运用致病毒素筛选抗烟草黑胫病细胞突变体Ⅱ 抗毒素愈伤组织的再生植株及其后代的抗病性鉴定

用黑胫病粗毒素作为选择压力, 结合辐射诱变技术, 从烟草花粉植株叶片的愈伤组织中筛选出抗毒素的愈伤组织, 并对其再生植株及其 Ｍ２ 代进行抗病性鉴定、选育． 目前已获得６ 个高抗黑胫病的细胞突变株系, 且抗病性状表现稳定, 并建立了一套烤烟抗黑胫病突变体的筛选和鉴定体系． 研究结果表明, 在细胞水平上筛选抗病突变体是开发新抗源的有效途径．     

运用致病毒素筛选抗烟草黑胫病细胞突变体Ⅰ抗毒素愈伤组织的有效筛选

 以⁶⁰Co-γ射线照射烟草优质感病品种的花药作为诱变手段,用烟草黑胫病疫霉菌粗毒素为筛选剂,对烟草花粉植株叶片的愈伤组织,进行抗病突变体细胞的筛选.试验表明:毒素对烟草愈伤组织的存活和增殖有明显的抑制作用,抑制程度随毒素浓度提高而加强,同一浓度对不同品种也存在着差异.综合毒素浓度对烟草愈伤组织抑制、增殖程度及筛选的有效性,初步认为:筛选红大和K326抗黑胫病突变体细胞的最适粗毒素浓度分别为30%和45%.所筛选出的抗病突变体细胞,其细胞水平的抗性与再生植株的抗病性鉴定相吻合.     

运用致病毒素筛选抗烟草黑胫病细胞突变体I抗毒素愈伤组织的有效筛选

以６０Ｃｏ－γ射线照射烟草优质感病品种的花药作为诱变手段,用烟草黑胫病疫霉菌粗毒素为筛选剂,对烟草花粉植株叶片的愈伤组织,进行抗病突变体细胞的筛选．试验表明：毒素对烟草愈伤组织的存活和增殖有明显的抑制作用,抑制程度随毒素浓度提高而加强,同一浓度对不同品种也存在着差异．综合毒素浓度对烟草愈伤组织抑制、增殖程度及筛选的有效性,初步认为：筛选红大和Ｋ３２６抗黑胫病突变体细胞的最适粗毒素浓度分别为３０％和４５％．所筛选出的抗病突变体细胞,其细胞水平的抗性与再生植株的抗病性鉴定相吻合．     

运用致病毒素筛选抗稻曲病突变体的研究

通过4个品种水稻愈伤组织的诱导、继代与分化,研究了稻曲病病原菌粗毒素为选择压力进行抗稻曲病突变体的筛选的可行性。结果表明,供试的水稻各品种在细胞水平的抗性与田间的抗性相一致,因而可以以制备的稻曲病菌粗毒素为选择压力进行抗病突变体的筛选。对得到的抗性愈伤组织的抗性稳定性进行了鉴定。结果表明,继代后愈伤组织的抗性仍得到了保持并得到了分化植株。这说明毒素筛选体系是目前最成熟的一种方法。     

生物工程应用于作物育种的试验研究 第5报 水稻抗稻瘟病细胞突变体的筛选

以稻瘟病病原菌毒素滤液为选择压力,在水稻种胚愈伤组织的诱导.继代和分化过程中,筛选出一批水稻抗病细胞突变体。稻瘟病病原菌毒素滤液可代替孢子悬液直接用于抗病细胞突变体筛选与鉴定。在愈伤组织诱导培养基中加入45％的毒素滤液,或在愈伤组织诱导培养基与分化培养基均加入30％或45％的毒素滤液,效果较好。经毒素处理筛选出的绿苗,其后代有一部分无性系的抗病性是稳定的,可供选择利用;过氧化物酶同工酶与植株和愈伤组织的抗病性有关,可作为选择抗病突变体的指标。本文还对完善这项试验及与水稻育种有关的问题,进行了初步讨论。     

烤烟黑胫病菌发酵液致病活性组分的分离及应用

【目的】以田间综合性状表现优良但抗病性差的HKDN-8烤烟高钾新品系为材料,用分离出的致病力较强的黑胫病菌发酵液致病活性组分为选择压并结合物理诱变,先筛选出抗黑胫病菌的花药,经组织培养对再生植株进行黑胫病菌抗性鉴定,以期为筛选抗病材料提供科学依据。【方法】在选择出最适宜生长培养基的基础上,分离出致病力较强的活性组分,最后以活性组分为选择压,对HKDN-8烤烟品系突变体花药进行抗黑胫病筛选。【结果】马铃薯培养基是诱导较强致病力黑胫病菌发酵液的最佳培养基;95%乙醇洗脱液是黑胫病菌发酵液中致病性最强的活性组分;烤烟花药突变体抗黑胫病的最适选择压为2%～3%时,其再生植株的抗性分别表现出了高抗和中抗。【结论】黑胫病菌发酵液致病活性组分(乙醇洗脱液)可以作为烤烟早期抗病鉴定的手段。     

