朱顶红体细胞胚胎发生及植株再生研究

 通过诱导朱顶红（Hippeastrum hybridum）小鳞茎形成胚性愈伤组织,建立间接的体细胞胚胎发生途径和植株再生的无性繁殖体系。试验结果表明,0.5  mg · L^-1的2,4-D附加0.5 mg ·  L^-1 6-BA对试管小鳞茎外植体初代胚性愈伤组织的诱导和继代增殖有明显的促进作用,初培养松脆愈伤组织诱导率可达83.3%。2.5 ~ 5.0 mg · L^-1 的6-BA对体细胞胚胎的发育有显著的促进作用,培养50 d大于20个体细胞胚发生的愈伤组织约为50%;相同浓度6-BA附加不同浓度NAA的试验组间体细胞胚发育无明显差异。     

唐菖蒲体细胞胚起源、发育的形态与组织细胞学观察

 以唐菖蒲‘Advanced Red’品种的籽球为试验材料,将籽球切片放在MS + 6.0 mg · L^-1 TDZ培养基上暗培养21 d,诱导胚性愈伤组织;将胚性愈伤组织转入MS + 1 mg · L^-1 2,4-D培养基中暗培养28 d诱导体细胞胚。使用立体显微镜和石蜡切片技术对体胚形态与细胞组织进行观察。结果表明：体胚诱导14 d后,开始出现一些胚性细胞,之后形成多个细胞组成的原胚（pre-embryonic cell complexes）,原胚进而发育形成球形、盾形,心形、鱼雷形胚和子叶期胚。将成熟的体胚转入MS培养基后长出不定根和不定芽,形成完整的植株。唐菖蒲体胚的起源有外起源和内起源两种方式。在初生体胚发育过程中还伴有次生胚的形成。     

洋葱高频离体再生体系的建立

 以洋葱（Allium cepa L.）品种‘W465’的幼嫩花序和不同发育时期的幼蕾为外植体材料,研究激素配比对其愈伤组织诱导、再生和生根驯化的影响,以建立洋葱高频离体再生体系。研究结果表明,洋葱幼嫩花序为最佳外植体材料,在含有1.0 mg · L^-1 2,4-D + 1.0 mg · L^-1 6-BA 的B5 培养基上愈伤诱导率为100%,在添加1.0 mg · L^-1 TDZ 的B5 培养基上再生芽分化率为78.13%,在1/2 MS + 0.01 mg · L^-1 NAA 培养基上可诱导生根,驯化移栽成活率达到95%。     

无子西瓜郑抗4号的体细胞胚诱导及植株再生(英文)

以无子西瓜(CitrulluslanatusMansfeld)郑抗4号无菌苗子叶为外植体,进行了体细胞胚发生及植株再生的研究,结果表明,无菌苗应先进行3d暗培养,然后采取光照16h/d和黑暗8h/d培养3d;将子叶的叶面朝下放置于培养基上的愈伤组织诱导率高于叶面朝上的培养方式;子叶诱导胚性愈伤组织的最适培养基配方为MS+6-BA2.0mg/L+KT1.0mg/L+GA31.0mg/L;诱导需要在黑暗条件下启动,进行7d暗培养,而生长分化于光照16h/d和黑暗8h/d条件下培养7d;继代3次得到的胚性愈伤组织最多;最适生根培养基配方为1/2MS+IBA0.3mg/L。体细胞胚胎诱导率最高为25%。胚性愈伤组织经进一步培养发育为成熟的体细胞胚胎,生根成为完整植株。     

大蒜未受精子房离体诱导单倍体的研究

 以苍山大蒜品种‘糙蒜’为试材,通过花茎离体培养获得发育健壮的花器官。以其未受精子房为外植体进行离体培养,研究不同培养基（MS、B5、N6）及外源植物生长调节剂对单倍体诱导的影响,以建立大蒜单倍体诱导体系。结果表明,诱导未受精子房产生愈伤组织的适宜培养基为B5 + 2 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,愈伤组织及雌核发育胚总诱导率可达12.24%;诱导愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为B5 + 3 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,不定芽分化频率可达46.15%;将不定芽转移至B5 + 0.05 mg · L^-1 NAA培养基中可诱导生根,发育成完整植株。以再生植株叶片为材料,采用流式细胞仪进行倍性鉴定,所得18株再生植株中有16株为单倍体植株。     

