法、尿素改良法、SDS法分别对1mm3橡胶树早期胚进行基因组DNA提取,并对其DNA进行质量检测和PCR验证.结果表明,尿素改良法的DNA提取率高于SDS法和CTAB改良法;样品的DNA适合PCR检测需要.因此尿素改良法是适宜于微量橡胶树胚基因组DNA提取的理想方法.     

用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较

为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。     

4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究

[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。     

天麻基因组DNA不同提取方法比较

以天麻块茎为供试材料,采用琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度含量测定技术,比较改良CTAB法和SDS-CTAB法提取天麻块茎基因组DNA的效果。结果表明,改良CTAB法提取天麻块茎基因组DNA的产量高于SDS-CTAB法,纯度略次于SDS-CTAB法,二者提取的基因组DNA,DNA结构完整、大片段的DNA分子含量高。该研究为天麻基因组DNA提取方法的选择提供了参考依据,为天麻种质资源的分子遗传研究奠定了一定的科学与技术基础。     

油棕基因组DNA 3种提取方法的比较研究

采用CTAB小样提取法、PVP法和SDS-CTAB改良法,分别从油棕嫩叶和老叶中提取基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳和PCR反应进行检测。研究结果表明:用CTAB小样提取法提取的油棕嫩叶总DNA的质量最好,纯度最高;用其他2种方法提取的DNA的质量均较差。     

橡胶白粉菌(Oidium heveae Steinmann)基因组DNA的提取方法

比较了2种菌源、3种方法提取橡胶树白粉病病原真菌橡胶白粉菌(Oidium heveae BA.Steinmann)基因组DNA的效果。结果表明:无论采用单斑分离法收集还是直接收集橡胶白粉菌菌体,无论采用石英砂振荡破壁法、氯化苄法还是尿素法提取,均能获得满足常规分子生物学操作要求的基因组DNA;在基因组DNA的提取产率、完整性方面,各种方式之间略有差异,但无显著差别;2种来源菌体的基因组DNA的ITS序列分析结果一致,说明在无法进行单斑分离的情况下,可以利用直接收集的菌体提取基因组DNA。     

山东省苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性测定

2007年8～10月从山东主要苹果产区轮纹病果上分离获得54个苹果轮纹病菌菌株,采用菌丝生长速率法分别测定了各菌株对代森锰锌的敏感性。结果表明:代森锰锌对54个菌株的EC50值呈单峰频次分布,分布在1.9287～20.8004μg/mL之间,均值为(9.4383±0.5561)μg/mL;在54个菌株中选择对代森锰锌最敏感的泰山海棠菌系进行重复测定,将其EC50平均值3.0963μg/mL确定为苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感基线;Duncan新复极差法和系统聚类的分析结果表明,不同地理来源的苹果轮纹病菌对代森锰锌的敏感性都处在较高水平,总体上不存在明显差异,没有出现敏感性下降的抗药性亚群体。     

直接、快速地从罹病小麦叶片中提取条锈菌基因组DNA的方法

 小麦条锈菌（Puccinia striiformis f. sp. tritici）是专性程度很高的活体寄生菌,通过分子技术对其进行群体遗传结构研究的过程中,基因组DNA提取是基础之一。本研究利用Chelex 100法和CTAB法直接提取罹条锈病的小麦病叶片上的小麦条锈病菌的基因组DNA,使用PCR对所得到的DNA进行真菌核糖体rDNA ITS和小麦条锈病菌特异性引物CYR33进行检测,对2种基因组DNA的提取方法进行比较分析,结果表明Chelex 100法和CTAB法都能够适合于从罹病组织中直接提取小麦条锈病菌的基因组DNA,但是Chelex 100法较CTAB法所需的样品量少,操作步骤少,操作简单,并且整个过程无需使用有机溶剂进行抽提,对人体比较安全。通过PCR检测DNA提取情况,发现Chelex 100法提取的DNA的PCR结果优于CTAB法,且能够满足基于PCR的群体遗传结构的分析等研究。     

