实时定量PCR检测豌豆黄化苗中肌动蛋白异型体Ⅱ的表达

以18S rRNA为内参照基因,利用实时定量PCR方法检测了豌豆黄化苗在生长过程中肌动蛋白异型体ⅡPEAcⅡ的表达情况。结果表明:豌豆黄化苗中PEAcⅡ的表达量在检测的第1小时明显升高,约为起始表达量的2倍。随着培养时间延长,表达量下降,第12小时的表达量约为起始表达量的0.6倍。与光照培养下的正常苗相比,黄花苗中PEAcⅡ的表达量较高,在检测的第8小时,约为正常苗表达量的2.4倍。该试验建立的实时定量PCR方法可有效地用于豌豆肌动蛋白异型体基因表达的定量分析。     

杜梨干旱胁迫相关水通道蛋白基因的筛选与克隆

以杜梨实生苗为材料,采用15%PEG 6000进行模拟干旱处理,利用qRTPCR、同源重组、亚细胞定位等方法,研究了不同水通道蛋白基因在15%PEG 6000胁迫条件下表达水平的变化趋势,筛选了响应干旱胁迫相关的水通道蛋白基因,并对其进行克隆和分析,以期为梨抗旱基因筛选提供参考依据。结果表明:AQPs在杜梨的根、茎、叶中均有表达,且随着胁迫时间的延长,大部分AQPs在根系中的表达水平呈先上升后下降的趋势,其中PIP2;2基因在胁迫处理3h后,相对表达量最高;从杜梨根系中克隆获得PbPIP2;2,该基因包含一个完整的846bp的开放阅读框,编码281个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果表明,PbPIP2;2与其它近缘物种具有一致的保守功能域,其中与苹果MdPIP2;2、白梨PcPIP2;2相似度最高。洋葱表皮亚细胞定位发现PbPIP2;2基因定位在质膜上。     

外源亚精胺对干旱胁迫下甜瓜幼苗抗旱性影响的生理生化机制

以“甜脆王”甜瓜幼苗为试验材料，采用营养液培养法，研究20%PEG 6000渗透胁迫下1 mmol·L^-1亚精胺（Spd）对甜瓜幼苗抗旱的调控机制，以期为多胺在抗旱方面的研究提供参考依据。结果表明：1 mmol·L^-1 Spd能够提高20%PEG 6000胁迫下超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性，降低丙二醛含量，提高叶绿素、脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白质含量。表明外源Spd起到缓解干旱胁迫对甜瓜幼苗伤害的作用，增强甜瓜幼苗对干旱逆境的适应性。     

模拟干旱胁迫对八棱海棠根系生理生化指标的影响

以八棱海棠幼苗为试材,研究了不同浓度的PEG-6000模拟干旱胁迫对八棱海棠根系生理生化指标的影响。结果表明:不同程度干旱胁迫均使八棱海棠根系丙二醛(MDA)和游离脯氨酸(Pro)含量增多,过氧化物酶(POD)活性提高;过氧化氢酶(CAT)活性、可溶性蛋白质含量在干旱胁迫前期比对照均有不同程度的提高,随着胁迫时间的延长,CAT活性、可溶性蛋白质含量大幅度下降,且下降幅度为:20%PEG15%PEG10%PEG5%PEG;5%PEG、10%PEG、15%PEG胁迫CAT活性和可溶性蛋白含量虽下降,但仍高于对照水平;20%PEG胁迫使CAT活性、可溶性蛋白质含量低于对照水平,这说明干旱胁迫使植物体内正常的蛋白质合成受到抑制,根系可能已经失去了对干旱胁迫的适应性与可调控性,细胞内膜系统受到严重损伤;干旱逆境对膜系统的伤害是脂质过氧化作用增强的结果。     

聚乙二醇模拟水分胁迫对密花香薷种子萌发的影响

以密花香薷种子为试验材料,研究了不同浓度(5%、10%、15%)的聚乙二醇6000模拟干旱处理对密花香薷种子发芽和生理的影响。结果表明:经不同聚乙二醇6000浓度处理的密花香薷种子,其发芽率、发芽势及胚根的生长都受到了抑制,并随干旱胁迫程度的提高而增加;密花香薷种子萌芽的可溶性糖和脯氨酸含量都有所增加,但经5%PEG浓度处理后丙二醛含量上升不明显,10%和15%PEG处理的,丙二醛含量上升迅速。     

外源物质对干旱胁迫下麻黄幼苗膜质过氧化作用的影响

以麻黄幼苗为试材,利用PEG-6000人工模拟干旱胁迫,采用盆栽灌根法,研究了腐殖酸、外源硝普钠(SNP)、甜菜碱处理下麻黄幼苗的可溶性蛋白质、丙二醛(MDA)含量及抗氧化酶活性的变化。结果表明:干旱胁迫下,麻黄幼苗MDA含量显著升高,可溶性蛋白质含量及过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性升高;对比干旱胁迫,外源物质处理下MDA含量明显降低,可溶性蛋白质及抗氧化酶活性明显增加,且随处理浓度增加均呈现先升后降的规律,随处理时间的有所增加。综合表明,2.5mmo1·L~(-1)的甜菜碱处理10d为缓解氧化损伤效果的最佳处理,此外100mL·L~(-1)的腐植酸、0.25mmo1·L~(-1)的SNP也有效地缓解了麻黄干旱胁迫,3种外源物质不同程度地提高了麻黄幼苗的抗旱能力,为干旱半干旱地区麻黄的推广栽培提供了依据。     

