草木樨单细胞培养再生植株

研究了建立草木樨优良悬浮系和单细胞培养再生植株的技术和适宜条件。由子叶和胚轴诱导的愈伤组织转入分化培养基中分化，取已分化出芽的愈伤组织和未分化的愈伤组织建立悬浮系，再由悬浮系分离出单细胞，单细胞经液体浅层培养得到了再生植株。试验结果表明，胚轴诱导的愈伤组织更适合于建立悬浮系和进行单细胞培养。在建立悬浮系过程中，每５天换一次新鲜培养基比较合适。由已分化出芽的愈伤组织建立的悬浮系分离的单细胞有较高的植     

黄花苜蓿愈伤组织诱导与植株再生

以黄花苜蓿下胚轴、子叶为材料,在MS+2,4—D0.5～2mg/L以及MS+2,4—Dlmg/L+6BA0.2～1.0mg/L的培养基上可诱导形成愈伤组织;将它们分别传入MS+2,4—D1mg/L或MS+2,4—D0.2mg/L+6BA0.5mg/L的培养基中3～6个月,可分化出芽或类胚体;转入无激素的1/2MS培养基后,可生根并发育为完整再生植株。     

草木樨状黄芪单细胞培养再生植株

对草木樨状黄芪茎段愈伤组织，单细胞采取振荡悬浮和静止浅层培养的结果表明，振荡培养优于静止浅层培养。振荡培养条件下单细胞２－３天进行第一次分裂，１０天左右形成小细胞团，进而发育为胚状体或愈组织。３０天左右小愈伤组织直径达１－２ｍｍ，愈伤组织和胚状体再生频率为８８块／ｍｌ（０．２％），是静止培养的３．８倍。经继续振荡培养，小愈伤组织和胚状体即可分化或萌发出大量幼苗。小愈伤组织经固体培养基增殖培养后，转     

多年生黑麦草高频再生体系的建立及优化

从外植体预处理方式、基本培养基、激素浓度等方面着手,对多年生黑麦草愈伤组织诱导、继代、不定芽分化及再生过程中的影响因素进行了研究,提高了再生频率。结果如下：切取胚端半粒种子,经75%乙醇处理1min,0.1%HgCl处理15min,在经无菌水清洗4～6次后接种方式较好;愈伤组织诱导培养基以MS＋2,4—D 8.0 mg/L（或另添加甘露醇25 g/L）为佳;愈伤组织接种于MS＋2,4—D 8.0mg/L＋甘露醇25 g/L上进行1～2次继代后于NB＋6—BA2.0 mg/L上进行分化;不定芽转接至MS＋6—BA2.0 mg/L上进行扩繁或于1/2MS＋NAA0.5mg/L＋IAA0.5mg/L上进行生根。     

结缕草‘Zenith’离体培养植株再生体系优化研究

以结缕草Zoysia japonica栽培品种‘Zenith’的成熟种子为外植体,通过调整2,4 D浓度和凝固剂种类及其浓度,进行结缕草离体培养植株再生体系优化的研究。结果表明：愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2,4 D 4.0 mg/L,愈伤组织诱导率为69.97%,其中胚性愈伤组织诱导率达28.78%。胚性愈伤组织包括2种类型：淡黄色、湿润的小颗粒聚集状愈伤组织(27.36%)和黄色、干燥、颗粒状愈伤组织(1.42%)。以结冷胶为凝固剂,有利于提高愈伤组织的诱导率。提高愈伤组织继代培养基中的琼脂浓度,有利于保持胚性愈伤组织的植株再生能力。适宜的愈伤组织分化培养基为MS+KT 4.0 mg/L或MS+6 BA 3.0 mg/L,绿苗分化率达90%以上。适宜的生根培养基为1/2MS ,生根率100%。     

草麻黄的组织培养及植株再生

将草麻黄幼苗节间幼茎部分作外植体,培养在附加KT 0.054mg/l+2,4-D 1.11mg/l的MS培养基中,可成功诱导出愈伤组织,愈伤组织分化出芽;同样的外植体培养在附加BA3mg/l+IAA0.2mg/l的MS培养基中,诱导出大量不定芽;不同途径得到的芽转移到MS附加6-BA 0.056mg/l+1.11mg/l2,4-D的培养基后,可分化出不定根,从而形成完整植株.     

