转基因抗虫抗草甘膦棉剔除杂株药剂初步研究

 为剔除转基因抗虫抗草甘膦棉中的杂株,试验采用硫酸卡那霉素4000 mg·L^-1复配41%草甘膦异丙胺盐3.3～13 mL·L^-1 4个梯度处理,以硫酸卡那霉素4000 mg·L^-1和草甘膦异丙胺盐13 mL·L^-1为2个对照,结果硫酸卡那霉素4000 mg·L^-1+草甘膦异丙胺盐3.3 mL·L^-1复配处理剔除杂株最为经济有效。同时显示该剔除液亦可用于转基因抗虫抗草甘膦棉的抗草甘膦性鉴定。     

利用卡那霉素“浸种法”准确筛选转基因小麦种子的方法研究

为了确定利用卡那霉素“浸种法”筛选转基因小麦后代种子的准确方法,以冬小麦种子为试材,探讨了卡那霉素溶液体积、浓度及种子粒数对筛选结果的影响。结果表明,卡那霉素溶液体积、小麦种子的粒数对筛选结果的影响与卡那霉素浓度同等重要。在卡那霉素浓度为60～180 mg·L^-1的范围内,以“单粒分享量”（单粒分享量=卡那霉素浓度×溶液体积/种子粒数）为筛选标准,能有效地对小麦种子进行筛选。利用此方法,我们对小麦金禾9123转基因后代7个株系的412个籽粒进行卡那霉素溶液筛选,获得84株抗性苗,经PCR检测,76株为阳性,卡那霉素筛选正确率达90.5%;同时以7个不同遗传背景的普通小麦品种也验证了此选择方法的可靠性。     

转基因棉花室内种质筛选新方法研究

为进一步改进转基因棉花室内筛选系统,使用5000mg·L^-1浓度卡那霉素分别对转Bt基因棉花和非转基因棉花品种新陆早33的种子进行卡那霉素影响侧根生成的实验研究,经过卡那霉素溶液处理的棉花种子在基质中培养5d后进行数据统计,然后分别提取生成和不生成侧根的棉花幼苗子叶DNA,进一步经聚合酶链式反应（PCR）鉴定确认。结果表明：用5000mg·L’的卡那霉素对2个品种进行筛选时,Bt棉89％有侧根形成,而新陆早33仅2％有侧根发生。PCR鉴定结果也显示有侧根生成的棉花幼苗具有卡那霉素抗性基因NPTII和抗虫基因Bt。实验结果-9预期结果一致,所以这种筛选新方法可以作为有效快捷的转基因棉花室内筛选方案。     

中棉所35及中棉所12盐胁迫下的丙二醛含量变化及其SSR指纹图谱构建

 为初步探讨盐胁迫对棉花的影响,以耐盐品种中棉所35和盐敏感品种中棉所12为材料,用清水对照、浓度分别为100 mmol·L^-1, 200 mmol·L^-1, 300 mmol·L^-1及400 mmol·L^-1的NaCl溶液处理中棉所35和中棉所12幼苗,研究盐胁迫对棉花中丙二醛含量的影响。同时,利用SSR分子标记技术,构建了这两个棉花品种的指纹图谱,用以快速鉴定。     

大豆再生植株抗草铵膦的筛选方法研究

为解决农杆菌介导的大豆子叶节转化试验中草铵膦筛选所得转基因后代假阳性高的问题,采用浸种法、根吸法、叶片涂抹法、叶片喷洒法4种筛选方法和多种筛选浓度对大豆再生植株及其后代抗性进行筛选.结果采用1∶ 200 草铵膦浓度的叶片喷洒法效果最佳.叶片喷洒法筛选6802株转化植株,获得了9株抗性植株,其后代的分子检测表明均为阳性植株.因此,采用叶片喷洒法对大豆抗草铵膦植株进行筛选的方法简便可行.     

