结晶紫和盐酸环丙沙星在导电碳黑糊电极上的伏安检测

以导电碳黑糊电极为工作电极,研究了结晶紫(CT)和盐酸环丙沙星(CPFX)的伏安行为,结果表明,B-R缓冲溶液(p H 4.5)中,二者具有互不干扰的灵敏电极响应。实验对缓冲液种类、p H、富集电位和富集时间等影响检测的因素进行了研究与优化,进而建立了二者的伏安检测方法。采用半微分脉冲模式,CPFX共存情况下,CT的氧化峰电流与其浓度在2.5×10-8~1.325×10-6mol/L范围内呈线性关系;CT共存情况下,CPFX的氧化峰电流与其浓度在5.0×10-8~4.85×10-6mol/L范围内呈线性关系;检测限(S/N=3)分别为10.5和21.2 nmol/L。将所建立的电化学方法应用于测定淡水渔业水样中CT和CPFX的残留量,得到了较满意的结果。CT和CPFX的平均回收率分别为97.8%和101.1%。该方法具有操作简便、响应快和成本低等显著优点,因而具有潜在推广应用价值。     

抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量单抗,捕获EL ISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果显示,成功构建2株能稳定分泌DA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2B1和4C2,抗体亚类分别为IgG1和IgG2a,间接EL ISA检测小鼠腹水的抗体效价达1∶64 000,腹水纯化后蛋白浓度为1.27和0.675 mg/mL。研究结果表明,成功制备的抗DA单克隆抗体杂交瘤细胞株稳定、高效,为利用该单抗研制快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条打下基础。     

牛磺酸、γ-氨基丁酸对鲫抗缺氧能力的影响

研究牛磺酸、γ-氨基丁酸对鲫抗缺氧能力的影响,结果表明质量分数5‰、7‰牛磺酸水溶液对鲫抗缺氧能力有显著(P<0.05)和极显著作用(P<0.01),质量分数3‰γ-氨基丁酸水溶液对鲫抗缺氧有显著作用(P<0.05)。实验证明,γ-氨基丁酸、牛磺酸均可提高鲫的抗缺氧能力。     

中华鲟和达氏鳇血清免疫球蛋白的木瓜蛋白酶水解片段分析

首先采用饱和硫酸氨分步沉淀和Sephadex G-200凝胶层析的方法,获得了非免疫状态下中华鲟(Acipenser sinensis Gray)和达氏鳇(Huso dauricus Georgi)的血清免疫球蛋白(Ig),在此基础上使用木瓜蛋白酶水解对所获得的免疫球蛋白片段进行了酶解,并采用SDS-PAGE和Western-blot等方法分析了所获得的水解片段。结果显示,2种鲟鱼的免疫球蛋白均可被木瓜蛋白酶水解蛋白,通过Sephadex G-100凝胶层析后均可得到两个完全分离的、均一的蛋白峰。SDS-PAGE检测两个水解片段的相对分子量分别为44KD和66KD,West-ern-blot检测结果显示,66KD的片段可以在硝酸纤维素杂交膜上被各自的兔抗鲟IgM多克隆抗体所识别,而44KD片段的检测结果为阴性。这表明,2种鲟科鱼类的木瓜蛋白酶水解特性相同,提示鲟科鱼类的免疫球蛋白在免疫学及生化方面具有较大的相似性。     

牛磺酸、γ-氨基丁酸对高体鳑鮍抗缺氧能力的影响

分别设置5种不同质量分数的牛磺酸、γ-氨基丁酸溶液,在50 mL倒置的锥形瓶中,研究了它们对高体鳑鮍抗缺氧能力的影响.结果表明,牛磺酸、γ-氨基丁酸均能增强高体鳑鮍抗缺氧能力,0.10%和0.30%的牛磺酸溶液对提高高体鳑鮍抗缺氧能力有极显著和显著作用;0.15%的γ-氨基丁酸溶液对提高高体鳑鮍抗缺氧能力有极显著作用.     

