铁皮石斛与钩状石斛杂交及种子无菌播种快繁研究

以铁皮石斛和钩状石斛为研究对象,通过人工辅助杂交获得杂交种子,诱导种子离体萌发,开展无菌播种技术研究.结果表明,铁皮石斛与钩状石斛杂交容易成功,杂交坐果率可达到80％;适宜的种子萌发培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,培养30 d时的萌发率为89.7％;培养基MS+6-BA 1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+香蕉100 g/L+ AC 1.0 mg/L对原球茎的增殖最好;培养基MS+ 6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.1mg/L+马铃薯200 g/L+ AC 1.0 g/L对原球茎的分化最好;壮苗生根培养基配方为1/2 MS+ NAA 0.6 mg/L+香蕉100 g/L+AC 1.0 g/L,植株生长健壮,生根率100％,移栽成活率达95％以上.     

半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化条件

为获得同步化的人工种胚,以半夏疏松愈伤组织为试验材料,采用悬浮培养的方法,探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用,为半夏人工种子制作提供同步化种胚。结果表明:以MS为基本培养基,添加1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行悬浮培养,温度为8℃,处理12h,恢复36h,同步化效果最好,细胞分裂指数为13.86%;咖啡因浓度为2.00 mmol/L,处理2 h,恢复48 h,效果较好,细胞分裂指数为9.42%;蔗糖浓度为40 g/L,处理5 d,恢复4 d,效果一般,细胞分裂指数为5.33%。分别先后继代3次于MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH进行分化培养。温度处理组微细胞团为42.33个,种胚分化率为71.11%;咖啡因处理组微细胞团为34.33个,种胚分化率为55.56%;蔗糖处理组微细胞团为40个,种胚分化率为57.78%。因此,半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为:MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH,8℃处理12 h,恢复36 h,再转接进膨大及分化培养基继续培养。本研究为半夏人工种子生产提供技术参考。     

辣椒6421子叶外植体离体培养

以辣椒自交系6421子叶外植体为实验材料,通过筛选6-BA浸泡预处理浓度、优化不定芽诱导培养基、芽伸长培养基和生根培养基配方来提高辣椒子叶离体培养效率。结果表明:6-BA浸泡预处理子叶外植体最佳浓度为50 mg/L,最佳不定芽诱导培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA,外植体浸泡处理1 min后接种至该培养基中,培养15 d后不定芽诱导率达93.21%;最佳不定芽伸长培养基为MS+6.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA,培养20 d后芽伸长率可达23.21%;最佳生根培养基为1/2 MS+0.25 mg/L IAA+0.25 mg/L IBA,培养30 d后生根率可达90.12%。     

影响甜樱桃离体小叶片再生的关键因子研究

适当提高蔗糖浓度能明显改善甜樱桃试管苗的状态，在F14培养基蔗糖浓度由原来2%增加到6%，增殖倍数由1~2增加到25~30，叶片由黄绿无光变为浓绿油亮，保持天数由原来的15d增加到70d。经过4步骤程序培养可以获得小叶片再生，即：①将普通继代试管苗接入F14（附加6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+GA30.2mg/L+蔗糖6%+琼脂7.0g/L，pH5.8）继代培养30d，获得小叶型高分化试管苗。②剪取并且横切2~3刀后将小叶片，先在0.1%VC无菌水中浸泡1到30min，然后接入MS或F14或WPM（附加6-BA2mg/L+2，4-D2mg/L+蔗糖4%+琼脂7.0g/L，pH5.8）进行光照培养3~4d，获得剪切口组织脱分化的小叶片。③转接1/2大量元素的WPM培养基（附加6-BA2mg/L+IAA2mg/L+蔗糖4%+琼脂7.0g/L，pH5.8）及在环境控制（15h/24h日光周期变化,光照2000lux，温度20℃；黑暗，温度15℃）下培养20~30d，得到诱导出红色愈伤组织（含有花色苷）的小叶片。④转接F14培养基（附加6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+GA32mg/L+蔗糖6%+琼脂7.0g/L，pH5.8）培养20d后得到由红色愈伤组织中萌发出不定芽，同时颜色变淡。小叶片再生不定芽率可达91%。     

CHX-GFP融合基因的构建及在胡萝卜愈伤组织中瞬时表达

为构建CHX-GFP融合基因并将其在胡萝卜愈伤组织中瞬时表达。采用融合PCR方法,将属于CAP2家族的Na+/H+反向转运蛋白基因CHX和GFP基因相融合,利用中间载体,采用DNA重组技术将CHX-GFP融合基因插入到p1301植物表达载体中,采用冻融法将重组质粒导入到农杆菌中,遗传转化时所用侵染液为1/2MS+AS 100μmol/L,共培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+琼脂6 g/L+蔗糖30 g/L+葡萄糖10 g/L+AS 50μmol/L,共培养时间为4 d。成功构建了p1301-35S-CHX-GFP-Nos植物表达载体,CHX-GFP融合基因在胡萝卜愈伤组织中得到瞬时表达,表达效率为75%。采用融合PCR获得CHX-GFP融合基因的方法比较简单,无须知道DNA序列的酶切位点,省时省力,CHX-GFP融合基因及其表达载体的成功构建将为进一步探查CHX亚细胞定位及CHX基因的功能奠定了基础。     

