湖南省长沙市番茄黄化曲叶病毒的检测与系统发育分析

[目的]对湖南省长沙市发生的疑似番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)样本进行检测,明确TYLCV在湖南长沙的发生情况,为TYLCV的防控提供科学依据.[方法]2016年3和11月,在湖南长沙采集疑似TYLCV样本48份,采用已发表的TYLCV不同株系的全基因组序列,利用DNAMAN进行序列比对,根据保守序列设计特异性引物TY-T-F和TY-T-R、TY-P-F和TY-P-R对番茄样本的DNA进行PCR、Southern印迹杂交(Sourthern blotting)检测和系统发育分析.对呈阳性条带的PCR产物进行切胶回收并送样测序,在NCBI上进行BLAST比对分析,利用系统发育分析TYLCV湖南长沙分离物与国内外株系的相似性.[结果]采集的48份样本中有42份样本能扩增出目的条带,阳性检出率为87.5%;将42个阳性克隆序列导入MEGA 7.0,得到27个分离物.对测序结果进行同源性分析、多重比对、聚类分析及进化分析,结果显示27个湖南长沙TYLCV分离物与我国其他省(市)分离物的相似性在98.5%~99.8%,与伊朗株系(AJ132711和GU076453)、墨西哥株系(FJ012358)、澳大利亚株系(GU178814)和葡萄牙株系(AF105975)的相似性分别介于90.7%~91.5%、95.4%~95.5%、98.6%~98.8%和99.3%~99.4%.[结论]TYLCV已在湖南长沙发生危害,需加强检疫工作,防止从疫区调运感病番茄,以控制病害扩散蔓延.     

南京郊区番茄病毒病的毒源类型分析

1980年从南京郊区共采番茄病毒病样本614株。塑料棚架栽培的番茄病毒病以烟草花叶病毒番茄株系为主,占样本总数的75.5%。大田栽培的番茄,在五月中旬以前田间未观察到典型病株,可疑病株也未分离出病毒。五月中旬以后,两个调查基点中优势病毒不同,南京市蔬菜研究所试验田以烟草花叶病毒番茄株系为主,玄武大队只鉴定出黄瓜花叶病毒。秋番茄也以烟草花叶病毒番茄株系居多。番茄条斑病也以烟草花叶病毒番茄株系侵染的单一条斑为主。     

新疆番茄烟草花叶病毒(TMV)株系分化研究

对新疆番茄281份样本进行病毒种类鉴定,结果表明,100%的样本感染了烟草花叶病毒(TMV).对其中52个具有代表性的TMV分离物,按照番茄抗TMV的基因类型划分为0株系、1株系、1-2株系、1株系+2^a株系、2株系+2^a株系和1-2株系+2^a株系6种类型,其感染率分别为1.9%、61.5%、1.9%、26.9%、1.9%和5.8%,表明危害新疆番茄的TMV存在着株系分化现象,并已出现了强株系.     

广东番茄花叶病毒的鉴定

在1979～1981年间进行了本项调查研究工作,根据病毒粒子形态、血清学反应、物理性质、鉴别寄主植物和寄主范围等特性,广东番茄花叶病的病原病毒经鉴定有CMV和TMV—普通株系和TMV—番茄株系,在全省16个地点采集的223个标样中,它们分别分布于16,8和4个地点;它们所占比例分别约为74.4％,12.6％和13.9％。     

我国番茄病毒病的主要毒原种类和番茄上烟草花叶病毒株系的鉴定

 近几年来，在我国番茄主产区鉴定出番茄病毒病的主要毒原有烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、马铃薯X病毒（PVX）和马铃薯Y病毒（PVY），分别占样本的63.2%、21.4%、4.8%和3.1%，但愈往北TMV愈突出，愈往南CMV愈重要。並首次根据番茄品种中含抗TMV的基因将我国番茄上TMV划分为4个株系，即0、1、2和1.2株系，分别占分离物的81%、13.6%、3.6%和1.8%。     

新疆加工番茄病毒病毒原种类及TMV,CMV株系的鉴定

对１９９１，１９９２和１９９４年采集的４１２份加工番茄病毒病样本的鉴定结果表明，新疆加工番茄主要毒原种类有烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ），分别为样本数的４０．５％，２４．８％，１４．６％和４．４％。ＴＭＶ主要株系为０株系，占分离物的６５．７％，其次为１株系占３４．３％，没有发现２株系和１．２株系。ＣＭＶ以轻花叶株系为主，占分离物的６６．７％，重花叶株系为次，占３３．３％。     