毛花猕猴桃茎段离体培养技术研究

通过对毛花猕猴桃茎段进行离体培养试验，得出了毛花猕猴桃茎段的最佳离体培养方案：选用当年生的茎段切割成块后接入培养基MS ZT3.0mg/L上，诱导出愈伤组织，进而愈伤组织分化出芽，切割这些芽继续转入该培养基配方扩大培养，然后将增殖的大量芽转入培养基1/2MS IBA1.2mg/L上诱导生根，待产生良好的根系即可出瓶移栽，得到毛花猕猴桃苗木。     

黑麦草幼穗离体培养及植株再生

以多年生黑麦草和一年生黑麦草的适宜发育期(1～3 mm)的幼穗为外植体,在附加适宜浓度2,4-D (1 mg/L)的改良MS培养基上诱导愈伤组织发生,诱导率可达95%.一些愈伤组织在诱导培养基上直接发生不定芽,另一些愈伤组织能多次继代培养并保持高分化能力.后类愈伤组织在转入含有0～0.5 mg/L 6-BA和0～0.5 mg/L 2,4-D的分化培养基后产生大量丛生芽,部分小芽发育成苗.幼穗发育时期、培养基的激素组成明显影响愈伤组织的继代培养和植株再生能力,基因型对愈伤组织诱导率和植株再生能力也有影响.该体系适用于黑麦草基因工程和细胞工程研究,且具有实验周期短、基因型制约小、植株再生率高等优点.     

马蹄金叶片离体培养及植株再生的研究

在不同植物生长调节剂组合、不同培养基条件下，探讨了马蹄金叶片离体培养的方法和影响因素。结果表明，含不同植物生长调节剂组合的培养基对愈伤组织的诱导频率无显著影响，出愈率均达90％-100％；以MS或B5培养基作诱导愈伤组织的基本培养基效果较好；将叶片接种到MS 2mg／L6—BA的诱导培养基中诱导愈伤组织，再用B5 1．5mg／L6-BA 0．5mg／L ZT 0．2mg／Lα—NAA作分化培养基出苗效果最佳，愈伤组织分化频率高达20％。     

中华结缕草组织培养与植株再生

以中华结缕草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的发生进行植株再生。结果表明,中华结缕草成熟胚在MS基本培养基附加6~7 mg/L 2,4-D和0.05 mg/L 6-BA的出愈能力很强,但初生愈伤组织呈无定型棉絮状,不能再生成株。采用不同的糖类和固化剂以及一定比例的生长素与细胞分裂素的方法,对初生愈伤组织进行继代培养,诱导出致密颗粒状的、具有高度再生能力的胚性愈伤组织,此类胚性愈伤组织在最佳分化培养基MS 1.0mg/L NAA 1.0 mg/L KT 3.00 mg/L 6-BA上有较高再生频率,生根培养基采用1/2 MS。     

紫花苜蓿离体培养植株再生及其RAPD分析

对苜蓿(品种农宝)的下胚轴外植体进行离体培养建立了再生体系。结果表明,子叶和下胚轴切段在附加0.2~1.0 mg/L IAA和2.0 mg/L 6-BA或2.0 mg/L KT的MS培养基上培养,均能诱导出愈伤组织,但子叶所诱导的愈伤组织不具有分化能力。下胚轴切段培养5~7 d即可诱导出愈伤组织,并分化出绿色芽点,在原培养基上进而可分化出大量的丛生芽。在含0.2 mg/L IAA和2.0 mg/L 6-BA的MS培养基上,其分化率最高可达到42.6%。这些芽在含0.2 mg/L IAA和0.5 mg/L KT的MS培养基上长成2 cm左右的幼苗时,将其切下转至1/2 MS0培养基上,培养10 d即可诱导生根,得到再生植株。随机选取实生苗和下胚轴愈伤组织再生苗进行RAPD分析,结果表明,所用的50个随机引物中有5个扩增出差异性条带,甚至再生植株之间也有1条引物扩增的条带有差异,这说明经组织培养所得到的再生植株与实生苗相比,在DNA水平上发生了一定程度变异,并且这种变异也存在于再生植株之间。     

黑麦冬牧70幼穗和未成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

将黑麦冬牧70幼穗切段和未成熟胚接种在附加不同激素浓度的改良MS培养基上培养,获得了能多次继代培养的愈伤组织,后者在分化培养基上再生植株.2,4-D和6-BA浓度明显影响愈伤组织质量和诱导率,幼嫩幼穗和较小的未成熟胚愈伤组织诱导率高.幼穗切段在改良MS 1.0 mg/L 2,4-D 200 mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量较好;未成熟胚在改良MS 2.0 mg/L 2,4-D 0.1 mg/L 6-BA 200 mg/L谷氨酰胺的培养基上愈伤组织诱导率最高,质量最好.继代培养后的愈伤组织转移到附加200 mg/L谷氨酰胺、1.0 mg/L 2,4-D和0.1 mg/L TDZ的培养基上可分化出大量小芽.该体系可用于黑麦冬牧70遗传转化和细胞工程育种研究.     