植物生长调节剂对白杜试管苗生长的影响

通过组织培养的方法研究植物生长调节剂对白杜试管苗生长的影响。结果表明:在进行不同浓度植物生长调节剂试验时,以MS为基本培养基,附加BA0.5 mg/L、NAA0.05 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L,此时试管苗的增殖效果最佳,培养27 d,有效嫩茎数为3.433;白杜试管苗生根培养基以1/2 MS+NAA1.5 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂7 g/L为好,培养25 d生根率为86%。     

外源Ca2+对土人参（Talinum paniculatum）种子萌发和幼苗生长的影响

将无菌土人参种子接种在含0.001、0.01、0.1、1.0、10、30 mmol/L Ca2+的MS固体培养基中,光照恒温培养,测定种子发芽率、发芽时间,以及幼苗形态、生理指标。结果表明,当培养基Ca2+浓度为0.1 mmol/L时,种子萌发时间最短,平均叶片数最多,平均株高最高,分别为9 d、11.82片和4.28 cm;当培养基Ca2+浓度为1.0 mmol/L时,种子发芽率、Chl a含量、Chl b含量最高,依次为74%、1.00 mg/g和0.14 mg/g;当培养基Ca2+浓度为30 mmol/L时,水势急剧下降;随着培养基中Ca2+浓度的增加,土人参根系活力呈曾加趋势,培养基中的Ca2+浓度为1.0 mmol/L时,根系活力为1.67 mg/(g.h)。土人参生长的最佳钙离子浓度范围为0.01～1.0 mmol/L。     

铁皮石斛快繁优化及不同时期生物碱积累的研究

本研究以铁皮石斛无菌苗茎段为实验材料优化茎段培养的最适培养基,并对其愈伤组织形成后的10 d、15 d、20 d、25 d、30 d、35 d、40 d等不同时期的生物碱的含量进行测定。结果表明,以MS为基本培养基,原球茎诱导的最佳激素组合为NAA 1.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,平均诱导率为95%;原球茎增殖的最佳激素组合为6-BA 1 mg/L+NAA 1 mg/L,原球茎分化的最佳激素组合为6-BA 5 mg/L+NAA 1 mg/L,平均分化率可达80%;生根壮苗的最佳组合为:IBA 1.5 mg/L+香蕉泥100 g/L+活性炭0.1%,其生根率为100%;愈伤组织形成后30 d左右时其总生物碱含量最高。     

艳山姜种子组织培养技术

研究艳山姜组织培养,为其种苗快速繁育和应用提供技术支持。以种子作为外植体,通过比较种子处理方式,优化培养基的蔗糖浓度和植物激素以及组培苗的移栽基质,建立起艳山姜的组织培养技术。结果表明:破损处理有利于种子的萌发,发芽率可达到93.8%;培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L对丛芽生长影响显著,培养30 d的增殖系数达到4.93;培养基MS+NAA 0.8 mg/L+蔗糖30 g/L诱导生根最佳,生根率为100%,平均生根5.58条;组培苗移栽于椰糠和椰糠+表土+河沙的基质中,成活率达到100%。该种子组织培养技术适用于艳山姜种苗的规模化生产和应用。     

加工马铃薯Atlantic无标记基因遗传转化体系建立

本研究以加工型专用品种Atlantic为实验材料,分别对影响其遗传转化的外植体、激素、预培养、菌液浓度、侵染及共培养等因素进行优化,建立了农杆菌介导的无标记基因高效转化体系,初步获得了转基因植株。研究结果表明,叶片和茎段均可作为马铃薯品种Atlantic的受体材料,转化过程中以预培养2~3 d后用OD600=0.5的菌液侵染10~15 min,在MSGⅠ(添加有5 mg/L NAA和1.0 mg/L 6-BA)培养基上共培养2~3d后,转入含有250 mg/L的MSGⅡ(0.02 mg/L GA3和2.0 g/L ZT)的培养基上诱导生芽的遗传转化效率最高,其愈伤诱导率可达83.34%,芽分化率可达48.3%。通过该转化体系将抗马铃薯PVY病毒的基因导入马铃薯,获得无标记基因的转化植株,经PCR检测,初步确定已经将外源目的基因导入了马铃薯基因组中。     

