鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗生产工艺改进试验

采用人工气室绒毛尿囊膜和尿囊腔两种接种方法制备鸡痘活疫苗，结果表明经尿囊腔接种的结果和经人工气室绒毛尿囊膜接种的结果相同。因此，以尿囊腔接种代替人工气室绒毛尿囊膜接种，可以降低成本，简化工艺。本试验为以后采用机械化接种生产鸡痘苗提供了可靠的数据。     

鸡新城疫与鸡痘二联活疫苗的研究

目前,我国各兽药生物制品厂所生产的鸡痘活疫苗一般分为两种,一种是鸡痘组织苗,即在鸡胚绒毛尿囊膜上接种鸡痘种毒,接种后120小时收获其增厚、水肿和有痘斑的全部绒毛尿囊膜制备的鸡痘苗,另一种则是鸡痘细胞苗,在免疫原性上前者要好于后者.鸡胚在接种鸡痘种毒后,不但绒毛尿囊膜产毒,而且其尿囊液和出现充血的胎儿中也会有很高浓度的鸡痘病毒.而制造鸡新城疫疫苗主要是收取尿囊液.     

研制鸡痘细胞冻干苗的试验报告

鸡痘是威胁养鸡业流行较广的一种传染病。在预防上使用的疫苗,日本是用鸡胚和鸭胚绒毛尿囊膜制作的,我国目前使用的“鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗”也是用鸡胚绒毛尿囊膜制作的,这种方法产量少、方法烦琐。从一九七六年五月到一九七七年九月,我们共同研制了鸡痘细胞冻干苗,兹将试验情况报告如下:     

混合型鸡痘弱毒疫苗的生产

将每瓶疫苗中所加入的绒毛尿囊膜减少１／２以上，另一部分含量则以尿囊液来补充，以此配成混合型鸡痘组织苗。经实验室和现地试验应用表明，该苗与单纯绒毛尿囊膜组织苗的免疫效果一样。     

鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗生产工艺的优化及改进试验

《中华人民共和国兽用生物制品规程》规定,在生产鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗时,采用鸡胚尿囊腔接种和人工气室绒毛尿囊膜接种工艺生产成品。由于人工气室绒毛尿囊膜接种早死胚多,而且工艺比较繁琐,所以我国大多数生产企业在生产中多采用尿囊腔接种方法,但尿囊腔接种后病毒繁殖时间要比人工气室绒毛尿囊膜接种后延长1~2 d,增加了孵化成本,而且绒毛尿囊膜病变(增厚、水肿等)也不如人工气室绒毛尿囊膜接种后产生的病变严重(膜重)。为此,借鉴了鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗的新生产工艺———鸡胚绒毛尿囊膜渗透法[1],并将此方法用于鸡传染性喉气管炎…     

鸡马立克氏病病毒的分离与初步鉴定

从鸡马立克氏病病鸡拔取羽毛根 ,经处理后接种于 4日龄鸡胚绒毛尿囊膜。盲传到第六代出现典型的马立克氏痘斑。用第7代鸡胚绒毛尿囊膜研磨液与MD阳性血清进行琼脂扩散试验 ,结果出现了明显的白色沉淀线。此结果表明已分离到马立克氏病毒。     

冻干种毒在制备鸡传染性喉气管炎和鸡痘活疫苗生产中的应用

生产设苗制备能长期保存且稳定性好、高滴度的生产种毒(种毒批 )是生产的关键。笔者结合生产实际 ,制备了鸡传染性喉气管炎和鸡痘冻干种毒 (种毒批 ) ,实践应用效果很好 ,现介绍给同行以供参考。1　材料和方法1.1　生产种毒鸡痘基础种子由中国兽医药品监察所提供的冻干鸡痘鹌鹑化弱毒Ｆ2 82Ｅ4株。经ＳＰＦ鸡舍提供的ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 ,于 - 2 0℃保存。鸡传染性喉气管炎基础种子由广东生物药厂提供的Ｋ3 17株。经黑龙江省生物制品一厂ＳＰＦ舍提供ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 - 2 0℃保存。1.2　鸡胚由…     

鸡传染性喉气管炎的诊断

从发病鸡场病鸡气管中分离到一株能使鸡胚绒毛尿囊膜产生典型痘斑的病毒。鸡胚分离物能使健康鸡发生与病鸡同样的临床症状。病愈后的血清与鸡传染性喉气管炎诊断抗原出现阳性反应,并能中和鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗,使绒毛尿囊膜不产生痘斑。鸡胚分离物置400倍“畜禽消毒液”和“抗毒威”溶液中,室温30分钟,失去在鸡胚中产生痘斑的特性。从临床症状和鸡胚分离物的各种特性证明,该场流行的为鸡传染性喉气管炎。     