灰毡毛忍冬工厂化快繁生产体系的建立及再生苗遗传稳定性的分子鉴定

 以灰毡毛忍冬（Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.）腋芽为材料,建立了一套适合工厂化 生产的离体再生技术体系。该体系包括腋芽诱导培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.2 mg · L^-1 NAA,继代 增殖培养基MB + 1.0 mg · L^-1 6-BA + 0.5 mg · L^-1 IAA 和MB + 1.5 mg · L^-1 6-BA + 0.8 mg · L-1 IAA 和生根 培养基1/2MB + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.2 mg · L^-1 IAA。分别从继代12、24、36 个月的再生植株中随机抽取8 株进行SRAP 分析其遗传的变化。在检出的147 条SRAP 条带中,继代12 个月的再生植株未发现变异, 继代24 个月的再生植株中有2 株发生变异,继代36 个月的再生植株中有4 株发生变异。结果表明,建 立的腋芽再生培养体系在一定继代周期内是稳定可靠的,适合灰毡毛忍冬的规模化生产。     

离体雌核发育诱导洋葱单倍体与植株再生

 以来自日本的3个中日照型洋葱（Allium cepa L.）杂交种的未开放花蕾为外植体材料,研究了2,4-D和6-BA浓度及配比对单倍体诱导培养的影响,以建立洋葱单倍体诱导技术体系。研究结果表明,含有1.5 mg · L^-1 2,4-D + 1.5 mg · L^-1 6-BA和2.0 mg · L^-1 2,4-D + 2.0 mg · L^-1 6-BA的B5培养基适于洋葱单倍体的诱导,诱导率最高达到4.00%。共获得了43枚雌核发育胚,雌核发育胚转移至不含激素的B5基本培养基中即可发育成完整植株,再生植株驯化移栽成活率达到100%。利用根尖染色体计数和流式细胞仪鉴定有42株是单倍体。     

阿月浑子与黄连木的杂种果实发育及幼胚培养研究

 以阿月浑子与黄连木的杂种果实和杂种幼胚为试材,对果实生长发育规律及幼胚培养进行了研究,探讨了胚龄、培养基类型和6-BA浓度等对杂种胚培苗再生的影响。结果表明：（1）杂种果实的纵、横径生长呈“S”型曲线变化,果实鲜质量生长呈双“S”型曲线变化。（2）杂种胚的发育始于授粉后80 d,80 ~ 100 d是杂种胚败育的关键时期。（3）授粉后80 d的杂种幼胚难以成苗,授粉后100和120 d的杂种幼胚成苗率分别为37.04%和83.33%。（4）适宜杂种胚培苗增殖的培养基为：DKW + 2.0 mg · L^-1 6-BA + 0.05 g · L^-1 IBA + 0.3 g · L^-1 LH + 1.5 g · L^-1 PVP,增殖系数为3.47,苗高为3.32 cm。（5）适宜杂种胚培苗生根的培养基为：1/2WPM + 2.0 mg · L^-1 IBA + 0.05 mg · L^-1 NAA,生根率为80%。     

番木瓜均质胚性细胞悬浮系的建立和高效植株再生

【目的】提高番木瓜体细胞胚发生的同步性及其植株再生率,为番木瓜大量快繁、细胞工程和分子育种技术研发提供技术基础。【方法】以紫晖110～120 d果实的未成熟合子胚为外植体,经胚性愈伤组织诱导、液体悬浮培养和体细胞胚发生过程,建立均质胚性细胞悬浮系和高效植株再生技术体系,重点比较了不同质量浓度2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)对胚性愈伤组织诱导、不同质量浓度6-苄基氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)+萘乙酸(1-naphthlcetic acid,NAA)组合和活性炭(activated carbon,AC)对子叶期体细胞胚萌发与生根的影响。【结果】4 mg·L^-12,4-D可诱导62.86%未成熟合子胚形成胚性愈伤组织。经5个继代周期的筛选培养,可建立由单细胞和小细胞团组成的均质胚性细胞悬浮系。采用液体培养方式能诱导大量球形胚的形成,被转移至含5 g·L^-1AC的半固定培养基成熟培养30 d后,可获得大量子叶期体细胞胚。在含0.4 mg·L^-1<...     

‘台州紫山药’试管薯诱导体系研究

 以浙江省‘台州紫山药’试管苗腋芽为材料,研究了组培容器培养基用量、植物生长调节剂浓度配比、蔗糖浓度及光照强度对紫山药试管薯形成和生长发育影响。结果表明：1/2MS + 6-BA 0.1 mg · L^-1 + NAA 2.0 mg · L^-1 + 0.02% 活性炭 + 蔗糖70 g · L^-1、光照强度2 000 lx及每个组培容器（ZP17-440）培养基用量为60 mL的培养条件,有利于紫山药试管薯的形成和生长发育,试管薯在培养40 d左右开始形成,90 d诱导率达100%。     

