孔雀石绿浸泡几种鱼类受精卵及苗种后的降解规律研究

为研究孔雀石绿在几种鱼类受精卵、苗种体内的降解规律,用孔雀石绿溶液对受精卵和苗种进行浸泡处理,然后检测显性孔雀石绿及其代谢物隐性孔雀石绿的残留量。试验结果:用10.0 mg.L-1的孔雀石绿浸泡异育银鲫、团头鲂的受精卵10 min,至仔鱼孵出后第31、45 d,在两者中均未检出显性孔雀石绿(检出限为O.5μg/kg);至第45 d,两者中均未检出隐性孔雀石绿。用10.0 mg/L的孔雀石绿分别浸泡异育银鲫的鱼苗、鱼种10、25 min,至浸泡后第10、11周,在两者中均未检出显性孔雀石绿;至第16、38周,两者中均未检出隐性孔雀石绿。用1.0 mg/L的孔雀石绿浸泡黄颡鱼鱼种30 min,至浸泡后第12周,未检出显性孔雀石绿;但至第52周,隐性孔雀石绿仍有5.34μg/kg的残留量。结果表明,在水产动物体内,隐性孔雀石绿的降解速度要明显慢于显性孔雀石绿。     

4种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律

实验通过连续7 d投喂各含有100 mg·kg~(-1)呋喃西林、呋喃唑酮、呋喃它酮和呋喃妥因的饲料,研究4种硝基呋喃药物在青石斑鱼(Epinephelus awoara)肌肉中的消除规律。采用超高效液相色谱串联质谱(UPLCMS/MS)检测青石斑鱼肌肉中的氨基脲(SEM)、3-氨基-2-恶唑基酮(AOZ)、5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(AMOZ)和1-氨基-2-内酰脲(AHD)的质量分数,并用内标法定量。结果表明,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在石斑鱼背肌的峰浓度最大值依次为1 104.10μg·kg~(-1)、781.09μg·kg~(-1)、679.75μg·kg~(-1)和437.18μg·kg~(-1)。4种硝基呋喃代谢物在石斑鱼肌肉组织中的消除规律大致相似。SEM、AHD、AOZ和AMOZ半衰期时间的长短顺序为23.90 d、23.10 d、22.35 d和21.00 d。SEM在肌肉中消除最慢。消除到第163天时,SEM、AOZ、AMOZ和AHD在肌肉中的质量分数仍然高于液质检出限(0.5μg·kg~(-1))。建议硝基呋喃药物应禁止用于石斑鱼疾病的预防或治疗中。     

虾苗使用呋喃西林和呋喃唑酮的残留评估

使用质量浓度为1mg·L^-1的呋喃西林和呋喃唑酮,以混饲的方式对凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）幼苗给药,研究呋喃西林和呋喃唑酮在凡纳滨对虾苗体内的代谢和消除规律,对药物的残留时间和残留量等进行风险评估。呋喃西林在凡纳滨对虾幼苗体内的消除速率常数（ke）为0．041h^-1,消除半衰期（t1/2ke）为17．091h,其代谢物氨基脲（SEM）在50d后未检出;呋喃唑酮的ke为0．045h^-1,t1／2ke为15．258h,其代谢物3-氨基-2-恶唑烷基酮（AOZ）在20d内已低于方法检测限。结果表明,在凡纳滨对虾培苗期,以此试验方式使用呋喃西林和呋喃唑酮不会导致其在成虾体内的残留。     

呋喃西林和呋喃唑酮在海参组织中的代谢消除规律

采用呋喃西林或呋喃唑酮单药给药及两种药物混合给药的方式,研究其代谢物氨基脲(Semicarbazide,SEM)和3-氨基-2-恶唑烷基酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)在海参组织中的代谢消除规律。结果表明,SEM和AOZ具有相似的代谢规律,初始阶段具有较高的消除速率,随后消除速率趋于平缓,并在较长时间内维持一定的浓度。在停药225 d后,海参组织中仍然能够检出SEM、AOZ,表明SEM和AOZ在海参组织中较难消除。总体上海参内脏中SEM及AOZ消除速率快于体壁,单独给药方式下的消除速率快于混合给药。单独给药方式下,体壁及内脏中SEM消除半衰期分别为34.8和38.3 d,AOZ消除半衰期分别为52.9和38.7 d;混合给药方式下,体壁及内脏中SEM消除半衰期分别为47.5和35.4 d,AOZ消除半衰期分别为59.2和54.6 d。根据上述结果,预测在海参上市前一年使用呋喃西林和呋喃唑酮,到市场环节仍然有很大可能检出SEM及AOZ。研究结果表明,加强海参苗种及养殖中期硝基呋喃类药物的监管有利于保障市售海参质量安全水平。     