草地早熟禾新格莱德胚性愈伤组织原生质体培养及植株再生的研究

以草地早熟禾品种——新格莱德成熟种子为供试材料,在含3.0mg/L2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、0.5mg/L6-苄氨基嘌呤(6-BA)的MB₅培养基中进行胚性愈伤组织诱导的培养。并从生长了7～9个月的胚性愈伤组织中分离出原生质体,将该原生质体置于KM₈P培养基(含3.0mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、100mg/L水解酪蛋白、100mg/L水解乳蛋白、1%蔗糖、0.4mol/L甘露醇)中进行了液体浅层培养。结果表明,新格莱德原生质体在上述KM₈P培养基中培养3d后出现第1次细胞分裂,2～3周后形成小细胞团,此时添加低渗培养液2～3次,小细胞团持续分裂并形成愈伤组织。当愈伤组织块长至3～5mm时,转入固体培养基MS+3.0mg/L2,4-D+0.5mg/L6-BA和MS+0.5mg/L萘乙酸(NAA)+5.0mg/L6-BA上进行培养,使其细胞增殖和分化,且逐步形成完整的植株。     

兰州百合鳞片组织培养研究

以兰州百合的内层鳞片为外殖体,以MS为基本培养基并添加不同配比生长调节剂,进行组织培养研究。结果表明,以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基对初代培养形成不定芽最佳,低温有助于外殖体分化;不定芽增殖最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;1/2 MS+0.2 mg/L NAA+蔗糖60 g/L适宜苗的生根培养,生根率达100%,且结鳞茎率达73.4%。     

Production of plantlets from tissue cultures of Lotononis,a southern African veld legume1

Abstract

A simple procedure is described for the production of large numbers of rooted plantlets from callus cultures of Lotononis bainesii Baker. Highest frequency of shoots was obtained from somatic embryos formed in initiation cultures on Murashige & Skoog medium plus 1 mg/l benzylaminopurine plus 1 mg/l naphthaleneacetic acid. The somatic embryos from these initiation cultures were transferred to media containing 0,5,10 or 20 mg/l isopentenyladenine or 0,1 or 5,0 mg/l kinetin (1,8 to 3,1 shoots per culture) where they re‐callused and produced shoots. All shoots obtained from the cultures on media containing 0,5, 10 or 20 mg/l isopentenyladenine or 0,1 mg/l kinetin were rooted; 35 % of shoots from the cultures on medium containing 5,0 mg/l kinetin were rooted. Rooting of unrooted shoots from other treatments was readily induced on medium containing 0,1 mg/l indoleaceticacid.     

利用桑树特异种质资源的冬芽组织培养再生植株的试验

以不同类型的桑树特异种质资源的冬芽为材料,分别在含有不同种类生长调节剂及添加量的培养基中培养诱导桑树再生植株,考察桑树特异种质资源利用冬芽培养再生植株的可行性,筛选适宜的生长调节剂及其用量。结果表明:供试桑树种质资源的冬芽在不添加生长调节剂的培养基中外植体停止生长,添加生长激素TDZ能较好地诱导和促进愈伤组织的形成与生长,但会抑制生长芽的再生长,而添加细胞分裂素6-BA能促进冬芽的再生,且添加3.0 mg/L 6-BA的培养基中冬芽再生率显著高于添加1.0 mg/L 6-BA的培养基;8份桑树种质资源的冬芽在含3.0 mg/L 6-BA的改良培养基中培养,新疆药桑和小花叶皮桑的丛生芽诱导率最高,其冬芽的再生率均为66.7%,滇桑次之,再生率为55.5%,天目山桑和斯里兰卡的再生率分别为40.0%和25.0%;5份桑树种质资源的冬芽再生组培苗转移至生根培养基中培养1个月后,只有滇桑和新疆药桑分别诱导出再生根系(诱导率为分别为20.0%、14.3%)后移栽成活。研究结果初步显示,离体组织再生培养是保存和利用天然22倍体新疆药桑、渐危种滇桑等珍稀桑树种质资源的有效途径之一。     