水稻抗纹枯病突变体的离体筛选

以水稻成熟胚培养产生的愈伤组织和悬浮细胞为筛选材料,以广东省水稻纹枯病菌Rhizoctonia solaniKühn强致病力菌株GD-11和GD-118产生的粗毒素为选择压力,从水稻品种的选择、粗毒素致病力的鉴定、突变体的筛选方法、突变体的再生以及突变体再生植株对粗毒素的抗病性鉴定等方面展开研究,建立了水稻抗纹枯病突变体的筛选体系并获得了抗病突变体.筛选体系为:两步筛选法,即以粤香占的愈伤组织和悬浮细胞为筛选材料,以φ(粗毒素)为3.5%和4.0%分别作为第1、2步的处理浓度,每一步处理的时间为20 d;筛选出的突变体再生苗的病情指数为37.55,而原始型再生苗的病情指数为87.50,抗病效果达57.08%.     

稻瘟菌粗提物对水稻成熟胚愈伤组织培养的影响

以感病主栽品种C039、丽江新团黑谷为材料，观察稻瘟病病菌粗提物处理对水稻成熟胚愈伤组织培养的影响，以期筛选抗稻瘟病细胞突变体。试验结果表明：粗提物处理，对水稻成熟胚的愈伤组织诱导和分化都有一定的抑制作用，但愈伤组织再生植株的蛋白质含量显著提高。     

粳稻抗稻瘟病细胞突变体筛选技术体系的建立

选取较感病主栽品种“辽粳454”作为研究材料,以稻瘟病病菌粗毒素为选择压,进行抗稻瘟病细胞突变体筛选,以期获得优良粳稻品种的抗病系。试验结果表明:经粗毒素处理后,对粳稻种的胚根、胚芽、愈伤组织成活率及愈伤组织分化率都有一定的抑制作用。但愈伤组织在生植株的抗性显著提高。     

通过组织培养筛选番茄抗早疫病突变体

用感病番茄品种的子叶进行组织培养，以早疫病菌培养滤液为选择剂进行了抗病突变体筛选。经７次继代筛选，获得５１块抗性愈伤组织，分化出８株再生植株。经人工接种抗病性鉴定表明８株再生植株均为抗病植株，病情指数为６．２５。４９株对照再生植株病情指数为８９．２９，其中有一株也是抗病植株。原品种的病情指数为９３．３３。     

水稻白叶枯病菌对体细胞突变体HX-3愈伤组织的侵染

以抗白叶枯病细胞突变体HX-3及其感病供体明恢63的愈伤组织为试材,观察白叶枯病菌对水稻愈伤组织的侵染。结果表明：接种水稻白叶枯病菌后,明恢63愈伤组织的生长明显受到抑制,接种后13d,愈伤组织的生长量仅为对照(未接菌)的66．2％;而HX-3愈伤组织生长量减小不明显,为对照的91．3％。通过光学显微镜和透射电子显微镜观察,明恢63接菌后5d,愈伤组织细胞逐步解体,且细胞内有大量细菌侵入,接菌后13d,愈伤组织细胞大量解体破碎;而HX-3接菌后5d,愈伤组织的细胞排列致密,未见异常,接菌后13d,愈伤组织中有些细胞解体,但解体程度小且侵入到细胞内的细菌数量少。说明HX-3和明恢63在细胞水平上的抗性存在较大差别,同时也证实了水稻对白叶枯病的抗性在植株水平和细胞水平上具有相关性,这就为运用细胞突变体离体筛选技术获得抗病突变体提供了理论依据。     

在试管中筛选烟草抗黑胫病突变体

用烟草体细胞愈伤组织与烟草黑胫病菌共同培养,在209块G_(140)烟草体细胞愈伤组织中有1块长出抗菌突变系,离开选择压力后经3次140天继代培养仍能表达抗性。用烟草黑胫病菌接种在单倍体试管苗上,从546株八大香单倍体试管苗中筛选到1株(代号RB_1)、从2431株小黄金1025单倍体试管苗中筛选到2株(代号RS_(1.3))抗病突变系。初步鉴定RB_1、RS_(1.3)、的抗病性均超过其亲本和高抗品种G_(140);取RB_1、RS_(1.3)叶片培养,其体细胞无性系植株群体仍具抗病性。     