药浴暴露下阿维菌素在异育银鲫体内蓄积和消除规律

采用UPLC-MS/MS法研究了2μg·L-1三次连续水体药浴和6μg·L-1一次性水体药浴条件下阿维菌素在水体中消除、在异育银鲫(Carassius auratus gibelio)体内蓄积和消除变化规律。结果显示,两种药浴暴露方式下阿维菌素在水体中消除呈一级指数衰退消除,消除半衰期(t1/2)均为63 h,240 h时浓度下降到0.5μg·L-1以下。阿维菌素在异育银鲫血浆和肌肉中的含量均呈先升高后下降的趋势,血浆中药物浓度远高于肌肉中的含量。2μg·L-1连续三次药浴组和6μg·L-1一次药浴组血药峰浓度(Cmax)分别为34.97、66.62μg·L-1,其曲线下面积(AUC0-t)分别为9 871.2μg·L-1·h和18 119.6μg·L-1·h;两组药浴肌肉中达峰浓度分别4.42μg·kg-1和15.80μg·kg-1,其AUC0-t分别为641.9μg·kg-1·h和4 271.0μg·kg-1·h。与2μg·L-1连续三次药浴组相比,6μg·L-1一次药浴组阿维菌素在血浆和肌肉中的蓄积作用更加显著。以10μg·kg-1作为阿维菌素在异育银鲫肌肉中最大残留限量,选择95%的置信区间计算异育银鲫肌肉组织中休药期,本研究中2μg·L-1连续三次药浴组肌肉的休药期为295.4 h,6μg·L-1一次药浴组肌肉的休药期为454.5 h。     

海参呋喃唑酮代谢物胶体金免疫层析检测中的基质效应及消除方法

呋喃唑酮等硝基呋喃类药物残留是海参重要的安全危害之一,研究其胶体金免疫层析快速筛选检测技术具有重要的现实意义,但是关于海参基质对检测的干扰及消除方法目前尚未见报道。本研究发现海参基质中蛋白、多糖等组分的存在,会使呋喃唑酮代谢物(AOZ)在胶体金免疫层析过程中C线和T线的显色程度、均匀性和稳定性均明显降低,甚至出现色带断裂的情况,导致检测结果无法准确判断。针对这一问题具体研究了不同的样本前处理方法,发现将海参样本在衍生化前经80℃加热5 min,并结合0.10~0.15 mol/L盐酸处理后,可将样本中的蛋白质浓度降低到0.06 mg/m L以下,海参岩藻糖几乎消除,检测卡的主要性能基本恢复正常,对阴性海参添加0.5、1μg/kg的AOZ标准液的样本能够实现有效检测;同时省略了有机溶剂萃取、氮吹、净化等步骤,前处理操作步骤较目前AOZ检测的同类技术更为简便、快速。本研究可以为下一步研究建立海参中硝基呋喃等药残的胶体金免疫层析现场快速检测技术提供基础和依据。     

亚甲基蓝及其代谢物在异育银鲫体内分布及消除规律的研究

以15 mg·L~(-1)的亚甲基蓝浸泡异育银鲫(Carassius auratus gibelio)成鱼0.5 h后将其饲养于实验室水族箱中,研究了常规用药条件下亚甲基蓝及其代谢物在异育银鲫各组织中的分布及消除规律。采用高效液相色谱法检测亚甲基蓝及其代谢物在异育银鲫组织中的浓度,用DAS 3.0.5药物与统计软件对数据进行分析。结果表明:血液中亚甲基蓝、天青B、天青A达峰时间Tmax分别为第0.083、第0.5和第8小时,峰浓度值Cmax分别为143.436μg·L~(-1)、110.770μg·L~(-1)和8.444μg·L~(-1)。亚甲基蓝、天青B、天青A在异育银鲫4种组织中的浓度由高到低的顺序均为肝胰脏肾脏肌肉皮肤,其中异育银鲫肌肉和皮肤组织易蓄积亚甲基蓝及代谢物,至第64天仍可以检测到,组织中未检测到天青C。     

酶联免疫法测定水产品中呋喃唑酮代谢物残留量

为测定水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)的残留量,采用2-硝基苯甲醛进行衍生,乙酸乙酯提取AOZ。通过样品中残留的AOZ和酶标板上预包被的抗原竞争抗体,加入酶标二抗后与底物显色,测得样品中AOZ的残留量。测定了四组水产品中AOZ的残留量,测定浓度均小于1μg/kg,结果为阴性。向空白样品中分别添加0.5μg/kg、1.5μg/kg和2μg/kg的AOZ标准品,回收率为90%、109%和101%。因此得出结论:采用酶联免疫法测定水产品中AOZ残留量操作简单,检测时间短,结果准确,是一种适合大批量水产样品筛选的检测方法。     