红酵母RT-1核酸提取方法的比较及基因crtYB和crtE扩增

对蜗牛酶法、石英砂法、氯化苄法、SDS-CTAB法、反复冻融法、溶壁酶法等6种酵母DNA提取方法进行比较,确定了反复冻融法最适合红酵母RT-1的提取,所提取的DNA质量较高,以它为模板成功克隆到crtYB内部序列,证明其完全可用于酶切、测序等后续试验。同时,比较了热酸性酚法、酵母总RNA提取试剂盒RNAsimple Total RNA Kit、硅藻土-苯酚法等3种酵母RNA提取方法,比较结果表明:硅藻土-苯酚法所提RNA完整性高,用其进行RT-PCR克隆得到crtEcDNA内部序列,表明提取的RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

两种方法提取柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA的对比试验

为寻找一种合适的提取球虫基因组DNA的方法,试验采用氯化苄法(BC)和常规提取DNA的方法提取了鸡柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊基因组DNA。氯化苄的化学性质类似于苯酚,在65℃条件下与蛋白质和几丁质等发生反应,能够有效地破坏球虫卵囊壁,可用于大规模提取基因组DNA;常规方法提取DNA的程序是用蛋白酶K消化处理,用酚/氯仿抽提,再用氯仿抽提,部分步骤需要重复。2种方法对比试验结果表明,二者均可用于鸡球虫基因组DNA的提取,所获得的DNA数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。但BC法具有简便、快速、经济实用的特点,更适用于球虫卵囊大量样品的DNA快速提取。     

风信子DNA不同提取方法的效果比较

采用简易CTAB法、改良CTAB法、SDS-CTAB法、高盐法和CTAB-硅珠法等5种方法对风信子花蕾、叶片和鳞片基因组DNA进行提取.比较DNA纯度、电泳、得率等指标,结果表明:CTAB-硅珠法没有获得DNA,其他方法均可提出DNA;在纯度方面,简易CTAB法＞SDS-CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法;在得率方面,简易CTAB法＞改良CTAB法＞高盐法＞SDS-CTAB法.简易CTAB法提取的DNA纯度较高,OD260/OD280为2.01,OD260/OD230为2.33,浓度为406.8ng·μL-1,得率为175.95ng· μL-1.花蕾、叶片适合风信子基因组DNA的提取.     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

适用于rDNA ITS分析的兰属菌根真菌培养及DNA提取方法

为探讨兰属植物与其共生真菌之间专一性关系,采用覆盖纤维素滤膜于PDA培养基的方法培养兰属菌根真菌,提取其DNA后用于rDNA ITS分析。在培养过程中克服PDA液体培养及固体培养获得菌丝体少的缺点,操作方便,获得大量菌丝体;采用改进的提取植物基因组DNA的SDS方法提取真菌的DNA,通过提高缓冲液的pH值、增加EDTA的浓度以提高DNA的提取效果。结果表明,此培养方法及改进的DNA提取方法均简便易行,提取的DNA产量高、质量较好;可满足菌根真菌rDNA ITS分析的要求。     

番荔枝科植物鹰爪内生真菌rDNA ITS-PCR扩增条件的优化

探索一种简单、快速的获得番荔枝科植物鹰爪内生真菌rDNA ITS目的片断的方法。采用改良的Rodrigues组织培养表面消毒技术和CTAB法提取植物样品总DNA,利用真核生物通用引物LH2/Sm73扩增rDNA ITS目的片段,正交法优选ITS-PCR扩增条件。PCR反应可同时获得两条600 bp和700 bp产物,分别为植物和内生真菌的rDNA ITS目的片断。改良的组织表面消毒技术可排除外源DNA污染。正交法可快速获得植物内生真菌目的片断。该法简单、快速,为番荔枝科植物内生真菌生物多样性研究提供分子生物学基础。