MiR319a对番茄生长发育的影响

利用过表达miR319a及过表达其靶基因LANCOELATE(LA)的转基因番茄株系来探明miR319a对番茄生长发育产生的影响。研究发现过表达miR319a番茄株系生长缓慢、植株矮小、叶片呈现出高度褶皱的表型且叶片表皮毛密度远大于野生型番茄(WT)的。此外,过表达miR319a番茄株系的叶肉细胞内叶绿体中淀粉粒的数量显著少于WT中的。不仅如此,过表达miR319a对番茄花器官的发育也产生了显著的影响。过表达miR319a番茄株系的花器官较小,花瓣呈现高度螺旋的表型且花粉粒也呈现干瘪皱缩状。这些结果表明miR319a在番茄生长发育过程中起着重要作用。     

应用RT-PCR检测番茄上的CMV和ToMV

建立了广东番茄花叶病主要病原CMV和ToMV的RT-PCR检测技术。应用该技术对采集于广东番茄主要产区的病样本进行检测,结果表明：10个采样地点中均检测到CMV,仅2个点检测到ToMV;在所采集的49个病样本中,CMV和ToMV所占的比例分别为79．6％和12．2％,说明广东番茄花叶病毒原主要是CMV,其次是ToMV。     

四川葡萄病毒病田间普查及血清学鉴定

对四川葡萄主产区病毒病的发生和危害状况进行田间普查,并采集了48份葡萄枝条样本进行病毒病的血清学检测和鉴定。经双抗体和三抗体夹心酶联免疫法测试后．从采自四川的这批样本中分别检测出了葡萄茎沟病毒(GVA)、葡萄栓皮病毒(GVB)、葡萄扇叶病毒(GFLV)、葡萄斑点病毒(GFkV)、葡萄卷叶病毒-2(GLRaV-2)和葡萄卷叶病毒-3((GLRaV-3)6种危险性的病毒(株系),它们的检出率分别为14.6％、8．3％、10．4％、27.1％、14.6％和20．8％,另外两种靶标病毒(株系)葡萄卷叶病毒-1(GLRaV-1)和南芥菜花叶病毒(ArMV)则未被发现。在四川省内一些老龄葡萄园内．以及部分引进的葡萄新品种上,病毒病的发生和流行极为普遍,并给葡萄的正常生长和生产造成了严重危害。     

河北省番茄黄化曲叶病毒病的发生与分子诊断

[目的]对河北省发生的一种番茄病毒病进行症状识别和分子诊断。[方法]2008年11月及2009年7～10月对河北省番茄病毒病田间发生情况和典型症状进行详细调查,然后根据已发表的番茄黄化曲叶病毒的基因组序列设计特异引物,进行PCR检测。[结果]该病毒病的发病症状与番茄黄化曲叶病毒病相一致,从症状上初步诊断为番茄黄化曲叶病毒病;在石家庄和衡水采集的病株样本的DNA均扩增出307 bp大小的特异条带,表明该片段为TYLCV的一个分离物,证明采集的番茄病株是由TYLCV侵染所致的番茄黄化曲叶病毒病。[结论]该研究是番茄黄化曲叶病毒病在河北省大面积发生及从分子水平上确诊的首次报道。     

温度处理对温室番茄苗期生长的影响与TOSSIM模型的建立

研究了不同温度处理对温室番茄株系植株苗期生长的影响。结果表明,降温处理能显著降低温室番茄幼苗的鲜重、干重、株高、叶面积、叶片数和花序数;不同株系之间存在显著性差异;除鲜重与叶面积外,株系与温度处理对植株干重、株高、花序数与叶片数均没有互作效应;幼苗各生长时期的植株干重和相对生长率(RGR)与幼苗生长时间天数(t)可分别用一个二项式函数LnDW=a b×t c×t2与直线函数RGR=b 2×c×t(c≠0)来模拟。在此基础上,建立了温室番茄苗期生长TOSSIM模型。     

类番茄茄(Solanum lycopersicoides)抗病性鉴定

类番茄茄是茄属中番茄近缘野生种 ,对番茄遗传改良具有潜在价值。苗期接种鉴定和电镜病毒粒子检测。结果表明 ,类番茄茄高抗 CMV(重花叶株系 )、叶霉病 (1.2 .3小种 )和 TMV(1株系 ) ;同时 ,作者对在生产中应用高抗TMV材料时应注意的问题还提出了个人见解     

转CBF2基因番茄抗NaCl胁迫研究

为明确CBF2基因过量表达对提高植物抗盐胁迫的作用,对NaCl胁迫下的转基因番茄株系进行了分子检测和生理特性分析.结果表明CBF2基因过量表达能够提高转基因番茄植株的耐NaCl能力,表现为在含有150 mmol/L和300 mmol/L NaCl的MS培养基上,转基因植株的株高和鲜重均明显优于非转基因株系,在生理生化特性上表现为转基因番茄的可溶性蛋白含量和过氧化物酶(POD)活性比非转基因株系明显增加,而丙二醛(MDA)含量明显低于非转基因株系.     