生长调节剂及环割（扎）对‘桂柚1号’成花与坐果的影响

针对沙田柚经常出现花少、坐果率低等问题,试验总结了增加花量、提高坐果率的有效方法。本试验以自花结果沙田柚新品种‘桂柚1号’为试材,设6个处理和1个对照进行促花试验,处理1为9月下旬、处理2为10月上旬分别喷2次25%多效唑悬浮剂500倍液、处理3为9月下旬环割、处理4为9月下旬兑水25 kg淋25%多效唑悬浮剂溶液10 g/株、处理5为9月下旬喷25%多效唑悬浮剂500倍液+环割、处理6为9月下旬环扎、CK为清水对照;在第1次生理落果期间,分别用80% 2,4-D可湿性粉剂10 mg/L溶液喷全树或喷果实、用80% 2,4-D可湿性粉剂12 mg/L溶液喷果和清水对照4个处理进行保果试验。结果表明,不同促花处理的结果母枝和花的数量均极显著增加,其中处理1的结果母枝111.00~168.67条、花量866.33~1877.00朵,处理4的结果母枝98.67~137.0条,花量723.00~1269.00朵,这2个处理的效果显著且稳定;在天气正常时,各促花处理与对照的坐果率差异不显著,但在持续阴雨天气时,出现坐果率降低且花量越大坐果率越低的趋势。在第1次生理落果期间,全树或果实喷80% 2,4-D可湿性粉剂10 mg/L溶液,保果率分别为16.58%~17.09%、14.70%~16.06%,全树喷施80% 2,4-D可湿性粉剂12 mg/L溶液的保果率13.89%~14.36%,对照保果率仅7.10%~8.40%。在9月下旬开始喷或淋多效唑、环割主枝、喷多效唑+环割主枝、环扎主枝可极显著提高‘桂柚1号’结果母枝数和成花量;在第1次生理落果期间,全树或果实喷80% 2,4-D可湿性粉剂10 mg/L溶液或果实喷80% 2,4-D可湿性粉剂12 mg/L溶液均可极显著提高‘桂柚1号’的坐果率。     

拟青山海关杨高效遗传转化系统的建立

本实验以叶片为外植体,建立了拟青山海关杨的高频再生系统;在此基础上,利用GUS瞬时表达法研究了菌种、预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间和乙酰丁香酮（AS）浓度5个因素对拟青山海关杨叶片遗传转化的影响。结果表明,拟青山海关杨叶片最适不定芽诱导培养基为MS添加0.5mg/L的6-BA 和0.1mg/L的NAA,叶片再生频率为95%,平均不定芽数为10.07个;该杨树的高效遗传转化体系为：叶片省去预培养,菌种使用GV3101,侵染液OD600为 0.4～0.6,侵染10min,共培养培养基中添加乙酰丁香酮 200μmol/L,在此条件下,GUS荧光定量分析结果显示叶片的GUS活性达到最大值。     

利用柱头涂抹法进行西瓜T-DNA导入和分子标记研究

借鉴拟南芥蘸花进行外源DNA导入的方法,通过柱头涂抹进行西瓜T-DNA导入和分子标记研究。结果表明:品种ZXG01078坐瓜率最高,且有变异苗产生,是较为理想的介导品种;卡那霉素筛选处理西瓜种子的最佳浓度500～700mg/L,不同品种间有差异;卡那霉素筛选处理西瓜叶片的最佳部位为嫩叶或幼叶,最佳浓度4000～8000mg/L,不同品种间差异不明显。处理后代中无心苗和连体苗的稳定产生,说明外源基因已进入并干扰了其正常的生长发育过程。     

4种地被菊再生及遗传转化条件的比较

为建立地被菊‘神韵’、‘繁星粉’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’的离体再生体系,明确其遗传转化条件,为通过转基因技术培育地被菊新品种奠定基础,以叶片为外植体,研究了激素配比对4种地被菊再生芽诱导的影响;通过农杆菌介导比较了4种地被菊的遗传转化条件。研究结果表明,‘神韵’、‘繁星粉’、‘都市丽人’和‘粉玫瑰’可分别在含有NAA 1.0 mg/L+ BA 1.0 mg/L、NAA 0.3 mg/L+ BA 1.0 mg/L、NAA 1.5 mg/L+ BA 0.5 mg/L、NAA 0.5 mg/L+ BA 1.5 mg/L的MS培养基上获得最佳分化率;其叶片外植体的遗传转化条件为24 h预培养、OD600分别为0.4、0.5、0.3和0.4的农杆菌侵染10 min、共培养48 h、延迟培养2天、甘露糖筛选浓度为10 g/L、头孢霉素抑菌浓度为300 mg/L。部分抗性植株经PCR检测获得了目的条带,初步证明目的基因已经整合到4种地被菊的基因组中。     