两种药物对脊尾白虾各期(氵蚤）状幼体的毒性试验

采用静水实验法进行甲醛和孔雀石绿对脊尾白虾 (Exopalaemoncarinicauda)各期状幼体 (Z1～Z6)的急性毒性研究。结果表明 :在pH值为 7 9± 0 5、水温 (2 6 0± 0 5 )℃的条件下 ,甲醛对脊尾白虾Z1～Z6的半致死浓度 (48hLC50 )分别为 176× 10 -6,16 7× 10 -6,15 0× 10 -6,16 7× 10 -6,113× 10 -6,5 5× 10 -6,安全浓度 (Cs)分别为 30× 10 -6,17× 10 -6,32× 10 -6,11× 10 -6,4× 10 -6,9× 10 -6;孔雀石绿对脊尾白虾Z1～Z6的 4 8hLC50 分别为 0 4 5 1× 10 -6,0 4 4 8× 10 -6,0 5 91× 10 -6,0 4 4 0× 10 -6,0 380× 10 -6,0 15 8× 10 -6,Cs分别为 0 0 6 9× 10 -6,0 0 5 8× 10 -6,0 10 2× 10 -6,0 0 90× 10 -6,0 0 71× 10 -6,0 0 34× 10 -6。其中Z5和Z6对以上药物的敏感性较高     

蟹源拟态弧菌外毒素酶活性的分析

采用琼脂平板扩散法和指示凝胶技术对蟹源拟态弧菌HX-4菌株外毒素的酶活性及稳定性等特性进行了系统研究。结果显示:该菌外毒素具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素、卵磷脂酶和几丁质酶活性,不具有血浆凝固酶、脂酶和DNase酶活性。外毒素具有相对的稳定性,除热外,其它环境因素改变对其酶活性影响不大。指示凝胶技术试验结果表明:外毒素含有3种蛋白成份,相对分子量分别为154 KD、143 KD和117 KD,同时具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、溶血素活性。     

团头鲂血清抗草鱼出血病病毒活性成分的稳定性

团头鲂血清被强酸或强碱处理后 ,其抗草鱼出血病病毒活性完全丧失 ;而pH分别为 4 0和 8 0的弱酸性和弱碱性环境对其抗病毒活性没有影响 ;1 0mmol/L的 β - 2 -巯基乙醇与团头鲂血清作用 2h后 ,其抗病毒活性略有增加 ;而中性盐 (NH4 ) 2 SO4 分级沉淀团头鲂血清后 ,其病毒中和指数下降约 95 %。     

中国水产科学2003年第10卷第1～6期关键词检索

(按汉字拼音字母顺序排列 )JournalofFisherySciencesofChinaVol.10Nos .(1～ 6 ) 2 0 0 3KeyWordsIndex16SrRNA　　Fenneropenaeuschinensis;sequenceanalysis ;Penaeidae ;phy logeny (5 ) :35 9- 36 417β -estradiol　　Mugilcephalus;aromatase ;estrogenreceptor;doublestaining(6 ) :4 4 6 - 4 5 0Acipenserruthenus　　Acipenserschrenckii;seminalplasma ;microelement(4) :35 0 - 2 5 2Acipenserschrenckii　　Acipenserruthenus;seminalplasma ;microelement(4) :35 0 - 2 5 2Aeromonashydrophila　　serotypes;outerme…     

鲟鱼GtH放射免疫测定方法的建立及催产前后史氏鲟血清GtH含量的变化

用蛋白质快速液相层析(FPLC)分离俄罗斯鲟鱼脑垂体促性腺激素（GtH），共获得GtH纯化蛋白4.6mg。用SDS-PAGE变性胶电泳图谱初步分析纯化蛋白，用反相高效液相色谱（rpHPLC）分离出两个亚基，质谱测定α亚基分子量：15603KD，两个β亚基分子量分别为14338KD和14694KD。制备了鲟鱼GtH的兔抗血清多克隆抗体，采用氯胺T法用125I标记抗原，用羊抗兔γ球蛋白做二抗，建立鲟鱼GtH的放射免疫测定方法。测定了催产前后不同时间史氏鲟血清中GtH含量的变化，统计分析表明成功排卵的雌鱼比未排卵和阴性对照组在催产后12小时和16小时GTH分泌量升高显著，最高达到234ng/ml；催产效应时间与催产后血清中GtH的含量紧密相关。     