孔雀石绿在凡纳滨对虾体内的残留与消除规律

研究了不同养殖环境下孔雀石绿在凡纳滨对虾（Litopenaeu svannamei）体内的残留和消除规律。试验对虾刚0．20mg·L^-1。的孔雀石绿溶液药浴2h后转移至室内或室外水泥池中用盐度为28的海水养殖,采用高效液相色谱一串联质谱法（LC／MS／MS）测定对虾头部和肌肉中的有色孔雀石绿（MG）及其代谢产物无色孔雀石绿（LMG）的残留量。结果表明,药浴2h时对虾体内孔雀石绿的残留量达到峰值,转入清水养殖168h,2种环境养殖对虾体内的孔雀石绿残留量均降低至检测限以下,孔雀石绿在对虾体内的消除速率是室外环境养殖的快于室内环境养殖,对虾头部快于肌肉组织,且MG的消除快于LMG。     

淡水养殖用水中硝基呋喃代谢物残留量的UPLC/MS/MS检测方法

研究了淡水养殖用水中4种硝基呋喃代谢物:呋喃唑酮代谢物(AOZ)、呋喃它酮代谢物(AMOZ)、呋喃妥因代谢物(AHD)、呋喃西林代谢物(SEM)的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC/MS/MS)分析方法。以邻硝基苯甲醛作为衍生化试剂,D4-AOZ、D5-AMOZ、13C15N-SEM、13C-AHD作内标,用水解衍生的方法对样品进行处理。以乙腈和0.1%甲酸(含有0.5 mmol/mL乙酸铵)水溶液为流动相,采用梯度洗脱,4.5 min可将4种代谢物完全分离,进行定性和定量分析。加标回收率为75.1%～102%;本方法的检出限(LOD)为0.50μg/L。     

团头鲂AGRP和NPY基因cDNA克隆及其在饥饿与再摄食状态下的表达分析

为研究刺鼠相关蛋白（AGRP）和神经肽Y（NPY）基因在团头鲂幼鱼应答饥饿与再摄食过程中所起的调控作用,本研究采用RACE PCR技术首次克隆了团头鲂AGRP和NPY基因全长cDNA序列,通过设置正常对照组（control,体质量3%持续投喂4周）、饥饿再投喂组（F/refeeding,饥饿2周+3%再投喂2周）、饥饿过量投喂组（F/excessive refeeding,饥饿2周+8%再投喂2周）和饥饿组（fasted,持续饥饿4周）4个处理组,采用qRT-PCR技术分析团头鲂在脑和肠道组织中这两种基因在饥饿再投喂过程中的表达变化特征。结果显示,（1）组织学分析表明,持续饥饿组肠道黏膜下层出现明显的白细胞浸润现象。（2）团头鲂AGRP和NPY基因cDNA序列全长分别为770 和557 bp,其中有5’非编码区77和101 bp以及3’非编码区315和120 bp,开放阅读框为378和336 bp,共编码了125个氨基酸和111个氨基酸。系统进化树分析表明,团头鲂的AGRP和NPY基因分别与其他鲤科鱼类聚类一支,具有最近的亲缘关系。（3）qRT-PCR分析显示,AGRP和NPY基因在所有检测组织中均有表达,二者均在脑组织中表达量最高,其次是肝脏和肠道。（4）饥饿再投喂处理对团头鲂脑和肠道中AGRP和NPY基因表达影响显著,饥饿组团头鲂脑和肠道组织AGRP基因表达量均呈先升后降趋势,第28天,饥饿再投喂组能够显著上调团头鲂AGRP基因在脑组织中的表达,但饥饿过量投喂组能够显著上调AGRP基因在肠道中表达量。持续饥饿组团头鲂脑和肠道组织NPY基因表达呈先上升后下降趋势,且饥饿组脑和肠道组织中NPY表达量在28 d均显著高于其余3组。上述结果表明,AGRP和NPY基因在团头鲂摄食调控中发挥重要作用,且在脑和肠道组织具有不同表达模式。     