白姜花胚性愈伤组织的诱导与植株再生体系的建立

将白姜花（Hedychium coronarium）未成熟花丝接种在MS + 4 mg ? L^-1 2,4-D + 4 mg ? L^-1 NAA + 1 mg ? L^-1 6-BA的培养基上,经过180 d的培养,诱导出3种愈伤组织：Ⅰ,浅黄色松散易碎;Ⅱ,白色疏松半透明水渍状;Ⅲ,黄色致密颗粒状。对愈伤组织继代培养基中的2,4-D、NAA和6-BA浓度进行优化,结果表明培养基中含有1 mg ? L^-1 2,4-D、0.25 mg ? L^-1 NAA、0.25 mg ? L^-1 6-BA时可获得胚性状态良好的愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + 0.25 mg ? L^-1 NAA + 0.5 mg ? L^-1 TDZ + 维生素B₅ + 100 mg ? L^-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L^-1脯氨酸 + 100 mg ? L^-1麦芽提取物 + 45 g ? L^-1蔗糖的体胚诱导培养基中培养20 d后,转移到MS基本培养基上培养30 d,1 g胚性愈伤组织可获得50 ~ 60个体胚。成熟体胚在MS + 0.2 mg ? L^-1 IAA + 0. 5 mg ? L^-1 6-BA的萌发培养基上培养20 d时,体胚萌发率为85%。萌发的体胚转移到1/2 MS + 1 g ? L^-1活性炭的成苗培养基中可发育成正常植株,植株室外栽培成活率达90%。对100株再生植株的染色体数进行分析,发现3株三倍体（2n = 3x = 51）、6株四倍体（2n = 4x = 68）和2株六倍体（2n = 6x = 102）。     

朱顶红‘Red Lion’胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生

以‘Red Lion’朱顶红(Hippeastrum vittatum)的鳞片为外植体进行体细胞胚诱导和形态学与组织学的胚性鉴定。结果表明,鳞片在MS+2 mg·L~(-1) BA+1 mg·L~(-1) NAA+2 mg·L~(-1) TDZ+30 g·L~(-1)蔗糖培养基上胚性愈伤组织诱导率可达90.63%,而不添加TDZ的培养基上胚性愈伤组织诱导率为0。胚性愈伤组织可呈白色松散、透明膨松、透明致密、微棕色松脆和翠绿色松脆等类型;非胚性愈伤组织呈微棕色致密状。胚性愈伤组织中可明显观察到球形胚、心形胚和棒状胚3个发育时期。体细胞胚在不添加植物生长调节剂的MS培养基上可发育形成芽和根,长成完整小植株。     

‘凤丹’牡丹幼胚愈伤组织诱导的优化和再生体系的建立

以‘凤丹’牡丹的幼胚为材料,从取样时期、切割接种方式、基本培养基和植物生长调节剂选择等方面进行再生体系优化。结果表明:授粉后60 d为‘凤丹’牡丹幼胚诱导愈伤的最佳取材时期;完全破碎切割成幼胚薄片比完整胚、1/2胚和1/4胚更容易获得高质量的愈伤组织,且褐化率较低;MS基本培养基添加0.162μmol·L^-1 H₂O₂可提高幼胚愈伤组织诱导率,但会增加褐化率,而在WPM基本培养基中添加不同浓度的H₂O₂,对愈伤诱导率和褐化率的影响不大;WPM基本培养基比MS更适于‘凤丹’牡丹幼胚再生;WPM+2.5 mg·L^-1 2,4-D+0.1 mg·L^-1 6-BA是诱导愈伤的最佳植物生长调节剂组合,诱导率可达93.33%;不定芽和不定根诱导的最佳组合分别为WPM+30 g·L^-1蔗糖+3 g·L^-1植物凝胶+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1     

露地菊离体再生体系建立及BrDFR基因遗传转化

 以露地菊（Chrysanthemum morifolium）品种‘神韵’无菌苗叶片为外植体材料,研究植物生长调节剂配比对其愈伤组织诱导再生芽的影响,以建立离体再生体系。研究结果表明,露地菊‘神韵’在含NAA 1.0 mg · L^-1 + BA 1.0 mg · L^-1的MS培养基上获得了最高的再生芽分化率。利用已经克隆的‘津田’芜菁BrDFR基因构建非抗生素筛选的表达载体。以露地菊‘神韵’的无菌苗叶片为受体,通过农杆菌介导进行BrDFR基因的遗传转化。以载体的PMI基因为筛选标记,通过甘露糖筛选获得了‘神韵’的遗传转化再生植株。经过PCR验证和Southern杂交检测证实BrDFR基因已经整合到‘神韵’基因组中。     