Changes in Serum Steroid Hormones and Vitellogenin Levels in Cultured Female European Eels Anguilla anguilla during Artificially Induced Ovarian Development

Changes in serum concentrations of estradiol-17β, testosterone, 17α,20βdihydroxy-4-pregnen-3-one, and vitellogenin were investigated during ovarian development induced by injection of a salmon pituitary extract in cultured European eel Anguilla anguilla . Vitellogenesis was induced with a weekly dose of 50 mg pituitary extract/kg body weight. In eels receiving that dose, gonadsomatic indices ranged from 20–43% after the 10th–11th weekly injection. Body weights were relatively stable during vitellogenesis, but increased dramatically during final maturation. Serum estradiol-17β levels increased slightly during vitellogenesis and peaked at an average of 6.95 ng/mL at final maturation. The profile of serum vitellogenin followed that of estradiol-17β which increased markedly from an average of 0.36 to 20.72 mg/mL. Control levels of vitellogenin were undetectable throughout the study. Average serum levels of testosterone increased to a peak of 17.74 ng/mL in the early stage of vitellogenesis, followed by a sharp drop to initial levels (3.86 ng/mL) in the late stage of vitellogenesis, and then increased again to an average of 8.84 ng/mL at the final maturation stage. Serum 17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one was not detected (<50 pg/mL) throughout the experiment. Profiles of serum estradiol-17β, testosterone, and vitellogenin observed during ovarian development appear different from those found in salmonids and other teleosts. This study indicates, however, that cultured European eels are a useful model for study of gonadal maturation in the eel.     

病毒性出血性败血症病毒单链抗体的原核表达及其功能鉴定

为制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)单链抗体(single chain variable fragment antibody,ScFv)并鉴定其生物学功能,本研究提取抗VHSV单抗1G5的杂交瘤细胞株总RNA并反转录获得cDNA模板,通过PCR扩增VHSV抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)编码序列,将其拼接成单链抗体Sc Fv基因后插入载体pET28a中,构建原核表达重组质粒并在大肠杆菌中诱导表达。结果表明,单链抗体主要以可溶性形式表达,分子量约28 ku,能特异性识别VHSV病毒的G蛋白并对VHSV病毒具有体外中和活性,其对VHSV病毒的G蛋白亲和力(KD)达到1.4×10~(–8) M。单链抗体ScFv的制备为进一步研究VHSV的治疗性抗体、快速诊断试剂奠定了基础。     

蜈蚣藻多糖纯化及抗氧化作用的研究

采用热水浸提法提取蜈蚣藻多糖,通过对超氧阴离子（·O2-）、羟基自由基（·OH）清除效果的研究,评价了蜈蚣藻多糖的体外抗氧化活性,以及对蛋白脱除率和多糖损失率的分析,比较了TCA法和Sevage法脱蛋白的效果,利用Sephadex G-150柱纯化蜈蚣藻多糖,并分析了其部分理化性质和相对分子质量分布.结果表明,蜈蚣藻多糖对·OH清除率的IC50为4.62 mg/mL,对·O2-清除率的IC50为0.62mg/mL,具有体外抗氧化效果;Sevage法脱蛋白效果优于TCA法,蛋白脱除率达85.55％,多糖损失率为15.93％;蜈蚣藻多糖是一种以多糖为主、含有糖蛋白的复合物,其相对分子量的分布范围在3.5×105 ～1.2 ×105 Da.     