‘三白’石榴再生体系的构建

为建立适用于遗传转化和育种研究的‘三白’石榴再生体系,以带芽茎段为外植体进行组织培养研究。结果表明,最佳初代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L+ PVP 2 g/L,成芽率达83.1%,成芽个数为4.9;最佳增殖培养基为B5+ BA 0.8 mg/L+ IBA 0.5 mg/L+ AgNO3 0.2 mg/L+ GA3 0.2 mg/L+椰汁100 ml/L+PVP 2 g/L,增殖系数达5.6;最佳生根培养基为B5+ IBA 1.0 mg/L+椰汁100 ml/L,生根率达95.6%,移栽成活率达87.3%,由此建立了‘三白’石榴的再生体系。     

番茄果实特异性启动子2A11的基因克隆及功能研究

采用巢式PCR技术从番茄基因组DNA克隆到长度1.3kp的果实特异性2A11启动子基因。序列分析表明,克隆到的基因序列2A11启动子转录起始位点上游的621bp处缺失了已报道的番茄2A11启动子基因（GenBank ID M87659,1993）序列中的“tatattgttaacttcttgttgaattaaagcaat”片段,其同源性为61%,登入GenBank,ID号为DQ453963;构建植物表达载体pCAMBIA2A11,用农杆菌介导侵染番茄果实,GUS基因瞬间表达结果表明,该2A11启动子基因具有驱动GUS基因在番茄果实中特异性表达的功能。研究结果表明成功地获得2A11果实特异性启动子基因,为下一步转基因番茄口服疫苗的研制奠定了一定的基础。     

采前氯化钙和水杨酸处理对蟠枣采后贮藏品质的影响

为探究采前处理对蟠枣果实采后贮藏品质的影响,以新疆主栽鲜食品种蟠枣为研究对象,分别于果实花期、幼果期、膨大期、着色期采用清水（CK）、10 g/L氯化钙（CaCl2）、100 mmol/L水杨酸（SA）和10 g/L CaCl2+100 mmol/L SA进行采前喷施处理,采收后置于常温货架贮藏,每天统计果实的转红率、转红指数、腐烂率和失重率,测定果实的可溶性固形物含量、硬度和色泽等指标。结果表明：采前喷施CaCl2、SA和CaCl2+SA均可一定程度上抑制蟠枣的转红和腐烂,使其保持较低的失重率,使果实维持较高的可溶性固形物含量和硬度,保持较好的色泽,其中,10 g/L CaCl2+100 mmol/L SA采前处理效果最佳,常温货架8 d时,果实的转红率和腐烂率分别较对照低23.34个百分点和36.66个百分点,失重率仅为1.68%,果实可溶性固形物含量维持在21.47%,硬度为9.45 kg/cm2,保持较好的商品性。综上,采前喷施10 g/L CaCl2+100 mmol/L SA能有效保持蟠枣采后贮藏品质。     

TDZ对橡胶树花药愈伤组织诱导和体细胞胚发生的影响

为了提高橡胶树优良品种的愈伤组织诱导和体细胞胚发生的频率,促进其花药植株再生体系的优化,以橡胶树品种‘云研73-477’、‘热垦525’和‘云研77-2’的花药为外植体,研究不同浓度的TDZ对愈伤组织诱导和细胞胚胎发生能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导实验中,MS+TDZ 0.2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+椰子水50 mL/L+蔗糖70 g/L效果最好,诱导率均达到最大,分别为98%、98.67%、28.6%,当TDZ浓度逐步升高时,其诱导率又有所下降。在体细胞胚诱导实验中,愈伤组织诱导阶段加入TDZ对体细胞胚的发生有抑制作用;将愈伤组织转移到不含TDZ的培养基中继代增殖后,体细胞胚的诱导率随继代次数的增加呈上升趋势;愈伤诱导阶段使用的TDZ浓度越低越利于体细胞胚的分化;在体胚诱导阶段以TDZ代替KT后,体细胞胚诱导率较低,且分化出的体胚为畸形胚。这表明TDZ虽然有利于愈伤组织的产生和生长,但不利于体细胞胚的发生。     

棉花遗传转化和植株再生的研究

利用农杆菌（ＧＵＳ基因（β－葡萄糖苷酸酶基因）为标记基因，ＮＰＴⅡ为选择基因）用共培法对棉花下胚轴切段直接转化，在０．１ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．１ｍｇ／ＬＫＴ的ＭＳ的培养基上共培４８ｈ，转移到加头孢霉素５００ｍｇ／Ｌ和５０～１００ｍｇ／Ｌ卡那霉素的上述培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织，７０～８０天计算愈伤组织的诱导频率，并有组织化学定位法检测ＧＵＳ基因的表达，统计转化频率，结果表明：平均出愈率为４０