4种蛙皮肤活性肽的提取及生物活性比较

利用80%甲醇和乙醚刺激方法,分别提取了4种两栖类动物皮肤粗提物和分泌物,并进行了生物学活性的测定.结果表明,4种蛙皮肤粗提物具有广谱抗菌活性,其中中国林蛙有轻微的溶血性,牛蛙与美国青蛙粗提物具有胰蛋白酶抑制剂活性;而4种蛙皮肤粗提物均无胰蛋白酶活性,牛蛙、美国青蛙与东北林蛙具有很强的凝集素活性.利用MTT法检测到4种蛙皮粗提物具有抗肿瘤细胞与抗病毒活性.     

猪源肺炎克雷伯菌的分离与鉴定

从9只病死猪肺、肝脏中分离到4株革兰氏阴性杆菌,并对分离菌株进行形态学、培养特性、生化特性和分子生物学的鉴定,确定分离的菌株为肺炎克雷伯菌肺炎亚种。根据GeneBank上肺炎克雷伯菌16S rRNA可变区序列设计1对引物,4株细菌基因组DNA均可扩增到1段大小为127 bp特异性片段,经测序与已知肺炎克雷伯菌相应序列的同源性为100%,鉴定4株细菌均为猪源肺炎克雷伯菌。动物毒性试验证明其对小鼠有较强的致病性。     

玉米自交系苗期冷胁迫miRNA表达谱研究

以冷敏感自交系B73和耐冷自交系W9816为材料,分析供试材料在冷胁迫条件下的miRNA表达谱。冷处理后,有10种miRNA上调表达,包括miR156、miR166b/c/d、miR171d/e、miR398a/b、miR399e和miR408等;有21个miRNA下调表达,包括miR159a、miR166h、miR167a/b/c/d/h/i、miR319b/d、miR393a/c和miR399a/b/c/h等。对部分miRNA的荧光定量检测与测序结果基本一致。基于生物信息学的预测,差异表达的miRNA共有84个靶基因,GO分析表明,这些靶基因参与了基因转录和能量代谢过程,并响应胁迫刺激。结果表明,冷处理差异表达miRNA及其靶基因在玉米冷胁迫响应中具有重要的生理作用。     

中国鲎(Tachypleus tridentatus)基因工程抗菌肽的制备及其抗菌活性

从中国鲎血细胞RT-PCR扩增抗菌肽tachyplesins基因,经改造构建原核和真核表达载体pET-KRN、pPIC9-KRY,并分别在大肠杆菌DE3和毕赤酵母GSll5中诱导表达.用Tris-Tricine SDS-PAGE检测并进一步电洗脱纯化表达产物,经体外生物活性测定表明,表达产物KRN对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌的抑菌环为25、22、25、16mm;MIC值为3.57、7.14、3.57、14.28mg/L.表达产物KRY对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、伤寒沙门菌和李氏杆菌的抑菌环为26、22、25、18、16mm;MIC值为1.57、3.14、1.57、6.28、6.28mg/L,对水霉的抑菌效果尤其显著,抑菌环达35mm.     

牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、测序及其表达

利用RT—PCR的方法从牛蛙皮肤组织中克隆到大小为270bp的片段RCABP，将其克隆到pGEM—T载体，测序获得1个新的碱基序列。将此基因克隆到原核表达载体pQE一80L，获得融合表达质粒pQE一80L／DHFR／ABP，在1％IPTG诱导下进行表达。SDS—PAGE检测表明，重组蛙皮抗菌肽蛋白的表达量占菌体总蛋白的24％，以包涵体形式存在。体外抑菌试验表明，所构建的质粒能在大肠杆菌中表达具有体外抑菌活性的蛙皮抗菌肽，该融合蛋白具有良好的应用前景。     

应用基因芯片检测动物性食品中主要致病菌

依据16SrDNA、23SrDNA上的恒定区和可变区设计7种致病菌的通用引物和特异性寡核苷酸探针，并对探针5’端进行氨基化修饰进行基因芯片共价结合，然后优化杂交反应液、芯片点样及后处理程序，研制出一种可同时检测动物性食品中7种主要致病菌的基因芯片。结果表明，7种致病菌的基因芯片杂交检测灵敏度可达10^2cfu／g，与经典传统检测方法及分子生物学、免疫学方法相比该方法特异性强，准确率高，可同时检测动物性食品中7种致病菌。     

一个小麦-大麦2H代换易位系的鉴定与解析

本研究以普通小麦品种‘中国春’染色体组DNA为封阻,用生物素(biotin-16-d UTP)标记的大麦染色体组DNA作为探针,通过基因组原位杂交法解析了来自杂交组合CS×(CS+Betzes 2H)杂种后代X99-13的遗传组成,此材料含有42条染色体,其中1条大麦染色体,2条小麦-大麦易位染色体和39条小麦染色体,鉴定为小麦-大麦代换易位系。以小麦第二部分同源群短臂探针psr131进行RFLP分析,结果表明此代换易位系是涉及小麦染色体2B和大麦染色体2H的代换易位。为进一步选育小麦-大麦2H纯合易位系及利用其上的α-淀粉酶抑制蛋白基因打下了坚实的物质基础。     

东北地区农田主要杂草种类及其地理分布

1998－1999年作者对东北地区农田杂草的种类及其地理分布进行了调查。调查的29种农田杂草隶属于禾本科、苋科、藜科、鸭跖草科、菊科、旋花科、蓼科、雨久花科、木贼科、泽泻科、大戟科、锦葵科、唇形科、十字花科等14个科，描述了它们的生境和地理分布。     

试1243单交种干物质积累与分配规律,子粒灌浆速率及子粒品质与产量 …

玉米单交种“试１２４３”是适合黑龙江第一积温带进行间作用、密植的优质杂交种，是该类型区比较典型的代表品种。为了探索该区玉米品种的高产生理机制、子粒品质与产量的关系，我们以该品种为试材，以本区广泛种植的“四单１９”和“本玉９”为对照，进行了对比试验，试验在东北农业大学农学院试验站进行。种植条件为：纯１８０ｋｇ／ｈｍ＾２，Ｐ２Ｏ５ ９０ｋｇ／ｋｍ＾２，Ｋ２Ｏ１８０ｋｇ／ｈｍ＾２。测定的生理指标有：叶面     

牛蛙皮肤抗菌肽Ranalexin 基因的原核表达及其抑菌活性

    为了验证重组抗菌肽Ranalexin的抑菌活性,提取牛蛙皮肤组织总RNA,经RT-PCR 扩增抗菌肽基因ranalexin,克隆测序后,将该基因插入pGEX-3X融合表达载体,进行原核表达,通过改变IPTG剂量、培养液pH值、诱导表达温度和诱导时间优化表达条件,并采用谷胱甘肽氧化/还原系统对重组蛋白进行复性,用琼脂扩散法测定其体外抑菌活性.结果显示,扩增获得的牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 大小为201 bp,其序列与GenBank公布序列同源性达99.57%;正确构建了pGEX-3X-Ranalexin表达载体,最佳表达条件为IPTG终浓度1.0 mmol·L-1、诱导时间5～6 h;表达产物的分子质量约为34 kDa,并以包涵体的形式表达,经复性纯化后该重组蛋白对金黄色葡萄球菌具有明显的体外抑菌活性.说明牛蛙皮肤抗菌肽基因ranalexin 的原核表达载体构建成功,并获得了具有抑菌活性的重组抗菌肽GST-Ranalexin.