LMG在养殖水体中的残留及其在鱼肌肉中的积累

检测曾投放过孔雀石绿(MG)养殖池塘中水样MG和隐性孔雀石绿(LMG)含量,并以此数据为基础通过室内模拟实验研究了不同浓度LMG养殖水体中生长的罗非鱼(Tilapia)和淡水白鲳(Colussoma brachypomum)肌肉中的积累情况。结果显示:所选取的5个池塘中LMG平均含量为30.32 ng/mL,6个月前使用过孔雀石绿的5个鱼塘的养殖水体中仍有一定量LMG残留。室内模拟实验显示:在LMG初始浓度为1.00 ng/mL的养殖水体中,LMG在罗非鱼和淡水白鲳肌肉中积累浓度分别高达60.0 ng/g和70.8 ng/g;罗非鱼肌肉中脂肪含量为0.53%,淡水白鲳为0.75%,说明脂肪含量高的淡水白鲳更容易积累LMG。同时发现,罗非鱼和淡水白鲳积累LMG浓度与水体中LMG浓度成正相关。     

Seasonality of serum levels of vitellogenin in male Japanese whiting, Sillago japonica, reared under natural temperature and photoperiod

ABSTRACT:   Because blood vitellogenin (Vg) has been considered a biomarker for environmental estrogens, the basal levels of Vg and 17β-estradiol (E₂) were determined in male Japanese whiting reared under natural conditions. Serum levels of Vg and E₂ were measured and gonadal development was assessed by gonadosomatic index (GSI) and histological observation in 8–10 male fish at monthly intervals throughout the annual reproductive cycle. Serum E₂ was <60 pg/mL throughout the study period. In contrast, serum Vg exhibited seasonal changes: serum levels of Vg gradually increased from April to May (mean 63 ± 13 ng/mL and 124 ± 48 ng/mL in April and May, respectively), and then reached a peak value (mean 352 ± 68 ng/mL) in June. Thereafter, serum Vg gradually decreased, reaching undetectable levels (<50 ng/mL) in October. Serum levels of Vg tended to increase in the male fish in which the GSI was >1%. Histological observation revealed that testes in such male fish were in active spermatogenesis and then all of the testes of male fish in which serum Vg decreased to ND levels were regressed. These results suggest that Vg productive potency (sensitivity to estrogens) may increase in the spermatogenic stage, resulting in production of Vg in response to very low levels of natural or xenobiotic estrogens.     

17β—雌二醇对雄性金鱼卵黄原蛋白的诱导作用

采用腹腔注射17β-雌二醇的方法诱导雄性金鱼卵黄原蛋白产生,注射浓度为0.05mg·g-1BW,诱导2周后取尾静脉血,离心分离血浆,进行血浆常规聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过对卵黄原蛋白特性基团磷、脂和糖蛋白的染色,确定了卵黄原蛋白在电泳图谱上的位置,开发了一种简便、高效的定性卵黄原蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。电泳结果表明,在0.05mg·g-1BW的注射浓度下,2周后17β-雌二醇诱导了雄性金鱼卵黄原蛋白产生,并通过ELISA检测卵黄原蛋白的平均含量为690.2ng·mL-1,与对照组雄性金鱼平均含量为10.7ng·mL-1的差异极显著(P<0.01),比雌性对照组检出量285.5ng·mL-1高1倍多;17β-雌二醇诱导组雄鱼血浆钙离子和血总蛋白含量明显增加。     

鳜传染性脾肾坏死病毒主衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为了建立鳜传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)疫苗抗原含量的ELISA检测方法,制备了3株抗ISKNV主衣壳蛋白(MCP)的单克隆抗体,鉴定了其生物学特性。将大肠杆菌表达的重组MCP纯化复性后,连续3次免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆、筛选,获得3株能稳定分泌抗ISKNV MCP蛋白的单克隆抗体阳性细胞株,分别命名为5F1、3D9和5B4,均为Ig G1亚型。间接ELISA实验表明,3株单抗可特异性识别ISKNV,与鳜弹状病毒、大鲵虹彩病毒等无交叉反应。将5F1株免疫小鼠后制备腹水,以重组MCP和ISKNV细胞培养物上清液为检测抗原,ELISA检测腹水效价分别为1∶51 200和1∶400。间接免疫荧光(IFA)和Western Blotting鉴定结果显示,5F1能够与ISKNV病毒发生特异性反应,并初步确定5F1单抗株制备的腹水用于IFA的使用浓度为1∶200、Western Blotting的使用浓度为1∶1000。结果证实,成功制备了抗ISKNV MCP的单克隆抗体,可特异性识别ISKNV病毒粒子和MCP蛋白,为建立ISKNV疫苗抗原含量检测方法奠定了基础。     