紫红线茄转基因体系的优化及基因SmARF8基因RNA干涉表达载体的遗传转化

建立了以紫红线茄下胚轴为外植体的高效转基因体系。利用该方法,以获得茄子SmARF8基因RNA干涉转基因植株为目的,构建了以NPTⅡ基因为筛选标记的融合表达载体pCAMBIAI 35S-2300-SmARF8-INT,并通过农杆菌介导,侵染茄子下胚轴外植体。含有2 mg · L^-1吲哚乙酸,0.5 mg · L^-1玉米素,25 mg · L^-1卡那霉素和500 mg · L^-1头孢氨苄的MS选择培养基可直接诱导外植体产生转基因分化苗,再生率达到80%。转基因苗继续生长并在不含激素的MS培养基上产生健壮根系,最终获得转基因株系。RT-PCR和qRT-PCR分析验证了T₀代转基因株系中内源基因SmARF8被干涉后不表达或表达量降低,Southern blot分析显示选择的T₀代转基因株系中存在1个T-DNA插入拷贝。以上研究结果表明利用建立的转基因体系SmARF8基因在茄子中被成功敲除。     

日光温室早春黄瓜叶片喷施赤霉素对生长和生理及产量的影响

以日光温室早春茬‘中农26’黄瓜为试验材料,分别用10、50、100和200 mg·L~(-1)的赤霉素(GA_3)溶液喷施叶片,以清水处理为对照,研究不同浓度GA3对生长、生理特性、产量及品质的影响。结果表明,与对照相比,喷施GA_3处理可促进黄瓜生长。在试验浓度范围内,黄瓜株高,茎粗,叶片数,根系活力,色素含量,净光合速率(P_n)以及氮(N)、磷(P)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)、铁(Fe)等矿质元素含量均以50 mg·L~(-1)处理最高,其中Pn比对照增加22.44%;叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量分别比对照增加27.16%、24.22%和29.24%。同时,喷施GA3处理提高了黄瓜坐果率,从而使单株结果数和产量增加,其中50 mg·L~(-1)处理的产量为18.22 kg·m-2,比对照增加24%,且喷施GA3改善了黄瓜品质。喷施GA3可减轻早春日光温室亚适宜温光环境对黄瓜生长的不利影响,以50 mg·L~(-1)效果最好。     

黄瓜未授粉子房诱导出胚和再生植株的研究

以7个不同黄瓜基因型为材料进行黄瓜未授粉子房的培养研究,结果表明,不同基因型出胚率差异显著,其中密刺型黄瓜北京102出胚率最高,达25.3%,鄂黄3号出胚率最低,为0.7%。以北京102、中农26号和津优1号为试材进一步研究热激诱导、外源激素、植株不同生长阶段对胚状体诱导产量的影响,发现35℃热激处理2d胚状体产量最高,分化培养基中NAA为0.20mg·L-1、6-BA为0.8mg·L-1时最易分化出胚,在植株第21~30节位采收的子房出胚量最高。再生培养基中GA浓度达到0.4~0.8mg·L-1时,可有效打破再生植株"花打顶"现象从而提高植株再生率。再生植株中二倍体植株比率为70.0%,二倍体植株中DH株比率为84%。     

蔗糖在延缓青花菜黄化过程中维持其能量和抗氧化力

为探讨蔗糖处理对青花菜采后黄化的抑制作用,采用含不同浓度(0、50、100、150、200和250 mmol·L~(-1))蔗糖的MS固体培养基培养青花菜花蕾,研究其对青花菜花蕾抗氧化能力与能量代谢的影响。结果发现,含150 mmol·L~(-1)蔗糖的MS培养基处理能显著抑制青花菜叶绿素降解;与空白对照相比,蔗糖处理能显著抑制多酚氧化酶(PPO)活性上升,延缓苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性下降,而对抑制丙二醛(MDA)含量上升没有显著效果。蔗糖处理通过提高叶绿体、线粒体中Ca~(2+)-ATPase活性,以及花蕾中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)含量和能荷(EC)水平来维持能量代谢。维生素C含量的下降可能不是叶绿素降解的关键原因。     

黄瓜未受精胚珠离体培养及单倍体植株再生

以欧亚杂交类型黄瓜（Cucumis sativus L.）65G × 228 的F1 为材料,对未受精胚珠进行离体培养,通过6 因素5 水平的正交试验,研究预处理温度、诱导培养基、TDZ、KT 和BA 浓度对未受精胚珠雌核发育的影响。结果证明TDZ 浓度对胚发生频率有极显著影响,是诱导黄瓜离体雌核发育的最主要因素,当其浓度为0.02 mg · L-1 时胚状体的诱导率最高。诱导培养基和KT 浓度显著影响胚发生率,而预处理温度和BA 浓度影响不显著。硝态氮（NO3-）和铵态氮（NH4+）含量比例均接近1∶1 的诱导培养基,较其他比值较大的培养基的胚发生率有显著提高。利用流式细胞仪进行倍性鉴定,再生植株中单倍体率为18.2%。