一起皮肤型鸡痘的诊断与防治

2008年10月，河南省郑州市郊区某鸡场发生一起疑似鸡痘。将病鸡痘痂部位的皮肤和结节做成1∶10的悬液接种易感鸡，第6天后试验鸡表现精神萎靡，食欲减退，体重减轻，出现典型的皮肤痘疹；取病料接种鸡胚在鸡胚绒毛尿囊膜上出现豆粒大小的痘斑。结合发病情况、临床症状、剖检变化和实验室诊断，初步诊断为鸡痘。     

集约化羊场对羊痘的诊治

正羊痘是由羊痘病毒引起的一种人畜共患传染病。病变出现在皮肤无毛或少毛的部位。病初发生红斑、血疹,之后形成水疱、脓疱,最后结痂。本病流行很广,每年各地区时有发生,以春、秋两季流行较多见,可给养羊业造成巨大损失。痘病毒属痘病毒科、山羊痘病毒属,分为绵羊痘病毒和山羊痘病毒,因此羊痘可分为绵羊痘和山羊痘。1病原绵羊痘病原体为绵羊痘病毒。绵羊痘病毒可在易感动物的皮肤、鸡胚的绒毛尿囊膜和易感的组织细胞里进行培养继     

山羊痘病毒的分离与鉴定

对贵州省2002年以来发生的疑似山羊痘病例样品进行了病毒的分离与鉴定。取山羊痘病羊的皮肤痘疹和水疱作待检病料,接种BHK-21传代细胞盲传3代后,出现了明显的、规律的细胞病变(CPE),病毒细胞培养物在F4代以后,能与山羊痘标准阳性血清在琼脂扩散试验中出现白色沉淀线,而与正常细胞的培养物及PBS不出现沉淀线;参照GenBank上山羊痘病毒P32基因序列,设计了1对特异性引物,对现场分离毒株进行PCR扩增,可扩增出963bp特异性的DNA条带。用待检病料感染的BHK-21细胞培养物接种9日龄鸡胚绒毛尿囊膜,随着传代次数的增加,痘斑病变的出现率从13.3%～20%上升至33.3%～40%;用山羊痘病变皮肤、鸡胚绒毛尿囊膜和感染细胞进行超薄切片,在电子显微镜下可以观察到典型的山羊痘病毒粒子。     

山羊痘病毒粒子的电子显微镜观察

本研究室2003年以来对山羊痘病毒感染多种细胞进行了透射电镜观察。在感染的皮肤和黏膜上皮细胞浆中观察到大量不同成熟阶段的典型山羊痘病毒粒子，病毒粒子也见于巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞胞浆内，甚至少量散在血管腔中。用山羊痘病毒分离物感染鸡胚绒毛尿囊膜形成痘斑，其上皮细胞和成纤维细胞中也可见成熟和不成熟的病毒粒子，同时感染BHK-21细胞也观察到典型的山羊痘病毒粒子。     

白喉型鸡痘病毒Gibbs株免疫特性研究

白喉型鸡痘病毒Gibbs株能在鸡胚绒毛尿囊膜上良好增殖，接种后１２０小时，绒毛尿囊膜明显水肿，且淡黄色痘斑，其毒价达到１０^5.25-10^5.83EID50/0.2ml。用１０倍稀释的病毒悬液肌肉注射１３日龄雏鸡，无任何不良反应。用１００倍稀释病毒液皮下刺种免疫１４－４０日龄鸡，接种后３－６天，接种局部出现痘痂，接种后１４天，用１０倍稀释的Ｇibbs株病毒液二次皮下刺种或用鸡痘野毒株经腿部毛作擦，免疫未见任何局部反应或其它异常，保护率达１００％。，免疫后１６５天，保护率仍达８０％，试验结果证实该毒株具有良好的免疫原性和安全性。     

小尾寒羊绵羊痘病例的诊断

旨在对甘肃某羊场小尾寒羊疑似绵羊痘进行确诊,并深入探讨其病理变化特点。对临诊疑似患绵羊痘的小尾寒羊进行了羊痘间接ELISA抗体检测和PCR检测确诊,并对6只病羊进行病理剖检、病理组织学和超微结构研究。结果如下：羊痘间接ELISA抗体检测显示6例病羊样品均为阳性;同时,对2例病羊样品进行PCR检测,均扩增出绵羊痘病毒（SPV）585 bp的目的基因片段,表明本次小尾寒羊所患疫病为绵羊痘。病理剖检显示,病羊皮肤无毛或少毛处充血,局部有红斑和坏死,尾部常有感染化脓形成溃疡;消化道黏膜,尤其舌和瘤胃黏膜有大小不等痘疹与坏死病灶,局部甚至形成糜烂或溃疡。肺膈叶以及肝、脾等常有痘疹和坏死病灶。病理组织学观察显示,肺痘疹病灶主要呈现渗出-增生结节和坏死-增生结节变化,病灶内血管、细支气管等周围常有大量绵羊痘细胞,胞质内有嗜酸性包涵体;病变消化道黏膜局部,上皮细胞程度不等增生、水泡变性,固有层及黏膜下层充血、水肿,有大量绵羊痘细胞,其细胞质内包涵体明显。肝、脾、肾也有程度不等坏死-增生结节变化。肺超微结构观察显示,肺泡上皮细胞肿大,细胞核浓缩、染色质聚集,线粒体程度不等肿胀、嵴断裂、空泡化,可见细胞质内包涵体。研究证明,除局部皮肤病变外,消化道黏膜和肺等实质器官的痘疹病变是患绵羊痘小尾寒羊具代表性的病理变化,尤其痘疹病灶中大量绵羊痘细胞的出现具有证病性意义。     