固相萃取-气相色谱-质谱联用法测定水产品中邻苯二甲酸酯的残留量

建立了测定水产品中常见的6种邻苯二甲酸酯类化合物（ PAEs）的气相色谱-质谱（GC-MS）分析方法。样品经环己烷：乙酸乙酯（V/V,1∶1）混合溶液超声提取,用乙腈饱和的正己烷除脂,再用正己烷饱和的乙腈反提,过PAE30006-C固相萃取小柱净化,用1%乙酸乙酯的正己烷淋洗,再用正己烷：乙酸乙酯（V/V,1∶1）混合溶液洗脱,洗脱液浓缩后,正己烷定容,供GC-MS测定。结果显示：6种邻苯二甲酸酯类化合物（ PAEs）在10-5000 ng/mL的线性范围内,相关系数在0．9992-0．9998,线性良好,检出限（ LOD ）在0．62-2．96μg/kg,定量限（ LOQ）在2．0-9．0μg/kg。选择罗非鱼样品为测试对象,按照10μg/kg、50μg/kg和100μg/kg 的添加量做加标回收试验,平均回收率在70．5%-105．4%之间,相对标准偏差在3．78%-7．57%之间;选用南美白对虾、草鱼、锯缘青蟹、大黄鱼和牡蛎样品对此方法进行验证,在添加浓度为50 ug/kg的水平上进行加标回收实验,6种PAEs的平均加标回收率在71．5%-102．5%之间,相对标准偏差在3．25%-7．86%之间。该方法提取效率高,净化效果好,可操作性强,符合水产品中药物残留检测的要求。     

斑点叉尾嗜麦芽寡养单胞菌溶血素的分离、纯化与特性研究

采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sephadex A50离子交换层析和Sephadex G100凝胶层析对嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)的溶血素进行了分离、纯化并对其生物学活性进行了研究。结果显示:嗜麦芽寡养单胞菌产生一种分子量为20.76 KD的单一多肽溶血素。该溶血素对斑点叉尾、云斑、鲫、人、小白鼠和兔等多种动物红细胞具有溶血活性;家兔肠袢试验显示其能致兔回肠积液,具有肠毒性;致Vero细胞形态改变,具有细胞毒性,对Vero细胞的TCID50为0.126μg。     

城市湖泊中邻苯二甲酸酯(PAEs)类物质的组成及其分布特征

利用GC-MS检测长春市不同位置的4个城市湖泊表层水体中8种邻苯二甲酸酯(PAEs)的浓度。结果表明:4个湖泊表层水体中PAEs总浓度(∑8PAEs)变化范围为3.02~13.03ng/mL;不同城市湖泊夏季的表层水体中的∑8PAEs含量具有一定差异性,整体表现为北湖最高,南湖和雁鸣湖其次,八一水库最低;∑8PAEs与溶解性有机物浓度(DOC)及总悬浮物浓度(TSM)没有相关性。邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)和邻苯二甲酸二异癸酯(DIDP)广泛存在于4个湖泊水体中,5~7月的平均浓度范围依次为:0.04~0.11ng/mL、0.08~1.15ng/mL、1.20~4.30ng/mL、2.86~4.52ng/mL和0.10~0.31ng/mL,而邻苯二甲酸二辛酯(DOP)、邻苯二甲酸二异壬酯(DINP)和邻苯二甲酸丁酯苄酯(BBP)仅在南湖水体中被检测到。根据《地表水环境质量标准》(GB3838-2002)要求,南湖和北湖夏季水体DBP和DEHP浓度均达标,雁鸣湖的DBP浓度超标,八一水库DBP和DEHP浓度均超标。本研究中的4个城市湖泊表层水体中PAEs的浓度高于目前报道的其他地区地表水中PAEs的浓度。