向日葵LACS家族鉴定及响应非生物胁迫表达分析

利用生物信息学技术从向日葵（Helianthusannuus）基因组中鉴定了13个长链酰基辅酶A合成酶（long-chain acyl-CoA synthases,LACSs）家族基因,其分布在向日葵8条染色体上。系统发育树显示,HaLACS家族成员分为6个亚族,且同一亚族成员具有相似的基因结构和蛋白保守基序。基因复制分析发现HaLACS家族扩增的主要因素是片段复制。HaLACS的启动子区域富含逆境响应和植物激素调控相关元件。表达谱分析显示HaLACS在向日葵不同组织中的表达存在差异。比较2个向日葵品种（高/低亚油酸含量）中HaLACS在种子发育不同阶段的表达,HaLACS呈现差异表达。qRT-PCR结果表明,200mmol·L-1 NaCl处理24 h后,7个HaLACS在茎中的表达量与同期对照相比显著上调;100μmol·L-1 ABA处理3 h后,8个HaLACS在根中的表达量显著上调;15%PEG 6000模拟干旱胁迫后,多数HaLACS在不同组织中呈现诱导表达。综上,向日葵LACS基因家族不仅参与了向日葵脂质的合成,而且在应对非生物胁迫时发挥重要作用。     

矮牵牛B-box型锌指蛋白基因PhBBX8的克隆与表达分析

利用矮牵牛（Petunia hybrida）基因表达谱芯片筛选出应答低温胁迫的相关基因,从中发现1个B-box型锌指蛋白基因PhBBX8。通过RT-PCR克隆得到该基因的编码区序列（CDS）,为1 242 bp,预测其编码氨基酸413 aa,N端含有2个B-box盒,C端含有1个CCT结构域。系统进化树分析发现,PhBBX8与拟南芥AtBBX8等聚类为一支。利用半定量RT-PCR检测其在根、茎、叶和花中的表达特性,结果表明该基因在花中表达量较高,其次为根,而在茎和叶中表达较弱;利用实时定量PCR检测了在低温、干旱、ABA、MeJA、高盐和高渗胁迫处理下矮牵牛叶片中PhBBX8的诱导表达情况,结果表明,PhBBX8表现出不同程度的上调,其中除干旱胁迫外,其他胁迫下上调倍数都较高,初步推测该基因与矮牵牛应答低温等非生物逆境相关。     

基于RNA-seq的套袋对‘天源红’猕猴桃果实花色苷合成关键结构基因表达的影响

【目的】探讨套袋对红肉猕猴桃果实生长发育过程中不同部位花色苷合成关键结构基因表达的影响,为解析光照对花色苷合成分子机制的影响提供依据。【方法】以全红型软枣猕猴桃‘天源红’为试材并对其进行套袋处理,在RNA-seq的基础上,筛选候选基因,利用实时荧光定量PCR对这些候选基因在‘天源红’盛花后7个时期的果肉样品中的表达量进行相对定量。根据荧光定量结果和聚类分析,最终确定关键候选基因,利用实时荧光定量PCR对关键候选基因在‘天源红’不同处理、不同时期、不同果实部位中的表达量进行相对定量分析,并对关键候选基因的表达量和花色苷含量进行相关性分析。【结果】12个候选基因在盛花后7个时期中的表达具有一定的规律,且各自的表达规律不尽相同。在果肉颜色明显变为红色的盛花后110 d,F3H、LDOX和F3GT的表达量较其他时期高。聚类分析结果显示,LDOX和F3GT分别聚为一类,且与其他的基因明显分开。LDOX在处理1和处理2的果肉以及处理3的果心中的表达量与花色苷含量呈极显著相关,而F3GT在处理1的果肉和处理3的果心中的表达量与花色苷含量呈极显著相关。【结论】LDOX和F3GT可能是‘天源红’果实花色苷生物合成途径中的关键结构基因。套袋抑制LDOX在‘天源红’外果皮、果肉中的表达,而一直套袋促进其在果心中的表达。套袋抑制了F3GT在果肉中的表达,而对果心中F3GT的表达无明显影响。     

野生绿豆抗旱性评价

用5%PEG处理野生绿豆和栽培绿豆的幼苗,测定了相关指标.结果表明:干旱胁迫下,与栽培绿豆相比,野生绿豆叶片失水较少,叶色值下降较缓慢,干物质增长较快,光合速率降幅较小,说明野生绿豆对干旱环境有更强的调节能力,野生绿豆抗旱性强于栽培绿豆.试验的结果为从野生绿豆中选择抗旱基因,为培育抗旱绿豆新品种提供了理论依据.