Growth characteristic of Camel pox and Vaccinia viruses in embryonated eggs and cell culture

Camel pox viruses isolated in Sudan and VD45 (African camel pox strain) and Vaccinia virus (Elstree strain) were used for inoculation of chorioallantoic membrane (CAM) of embryonated eggs (EE) and cell culture (CC). In EE Lesions were seen as pocks ranging in size from 1 to 1.5 mm in diameter, and they increase in size with serial passage and taking opaque- white and opaque- yellow colors. When propagated in Vero cells, these viruses gave clear CPE, characterized by rounding of cells, plaque formation, syncytia and detachment of cells from the glass.     

Molecular detection of avian pox virus from nodular skin and mucosal fibrinonecrotic lesions of Iranian backyard poultry

In recent years, some outbreaks of skin lesions suspected to be avian pox were observed in the backyard poultry in different parts of western areas in Iran. Consequently, 328 backyard poultries with suspected signs of avian pox virus infection were sampled. All birds showed nodular lesions on unfeathered head skin and/or fibronecrotic lesions on mucus membrane of the oral cavity and upper respiratory tract. For histopathological analysis, the sections of tissue samples from cutaneous lesions of examined birds were stained with H&E method. For PCR, after DNA extraction a 578-bp fragment of avian pox virus from 4b core protein gene was amplified. Results showed 217 and 265 out of 328 (66.1 and 80.7 %, respectively) samples were positive for avian pox virus on histopathological and PCR examination, respectively. In this study, the samples that had intracytoplasmic inclusion bodies on pathologic examination were PCR positive. This study revealed that PCR is a valuable tool for identification of an avian pox virus and that the frequency of pox infection in backyard poultry in western areas of Iran is high.     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

Preliminary characterisation of the sersenk strain of goat pox virus

The Sersenk strain of goat pox virus first isolated in Iraq, grew on chorioallantoic membranes (CAM) of developing chicken embryos producing generalised large pocks, 2 to 3 mm in diameter, on the third day post-inoculation. The virus killed the inoculated embryos. Replication of the virus in primary cultures of lamb testis cells induced a cytopathic effect (CPE) and plaque formation characteristic of pox viruses. It was antigenically related to reference strains of goat pox and sheep pox viruses. The virus was sensitive to ether and chloroform, failed to agglutinate erythrocytes and was strictly pathogenic to goats.     

羊痘病毒G蛋白偶联趋化因子受体基因序列分析及其在鉴别病毒种属上的作用

为明确G蛋白偶联趋化因子受体(GpCR)基因在羊痘病毒种属鉴别中的作用,本实验对3株绵羊痘病毒(SPV)和2株山羊痘病毒(GPV)弱毒疫苗株的GpCR进行了克隆测序,并与GenBank中登录的21个羊痘病毒属成员相关序列进行了比对。核酸同源性分析表明SPV不同毒株之间同源性达到99.5%～99.8%;GPV之间同源性达到98.8%～99.8%;GenBank上公布的疙瘩皮肤病病毒(LSDV)之间同源性达到100%。而GPV、SPV和皮肤疙瘩病毒两两比对的同源性仅达到94.2%～95.9%。对GpCR的系统进化树分析可以看出GPV、SPV和LSDV分别位于不同的进化分枝上,而GPV与LSDV具有更近的亲缘关系。GpCR基因在鉴别GPV属和流行病学分析中具有重要价值。     

羊痘的研究进展

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。羊痘是以发热、全身性的皮肤损伤、痘疹和淋巴结病变为特征。羊痘病毒是所有动物痘病毒中最为重要的一种，严重影响养羊业和国际贸易的发展。本文从病原学、流行病学、诊断和预防控制等方面对羊痘做一综述。虽然此病从临床症状和宿主特异性上很容易做出诊断，但进一步的实验室确诊还是必要的，现已有多种检测方法和诊断试剂。控制该病最有效的方法还是使用疫苗对易感动物进行免疫接种。