桑下胚轴愈伤组织诱导及分化过程中内源激素的变化

以自然受精的桑种子的下胚轴为材料进行组织培养 ,MS +NAA( 1 0mg) +6 BA( 0 .5mg)为培养基诱导的愈伤组织生长正常 ,具有不定芽的分化能力。MS +2 ,4 D( 1 .0mg/L) +6 BA( 0 .5mg/L)诱导的愈伤组织没有分化能力 ,结构疏松并呈现褐变现象。愈伤组织分化培养与继代培养中 ,内源激素测定发现 :培养前期 ,前者的ABA、IAA和GA的含量均较后者保持一个较高的水平 ,而培养后期 ,后者的ABA有较大的上升 ,IAA和GA的含量迅速下降     

农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Peen A-1 转化和表达的研究

 以匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转入匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１ 胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转化ＰｅｎｎＡ-１的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在２．０ｍｇ／Ｌ２,４ Ｄ＋０．１ ｍｇ／Ｌ６-ＢＡ的ＭＳ培养基上ＰｅｎｎＡ-１愈伤组织诱导率最高,可达３６％,且质量最好。愈伤组织在ＭＳＯ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ 上分化率最高,达４２．５％;浓度为３００ｍｇ／Ｌ 的头孢霉素（Ｃｅｆ）可抑制农杆菌ＬＢＡ４４０４的生长;ＰｅｎｎＡ-１胚性愈伤组织经携有ｐＢＩ１２１-Ｌｙｚ-ＧＦＰ的农杆菌ＬＢＡ４４０４ （ＯＤ６００值０．３～０．５）侵染１０～１５ｍｉｎ,共培养３ｄ后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达１２．５％,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为２７．５％;转化植株有较强的荧光表达量,并经ＰＣＲ 检测,获得的２株匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１转化植株中均扩增出７５０ｂｐ的目标基因片断。     

In vitro culture conditions using chemically defined media for in vitro matured and intracytoplasmically inseminated porcine oocytes

The present study investigated in vitro culture methods [droplet and Well of the Well (WOW)] using semi-defined and defined media [modified porcine zygote medium (mPZM)] and the additional effects of insulin on in vitro matured and intracytoplasmically inseminated porcine oocytes. In Experiment 1, in vitro matured and intracytoplasmically inseminated porcine oocytes were cultured for 6 days in the following four groups: 1) mPZM-3 (containing bovine serum albumin) + droplet (30 mul), 2) mPZM-3 + WOW, 3) mPZM-4 (containing polyvinyl alcohol) + droplet, and 4) mPZM-4+ WOW. The culture media (mPZM-3 and mPZM-4) and methods (droplet and WOW) did not significantly affect the cleavage rate, but the blastocyst rate of the oocytes cultured in mPZM-3 was significantly (P<0.01) higher than that of mPZM-4 (20.1 and 9.4%, respectively). The blastocyst rates as percentages of the cleaved oocytes (51.8 and 16.9%) and the hatched blastocyst rate as percentages of the number of blastocysts (12.3 and 2.2%) were also significantly (P<0.01) higher in mPZM-3 compared with those in mPZM-4. There was significant interaction (P<0.05) between the two main factors; the effects of the culture media and methods on the rate of hatched blasyocysts as percentages of the blastocysts produced and, the hatched blastocyst rate (20.3%) as percentages of the number of blastocysts produced in mPZM-3 were significantly (P<0.05) higher than in the other groups. In Experiment 2, the additional effects of insulin (100 ng/ml) in mPZM-3 and mPZM-4 media was investigated in the WOW culture system. Insulin addition did not improve cleavage, blastocyst formation, or the number of cells in blastocysts. However, as in Experiment 1, mPZM-3 resulted in a significantly higher blastocyst rate as percentages of the cleaved oocytes than mPZM-4 (33.9 and 18.4%). These results indicate that a chemically defined medium (mPZM-4) needs to be improved to provide more suitable culture conditions for in vitro development of in vitro matured and intracytoplasmically inseminated porcine oocytes. However, the WOW system may be a useful IVC method for blastocyst development of in vitro matured porcine oocytes following ICSI when a semi-defined medium (mPZM-3) is used.