红树林植物来源内生真菌构巢曲霉MA143次级代谢产物的分离与结构鉴定

以红树林植物来源内生真菌构巢曲霉MA143为研究对象,对其ICI培养基发酵粗提物的化学成分进行初步研究,以期从红树林植物中分离得到具有显著生物活性的新化合物,用于如抗肿瘤、抗真菌等医药用途。采用萃取法、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、RP-18反相柱层析等技术从中分离纯化得到了3个化合物。结合碳谱(13C-NMR)、氢谱(1HNMR)、质谱(ESI-MS)等波谱学技术及相关数据库检索鉴定出这3个化合物分别为:sterigmatocystin、Versicolorin A、Averufanin。红树林植物开发新型生物活性物质的潜能不可低估,开发其药物价值,发挥其经济效益与生态效益,促进海岸居民对其加以保护和种植,具有非常重要的现实意义。     

栲树皮乙醇提取物中多酚类化学成分的鉴定

采用Sephadex LH-20,MCI gel CHP 20P和Toyopearl Butyl-650C等柱色谱方法研究栲(Castanopsis fargesii Franch.)树皮乙醇提取物的化学成分。从栲树皮80%乙醇提取物中分离得到10个化合物,根据波谱数据分析鉴定化合物的结构,分别鉴定为苯甲酸、原儿茶酸、没食子酸、5-O-没食子莽草酸、3,5-二-O-没食子奎宁酸、表儿茶素、儿茶素、棓儿茶素、木麻黄鞣质和栗木鞣花素。所有的化合物均为首次从栲树中分离得到。     

酸枣仁中一个新的角型呋喃黄酮苷

对鼠李科植物酸枣仁的化学成分进行了研究,分离得到一个新的角型呋喃黄酮苷类化合物.研究流程如下:药材的70%乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,乙酸乙酯部分再经过反复硅胶柱层析后得到一个黄酮苷类化合物.经酸水解和波谱分析,其结构确证为一个新的角型呋喃黄酮鼠李糖苷,命名为spinorhamnoside.     

银杏叶中黄酮和萜类内酯分离工艺条件优化

用闪式硅胶柱层析分离纯化银杏叶中有效成分黄酮醇苷和萜类内酯工艺条件的优选。用不同极性溶剂(乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇)对加样品后的闪式硅胶层析柱进行洗脱,收集洗脱液,采用高效液相色谱法分别测定每份洗脱液中黄酮醇苷和萜类内酯的含量,从而筛选出应用闪式硅胶柱层析时,最佳的洗脱液种类和用量为:萜类内酯用3倍床体积的乙酸乙酯洗脱,黄酮醇苷用4倍床体积的丙酮洗脱即得。     

用RAPD技术测定黑荆树种源遗传关系初报

黑荆树(Acacia mearnsii Willd)系含羞草科(Mimosaceae)金合欢属(Acacia)植物,是一多用途、速生树种。我国引种时间较短,种源混杂,但黑荆树象其它树种一样,表型的变化受环境影响极大,种内各品种之间的差异很小,很难用常规的方法加以识别和划分。而应用RAPD技术可以快速、简便、灵敏地检测DNA的多态性,将品种间的差异显著地反映出来。这已在医学上、农业上得到广泛的应用。RAPD在林业上也已有应用,例如,苏晓华用RAPD技术估测了柳树种及无性系的变异;李宽鈺利用RAPD分子标记对白杨派,青杨派之间的系统进     

酸枣根的化学成分研究

用各种柱色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱解析鉴定其化学结构,从而研究酸枣根中的化学成分。结果表明从酸枣分离得到7个化合物,分别鉴定为羽扇豆醇(Ⅰ),白桦酯酸(Ⅱ),美洲茶酸(Ⅲ),异美洲茶酸(Ⅳ),豆甾醇(Ⅴ),豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(Ⅵ),蛇婆子碱(Ⅶ)。其中化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为首次从该植物中得到。     

基于CTAB法提取毛竹基因组DNA的探讨

应用CTAB法、改良CTAB法、改良CTAB-高盐沉淀法对毛竹基因组DNA进行了提取,并用紫外分光光度计(UV3300)、琼脂糖凝胶电泳和PCR分析对提取的DNA进行了检测,对DNA的产量、质量、PCR效果等方面进行了综合比较.结果表明:改良CTAB-高盐沉淀法是提取高质量毛竹基因组DNA的较好方法.     