玉米花粉管通道法转化脱水素BDN1基因

通过花粉管通道法将脱水素基因BDN1转入玉米自交系合344中,并对转化后代进行PCR和RT-PCR分子检测以及耐盐性功能鉴定,筛选耐盐性较高的转基因玉米新种质.结果表明,实验共获得88株T0代除草剂抗性植株,其中31株PCR检测呈阳性,14株RT-PCR检测呈阳性,对T4代转基因株系苗期进行300 mmol/L NaCl溶液的盐胁迫处理, 2个转基因株系耐盐性比对照提高两个级别.     

转基因棉花筛选中抗生素浓度的选择研究

蚜虫是棉花的主要害虫之一,在甘肃等西北内陆棉区普遍发生,严重影响皮棉的产量和质量,造成巨大的经济损失。通过生物技术把抗蚜基因导入棉花培育抗蚜虫棉花新品种,是综合治理棉花蚜虫危害的重要手段之一,其中一项主要的工作就是进行转基因植株的筛选鉴定。李燕娥等人采用组织培养技术,在有卡那霉素的培养基上对转基因棉苗进行培养;祝建波等人直接在田间对己进行基因转化或转育的棉花叶片进行卡那霉素抗性筛选,都取得了较为肯定的效果。胡丽华等人报道大田筛选所使用的卡那霉素的适宜浓度为4000mg.L-1。但是研究地域不同,结果也不尽一致。为…     

赤霉素对棉花叶片衰老相关基因表达的影响

 摘要：以中棉所10号未衰老和衰老的棉花叶片为材料,构建数字化表达谱文库,通过比较2个表达谱数据发现：赤霉素合成的关键基因GA3ox、GA20ox,乙烯合成的关键基因ACS6和促进叶片衰老基因NAP、SAG18均显著上调表达,利用荧光定量技术证明了这几个基因的表达谱数据结果可靠。用浓度30 μg·μL^-1和100 μg·μL^-1的赤霉素处理棉苗,通过荧光定量技术分析ACS6、NAP和SAG18在不同浓度赤霉素处理下和对照中的表达变化,结果表明：用不同浓度的赤霉素处理棉花可以抑制NAP、SAG18的表达,但是在处理6 h后却促进了乙烯合成基因ACS6的表达,初步推断赤霉素可能通过与乙烯的协同作用调控叶片的衰老。本试验结果将为进一步研究赤霉素对叶片衰老的作用机理奠定基础。     

农杆菌介导短柄草遗传转化体系的建立

为了探索短柄草的遗传转化体系,以二倍体短柄草ABR 6为受体材料,通过对诱导培养基类型、潮霉素筛选浓度和根癌农杆菌侵染浓度等参数的优化,建立了农杆菌介导短柄草遗传转化体系。结果表明,来源于未成熟胚的胚性愈伤组织在LS培养基上诱导率最高,达76.27%,最佳Hpt筛选浓度为40 mg·L^-1,最佳农杆菌侵染浓度为OD₆₀₀=0.6,在此条件下ABR 6的转化效率可达5%;通过PCR检测12株抗性植株,发现7株能扩增出Hpt基因（845 bp）条带;通过荧光显微镜观察转基因植株叶片,发现绿色荧光蛋白的表达,进一步证实了转基因植株的可靠性。     

子叶期卡那霉素快速鉴定转基因棉花

如何高效快速鉴定外源基因的转化 ,一直是热门的探索主题。特别是对于棉花 ,随着花粉管通道法的广泛应用 ,大批量“注射”种子更需要早期、快速、高效鉴别筛选。卡那霉素抗性是目前农杆菌介导外源基因最为广泛的筛选标记 ,但是在棉花花粉管通道法导入外源基因的检测方面 ,应用不多。含有对卡那霉素抗性基因的转基因棉花 ,应该在个体生长发育的各个时期表现出对卡那霉素的抗性 ,如果在幼苗期 ,特别是在子叶平展期完成转基因抗性的鉴定 ,则不失为一种比较理想的方法。为此 ,设计了一系列实验 ,探索成功子叶期采用卡那霉素对转基因棉花早期快速…