盐酸氯苯胍药饵给药条件下在异育银鲫体内药动学和组织分布与消除规律

研究了水温(25±1)℃条件下,盐酸氯苯胍(robenidine hydrochloride,ROBH)以20 mg·kg~(-1)单剂量拌饲药饵给药后在异育银鲫(Carassius auratus gibelio)体内药动学及在肝胰脏、肌肉、喉、肾脏、肠、鳃、脑和胆汁中的分布和消除规律。结果显示,药饵给药后异育银鲫血浆中盐酸氯苯胍的药时数据符合一级吸收二室模型,血药达峰时间T_(max)为4 h,血药浓度峰值C_(max)为1.117 mg·L~(-1),药时曲线下面积(AUC_(0-∞))为68.39 mg·L~(-1)·h,消除半衰期(t_(1/2β))为56.86 h。盐酸氯苯胍在异育银鲫组织中分布较广,C_(max)大小依次为:肠、肾脏、肝胰脏、胆汁、鳃、喉、脑和肌肉;AUC_(0-∞)大小依次:肠、肾脏、胆汁、肝胰脏、喉、鳃、脑和肌肉。异育银鲫摄食药饵后,盐酸氯苯胍通过肠道吸收进入肝胰脏,经血液循环广泛分布于各组织器官中,最后主要从肾脏排出,这也与其较大的V_d值相印证。研究还发现,粘孢子虫感染异育银鲫的喉、鳃和脑等组织均有盐酸氯苯胍分布,为该病的治疗提供了理论依据。若以10μg·kg~(-1)为肌肉中最高残留限量,在本实验条件下,建议休药期不少于15 d。     

饥饿和恢复投喂对异育银鲫生长和卵巢发育相关指标的影响

对异育银鲫进行饥饿2周后恢复投喂处理,分析体质量(107.2±7.0)g的异育银鲫的生长率及卵巢发育相关指标的变化.结果表明,饥饿处理2周后,异育银鲫恢复投喂2周,特定生长率显著高于投喂组,体质量增长接近正常投喂组,出现完全补偿生长.在饥饿过程中,卵巢发育相关指标性腺成熟系数、肝体指数、血清磷含量、血清钙含量均呈下降趋势.饥饿1周,性腺成熟系数显著低于投喂组水平;饥饿2周,肝体指数血清磷、血清钙含量和血清钙含量均极显著低于投喂组水平.恢复投喂后,4项指标均有一定程度的恢复,仍显著低于投喂组水平.说明异育银鲫饥饿2周后恢复投喂2周,其卵巢发育的恢复滞后于身体的生长.     

模拟养殖系统药饵给药后恩诺沙星在异育银鲫体内、水体和底泥中代谢与分布

为探究水产养殖中恩诺沙星用药后在水环境中的归趋，本实验在模拟池塘水产养殖系统中，恩诺沙星以18 mg/kg剂量药饵投喂异育银鲫，每天2次、给药周期6 d，研究恩诺沙星在异育银鲫体内吸收、分布、代谢和消除规律，以及在水体和底泥中的分布规律。结果显示，异育银鲫组织中恩诺沙星峰浓度(C_max)依次为肠道>肾脏>肌肉>鳃>肝脏>血浆，分别为14.15、13.31、14.15、7.48、7.94 mg/kg和2.94 mg/L；各组织中均可检测到代谢产物环丙沙星，其峰浓度与恩诺沙星峰浓度的百分比分别为5.10%、1.70%、6.28%、2.97%、2.90%和6.53%；组织中恩诺沙星清除率(CL_z)顺序为血浆>肝脏>肠道>鳃>肌肉>肾脏。随着给药次数增多，水体中恩诺沙星残留浓度快速升高，在最后一次给药后6 h时达到峰值(5.23μg/L)，随后开始下降，但水体中一直未检测到代谢产物环丙沙星；底泥中恩诺沙星首先呈现上升趋势，在240 h达到峰值(796μg/kg)，之后略有下降，480 h时降...     

硫酸新霉素在吉富罗非鱼体内的药代动力学及休药期

在实验水温(28±2)℃条件下,按25 mg·kg-1 的剂量对吉富罗非鱼(Genetically improved farmed tilapia,GIFT)单次口灌给药后,采用UPLC-MS/MS法测定吉富罗非鱼组织中的药物水平,研究硫酸新霉素在吉富罗非鱼体内的药代动力学及消除规律.结果表明,血药浓度时间数据符合一级吸收二室开放模型,药物在血浆中达峰时间Tmax、血药浓度高峰Cmax和消除半衰期T1/2β分别为1.299 h、16.138 μg·mL-1 和25.776 4 h.药物消除速度由快到慢依次为:肌肉、肝脏、肾脏,消除半衰期T1/2β分别为31.802 h、34.917 h、45.175 h.选取吉富罗非鱼可食性肌肉组织作为残留检测靶组织,参考中华人民共和国第235号公告中对禽肌肉MRL规定,以0.5 mg·kg-1为残留限量,建议休药期不低于6 d.     