洋葱伯克霍尔德菌C23抗真菌活性多肽的分离纯化

为了深入研究洋葱伯克霍尔德菌C23(Burkholderia cepacia C23)菌株产生的抗真菌活性物质,以立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)为指示菌进行生物活性跟踪,采用有机沉淀法、超滤法、Sephadex G25分子凝胶过滤法对活性物质进行分离纯化。结果表明,洋葱伯克霍尔德菌C23菌株产生的抗真菌活性物质为分子量5 000～10 000 Da的多肽类物质;建立了用超滤、分子凝胶过滤快速有效分离纯化伯克霍尔德菌C23菌株活性多肽的技术方法,为进一步制备单一的活性多肽成分奠定了基础。     

漾濞核桃叶片基因组DNA的两种提取方法效果比较

以漾濞核桃不同生长期的叶片为材料，采用高盐低pH法和改良CTAB法作提取其基因组DNA的效果比较实验。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增对所提取的DNA样品进行检测，比较所得DNA的产量、质量，认为从漾濞核桃不同发育时期叶片中获得DNA的提取效果不同。4种叶样以冬芽和新叶的效果为好，老叶最差；用两种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同，高盐低pH法提取的DNA纯度高，但是产量较低；而改良CTAB法则相反，产量高，纯度低。     

Purification, characterization and evaluation of insecticidal activity of trypsin inhibitor from Albizia lebbeck seeds

A Bowman-Birk inhibitor with activity against gut proteases of Helicoverpa armigera was extracted in 0.1 M sodium phosphate buffer from defatted seed flour of Albizia lebbeck. It was purified to 29.62 folds with 51.43% recovery using ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography on Sephadex G-100 column and ion exchange chromatography on DEAE-Sephadex A50. The purified protein had a molecular weight of 12,303 daltons as determined by SDS-PAGE. It was found to be heat stable up to 60°C and had two pH optima of 7.5 and 9.0. The inhibitor exhibited non-competitive pattern of inhibition with a low Ki value of 0.2 μM. The inhibitor was found to be susceptible to varying concentrations of reducing agents like DTT and 2-mercaptoethanol, thereby indicating the role of disulphide bridges in maintaining its three dimensional structure and stability. The purified inhibitor caused mortality and suppressed larval growth of Pieris brassicae larvae. It was also found to be effective against gut trypsin extracted from Spodoptera littoralis. The sequence of the genes encoding for such inhibitors can be determined and the genes expressing protease inhibitors can be used in vegetable crops to confer resistance against insect pests and other plant pathogens.     

五唇兰基因组DNA提取方法的优化

五唇兰组织内含有大量的酚类、多糖以及此生代谢产物,DNA提取较为困难。为获得高质量的五唇兰基因组DNA,文中采用传统十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、常规十二烷基硫酸钠(SDS)法和改进的CTAB法对五唇兰基因组DNA的提取进行比较。结果表明:改进的CTAB法比传统CTAB法和常规SDS法都好,可以得到质量较好的DNA,电泳条带清晰,通过紫外分光光度计检测,A260/A280为2.0以上。     

根际土壤微生物DNA提取及纯化方法的比较

本文采用了四种方法对红松和长白赤松土壤根际土壤微生物DNA进行了提取,同时分别采用了三种方法对所提取的根际土壤微生物粗DNA进行了纯化,并且对不同的提取和纯化方法进行了比较和评价。结果表明:对根际土壤微生物总DNA提取效果最好的是,以SDS为基础的含有1.0%(w/v)的高浓度NaCl的蛋白酶K法。这个方法可有效地去除腐殖酸和其它杂质。由于透析法能够积极有效地去除粗DNA中的棕色物质和腐殖酸,所以非常适合纯化根际土壤微生物DNA,而且纯化产物进行PCR扩增时效果很好。此外,挤胶法由于其经济有效的优点,所以也是一个很好的纯化根际土壤微生物粗DNA的方法。     

硅胶干燥野扁桃叶片制备DNA样品及其SSR反应体系的建立

对硅胶干燥保存制备新疆野扁桃DNA样品和SSR反应体系优化进行了研究.结果表明:在室温下贮存3个月、6个月、9个月、1年和2年的硅胶干燥的同一野扁桃叶片材料中采用改进的CTAB法提取了高质量的基因组总DNA.较好的克服了野扁桃叶片中含有较高的多糖、多酚、色素以及单宁等次生物质的影响.通过A2s0/A280,琼脂糖凝胶电泳和PCR-SSR扩增结果分析对提取的基因组DNA进行了鉴定,2年内不同保存时期的同一材料对于DNA提取没有明显差异,提取的DNA用于SSR扩增所得的扩增产物也均无明显差异;确立野扁桃最佳的PCR-SSR反应体系是30～50 ng DNA模板,0.5UTaqDNA聚合酶,2.0mmol·L-1MgCl2,0.2 mmol·L-1dNTPs,0.2 mmol·L-1的引物,10×Taq酶配套缓冲液(pH 8.0),反应终体积20uL,引物最佳退火温度为54～57C.利用40个野扁桃随机叶样验证此反应体系,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在200～600 bp,多态性高,且反应体系的稳定性和可重复性好.     