双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析

通过对转ＴＭＶ和ＣＭＶ双价外壳蛋白基因番茄Ｔ１代群体和Ｔ２代株系进行ＰＣＲ及ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定，并分别进行温室及田间抗病毒试验，结果表明，Ｔ１代工程番茄植株中确有ＣＭＶ—ＴＭＶ双价外壳蛋白基因的遗传和分离，其遗传行为符合显性单基因的孟德尔遗传。Ｔ２代部分株系ＣＭＶ—ＴＭＶ双价ＣＰ基因已获得稳定遗传，共获得了３个遗传稳定的番茄株系。     

温州市番茄曲叶病毒病的发生与防治对策

番茄是温州市主要的蔬菜之一,在各蔬菜产区大面积广泛种植。2006年10月以来,温州市乐清、瑞安、苍南、瓯海、龙湾等地设施栽培的番茄上相继发生了一种新的病毒病。为此,我们从不同地点分别采集了病症表现较典型的罹病植株样本,送浙江大学生物技术研究所鉴定,经该所对多个病样用超薄切片电镜观察、酶学检测(ELISA)和分子检测后确认其病原是双生病毒中的台湾番茄曲叶病毒(也称烟草曲叶病毒)(Tomato leaf curl Tanwan virus,TLCV),该病毒在浙江省温州市系首次在番茄上检测到,经检索在国内也未见详细报道。台湾番茄曲叶病毒病是一种由烟粉…     

番茄黄化曲叶病毒山东泰安分离物的全基因组克隆与分析

2011年春季在山东泰安保护地采集疑似番茄黄化曲叶病毒病症状的样品(SDTA),利用双生病毒的通用引物及DNA-A基因的全长引物对样品进行扩增并测序,得到共2 781 bp的核苷酸序列。序列比对发现,该样品与番茄黄化曲叶病毒安徽分离物(FN650807)同源性最高为99.6%,系统进化树表明,该样品是番茄黄化曲叶病毒,属于番茄黄化曲叶病毒以色列株系。     

超表达PpSnRK1不同亚基对番茄叶绿素荧光参数及光合特性的影响

以超表达PpSnRK1α番茄株系(T41、T43、T44)、PpSnRK1β1株系(T21、T23)、PpSnRK1β2株系(T91、T92)及野生型番茄(Solanum lycopersicum)为试材,研究SnRK1对番茄叶绿素荧光参数及光合特性的影响。结果表明,植物的潜在最大光能转换效率(Fv/Fm)比野生型高5.13%-7.70%;PSⅡ的实际光化学量子效率(ΦPSⅡ)比野生型高44.44%～94.44%。同时与野生型番茄相比,超表达PpSnRK1各亚基的番茄功能叶片的净光合速率均有不同程度的提高,其中PpSnRK1β2超表达株系比野生型WT提高38.76%和42.18%;CO_2饱和点比野生型番茄均有不同程度的提高,比野生型高3.6%～30.73%。各转基因株系的胞间CO_2浓度和气孔导度均高于野生型,并且随着中午气温的升高,野生型番茄胞间CO_2浓度明显下降,而转基因株系没有显著的下降。因此,说明SnRK1对植物光合作用有重要的调控作用。     

拟南芥AtmiR399f基因在番茄中异位表达对低磷耐性及外观形态的影响

为了研究miR399过量表达的番茄对低磷胁迫的响应,将拟南芥AtmiR399f基因转入番茄中,获得超表达量不同的2个株系,探讨转基因番茄外观形态表现以及耐低磷的可能机制。构建植物表达载体pBI121-AtmiR399f,用农杆菌介导法将拟南芥AtmiR399f基因转化到番茄体内,用茎环半定量RT-PCR法进一步确定2株不同表达水平的转AtmiR399f基因番茄株系,以此为试验材料,用茎环反转录实时荧光定量PCR检测miR399的表达量,用不同浓度磷处理株系,并且实时荧光定量PCR检测与磷运输有关的基因的表达量以及半定量RT-PCR检测与乙烯信号途径有关的基因的表达量。与野生型番茄株系相比,转基因番茄产生更多的侧根及次级侧根,且种子更大、茎秆更粗壮,对低磷逆境环境耐性更强。另外,磷运输相关基因LePT1没变化,乙烯合成途径中pTOM13基因和ACS基因表达量也升高。异位表达AtmiR399f基因的转基因番茄株系miR399表达量增高,对低磷耐性增强,miR399是通过调控乙烯合成途径来影响植物对磷的吸收。     

耐番茄黄化曲叶病毒病樱桃番茄新品种‘沪樱6号'的选育

‘沪樱6号'是以株系S12-620-2-4为母本、株系365-34-1为父本配制而成的樱桃番茄一代杂种,无限生长类型,节间短,中早熟,生长势强,果实高圆形,幼果有绿果肩,成熟果粉红色,平均单果质量18.0 g左右,大小均匀,商品果率高,口感风味好,不易裂果,耐储运,耐番茄黄化曲叶病毒病,塑料大棚春提早栽培产量43 000 kg/hm~2,塑料大棚秋延后栽培产量37 500 kg/hm~2。