液相色谱 — 串联质谱法测定海参中的甲氰菊酯和扑草净含量

建立了液相色谱-串联三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)同步检测海参中的甲氰菊酯和扑草净。样品用乙腈提取,中性氧化铝柱净化,LC-MS/MS分析,基质标准曲线定量。结果表明,甲氰菊酯和扑草净在0～50 ng/mL范围内呈良好线性,相关系数均在0.999以上,方法检出限为1.0μg/kg,定量限为5.0μg/kg。在5.0μg·kg~(-1)、10μg·kg~(-1)、50μg·kg~(-1)添加水平下,甲氰菊酯平均回收率在71%～88%之间,扑草净平均回收率在86%～92%之间,RSD均小于10%。该方法操作简单,分析速度快,可适用于海参中的甲氰菊酯和扑草净同时测定。     

呋喃唑酮代谢物AOZ在斑点叉尾(鲴)体内组织分布与消除规律研究

研究了在池塘网箱养殖模式下,平均水温为30.6℃,以100 mg/kg鱼体重的剂量投饲斑点叉尾鲴(Ietalurus punetaus)苗种(95±20.9)g含呋喃唑酮的药饵,连续5d,每天2次.采用高效液相色谱串联质谱(HPLC-ESI/MS/MS)法分析了呋喃唑酮主要代谢产物3-氨基-2-噁唑烷酮(3-amina...     

高效液相色谱法测定水产养殖底泥中呋喃唑酮残留量的研究

运用高效液相色谱建立了一种测定水产养殖底泥中呋喃唑酮残留量的方法。通过比较不同提取方法获得最佳的提取条件。结果表明,底泥样品用乙酸乙酯超声波法提取,无水硫酸钠去除水分,浓缩并用流动相溶解后上机检测,方法线性范围在0．01～1．00μg·mL^-1之间,相关系数为0．999,回收率为88．2％-92．6％,精密度（RSD）为0．88％～2．67％,检出限为1．0μg·kg^-1。该方法操作简便、提取快捷、准确性高、重复性强,可检测出泥样中痕量的呋喃唑酮,适用于水产养殖环境底泥中呋喃唑酮残留量的测定。     

中药诃子的主要成分没食子酸在异育银鲫体内药物代谢动力学研究

在(20±1)℃的水温条件下,以77 mg/kg的单剂量,给异育银鲫(Carassius auratus gibelio)口灌诃子(Fructus chebulae)水剂,以诃子中的主要成分没食子酸为检测目标,用高效液相色谱法(HPLC)检测给药后各个时间点的血药浓度。结果显示:最低检测限为0.01μg/mL,线性范围为0.01～84.00μg/mL。诃子在异育银鲫体内的药动学过程符合一级吸收二室开放房室模型(1/C/C),其药物动力学方程为C=39.237e-0.320t+4.814e-0.006t,主要药动学参数为:吸收速率常数(Ka)为0.56 h-1,吸收半衰期(t1/2ka)为1.238 h,分布半衰期(t1/2α)为2.164 h,消除半衰期为(t1/2β)为119.369 h,达峰时间(Tmax)为4 h,最大血药浓度(Cmax)为11.024μg/mL,血药浓度-时间曲线下面积(AUC(0-∞))=674.89μg.h/mL,延滞时间(TL)为0.286 h,药物平均滞留时间(MRT(0-∞))=113.626 h,总体消除率(CLs)为0.112 L/(kg.h),表观分布容积(Vd)为13.713 L/kg。这些参数表明,异育银鲫口灌诃子后,能比较迅速被吸收,并且在血浆中维持较长的时间,具有较好的应用价值基础。     

应用Thermo LC—MS／MS检测水产苗种中的硝基呋嘀类代谢物

应用Thermo LC-MS／MS检测140个水产苗种中呋哺唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）和呋喃妥因（AHD）等硝基呋喃类代谢物。结果表明，方法的检出限为0．25μg／kg，工作曲线的线性范围为0．25～20．0μg／L。在添加浓度为0．25—10．0μg/kg的范围内，AMOZ、SEM、AHD和AOZ的回收率分别在90．5％-102％、95．3％-99．6％、92．6％-98．6％、82．0％-105．6％之间，相对标准偏差均小于10％。苗种样品检出率AOZ：15％，SEM：4％。AMOZ及AHD均未检出。在网箱养殖中的苗种检出比率要大于鱼池苗种检出比率。