连翘叶片总DNA提取方法的比较

以连翘[Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl]的新鲜叶片为材料,分别采用CTAB法、高盐低pH法和SDS法3种不同方法提取其总DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测获得的DNA的质量,以期从中找出提取连翘总DNA的最适方法。结果表明对于连翘的新鲜叶片,无论从产率上还是质量上,CTAB法都明显优于其他两种方法。     

Genetic transformation,electrophoretic karyotyping and isolation of insertional mutants in the tree pathogenic fungus Neonectria galligena

The ascomycete tree pathogen Neonectria galligena was transformed using several plasmid vectors containing the bacterial hygromycin phosphotransferase gene (hph) conferring resistance to hygromycin B. Protoplasts were produced by digesting germinating conidia in a Novozym 234 solution osmotically stabilized with NaCl. The protoplasts regenerated at ca. 70% on complete medium supplemented with either sucrose or NaCl. Up to 115 hygromycin B‐resistant transformants per microgram of transforming DNA per 10⁸ protoplasts were obtained. Southern analysis of genomic DNA from the transformants, separated by either standard agarose gel electrophoresis or by pulsed field gel electrophoresis, confirmed that hygromycin B resistance resulted from integration of the vector. Transformants expressing the green fluorescent protein were also obtained. A total of 209 transformants were then screened for aggressiveness and mycelial radial growth. Four mutants were identified including one mutant with reduced aggressiveness but normal growth in vitro, two mutants with reduced growth in vitro but normal aggressiveness, and one mutant in which both aggressiveness and in vitro growth were reduced.     

青梅叶化学成分研究

采用正相硅胶柱、反相硅胶柱、凝胶柱等柱色谱及高效液相色谱等方法对青梅叶的化学成分进行分离纯化,并通过理化性质和核磁共振等方法鉴定化合物的结构。从青梅叶75%乙醇提取物中分离了13个化合物,分别鉴定为岩白菜素(1),1,3,4/2,5-环己五醇(2),3-(1-C-β-葡萄糖)-2,6-二羟基-5-甲氧基苯甲酸(3),木栓酮(4),木栓醇(5),羽扇豆醇(6),4-叔丁基苯甲醚(7),对甲氧基苯甲酸(8),邻苯二甲酸二异丁酯(9),邻苯二甲酸二丁酯(10),熊果酸(11),β-谷甾醇(12),β-胡萝卜苷(13)。化合物2～9均为首次从青梅属植物中分离得到,化合物1为青梅中具有保肝护肝的主要活性成分之一。     

凝胶过滤层析纯化辣木絮凝剂研究

试验用已知分子量的乳酸菌肽和溶菌酶为标准品,将其混合物通过Sephadex-G50葡聚糖凝胶柱,获得标准品的洗脱时间及洗脱体积,在同等条件下将辣木絮凝剂粗提物上柱,根据标准品获得的洗脱时间与分子量的关系,收集分子量为3kDa～13kDa的组分。经过纯化后的辣木絮凝剂可把污浊度为82.00NTU的澜沧江水降到3.66NTU,去除率达95.54%,较辣木絮凝剂粗提物的去除率提高23.48%。     

仙人掌超氧化物歧化酶提取与纯化工艺研究

为了实现对仙人掌资源的深度开发利用,试验研究了以规模化种植的食用仙人掌为材料,提取和纯化SOD的工艺路线和相关参数。去除新鲜仙人掌表面的刺和蜡质、清洗、榨汁、粗滤、超声波处理、离心,得仙人掌粗酶液,再经热处理、硫酸铵盐析和SephadexG-100柱层析分离纯化,高分子聚合物脱水,真空冷冻干燥,获得仙人掌SOD粗酶粉,得率为13.3mg/100g.fw,酶活力为860U/mg。超声波处理能够显著降低仙人掌原浆的黏稠度,提高出汁率,相应提高从原浆里提取SOD的得率。通过正交试验,超声波功率600W、温度40℃与时间20min的组合,所得仙人掌汁液SOD活力收率最高,达215.6U/mL。硫酸铵饱和度40%和85%分别用于除杂质和沉淀SOD目标蛋白具有纯化和浓缩的双重效果。     

黑龙江省两种金丝桃属植物RAPD反应的初步研究

利用RAPD技术,对黑龙江省金丝桃属两种植物进行DNA分子遗传标记鉴别,从30种随机引物中筛选出,对乌腺金丝桃、长柱金丝桃扩增具有较明显多态性的3种引物,进而从基因水平探讨其遗传本质。结果表明：引物S75、S76、S80可作为乌腺金丝桃、长柱金丝桃的高特异性引物,用这三种鉴别引物对样品的DNA进行PCR反应,经琼脂糖凝胶电泳,就可以准确鉴别。