烟草黑胫病生物防治的研究进展

随着烟草生产向无公害发展,黑胫病作为烟草生产上的主要病害之一,其生物防治取得了较大的进展。笔者就其育种、生防菌、寻找抗病基因、筛选细胞突变体,诱导抗性和轮作等方面的研究进行综述,以期为烟草黑胫病的生物防治提供参考。     

利用幼穗愈伤组织筛选小麦抗赤霉病菌毒素体细胞突变体的研究

以不同小麦品种（系）幼穗诱导的愈伤组织进行小麦抗赤霉病体细胞突变体筛选，结果表明，不同赤霉病抗性品种（系）对赤霉菌素表现不同的反应，抗性品种愈伤组织生长受毒素抑制小，感病品种伤组织受毒素抑制强烈，筛选出了赤霉病菌毒素加入的最适浓度为２％（Ｖ／Ｖ），在该浓度下可筛选出抗性突变体，获得了咸农１５１，陕１６７，陕２２９等品种（系）的赤霉病菌素抗性体细胞无性系再生植株，再生植株田间人工接种鉴定表现出中或高     

枸杞抗黑果病变异体的初步研究

用枸杞品种宁杞1号的髓组织进行离体培养,诱导产生胚性愈伤组织,用110GY(半致死剂量)的60Co-γ射线处理并恢复增殖14d后,以枸杞胶孢炭疽菌(ColletotrichumgloeosporioidesPens)纯菌株产生的培养滤液为选择剂,筛选抗性变异体。在含毒素液60%条件下,一步筛选获得抗炭疽病毒素的愈伤组织,将其转移到含50%毒素液的诱导培养基上培养,经不断选择,选出了抗50%毒素液、且抗性稳定的抗性愈伤组织变异体,该变异体在含30%毒素液的分化培养基中可分化成再生植株,其叶片经胶孢炭疽菌分生孢子接种鉴定,有6株抗病。说明经筛选得到的抗性再生植株是抗炭疽病(黑果病)的变异体。     

生物工程应用于作物育种的试验甘蔗抗黑穗病细胞突变体的筛选

本试验采用甘蔗愈伤组织作离体培养，在培养基中加入甘蔗黑穗病粗毒素滤液为选择压力。采用电导率、生长量、蛋白质含量作为选择抗病性突变体的一种技术方法加以研究。实验表明：粗毒素滤液具有与黑穗病孢子相同的致病性，可替代孢子用于甘蔗抗黑穗病突变体的筛选与鉴定。测定甘蔗愈伤组织受侵染后的生长量和愈伤组织的电导率，可作为选择抗病突变体鉴别方法之一。     

棉花枯萎病菌毒素对种子发芽和组织生长的毒害作用

用改良理查德液体产毒培养基培养棉花枯萎病菌,取其培养滤液作为毒素液。测试了毒素液对抗病、感病品种种子发芽、愈伤组织的诱导和生长的毒害作用和对幼苗的致萎作用以及对叶片电导率的影响。为毒素液应用于抗病资源的快速筛选与鉴定、体细胞抗性突变体的筛选等研究提供了可靠的参考资料。     

玉米愈伤抗病性的快速鉴定技术

研究以玉米单倍体胚性细胞无性系和玉米小斑病菌致病毒素为试材，首先测定了ｐＨ值、温度和光照等因素对愈伤组织的离散细胞自然存活率的影响，在此基础上，进一步明确了致病毒素的最佳处理条件，从而建立了一套玉米愈伤组织抗病性的鉴定体系──离散细胞染色法。试验证明，该技术体系可操作性强、快速简便、灵敏可靠，可在其他许多植物细胞和组织培养的抗病突变体筛选中引用。     

利用粗毒素离体筛选苏丹草抗叶斑病体细胞突变体

以苏丹草叶斑病菌粗毒素提取液作为抗性筛选的选择压,对苏丹草幼穗愈伤组织进行抗病筛选。结果表明,粗毒素对幼穗愈伤组织的分化具有明显的抑制作用,抑制程度随浓度的增大而加强,其最适粗毒素浓度为10 mg/L。利用粗毒素离体筛选获得的体细胞突变体中出现了对叶斑病抗性比对照提高2~3级的植株。     

甘蔗抗黑穗病细胞诱变育种研究简报

采用感病品种桂糖１１号诱导愈伤组织，用Ｃｏ＾６０－γ射线３５００拉德剂量致使细胞基因突变后，分三个时期输入到加有黑穗病粗毒素为选择压力的培养基，进行抗必筛选。从再生植株中筛选获得三个抗病突变株系，通过种茎黑穗病孢子接种田间观测及测定甘蔗愈伤组织受侵染后的生长量和愈伤组织的电导率，使这三个株系的抗病性得以验证。