抗真菌植物乳杆菌的筛选及其在酸乳保鲜中的应用

以33株具有潜在抑制真菌活性的植物乳杆菌为研究对象,分别与基础发酵剂复配制备酸乳,通过测定发酵酸乳在敞口室温条件下贮藏期间霉菌、酵母菌的菌数变化及酸乳的酸度,筛选具有良好保鲜效果的植物乳杆菌.结果表明:初筛所得9株植物乳杆菌(IMAU80152、10156、80091、50045、10155、80106、10216、10996、10239)可明显抑制真菌生长,复筛出IMAU80091和IMAU80106在酸乳中酸度变化程度显著低于其他菌株及商业保鲜菌(P＜0.05),当上述2株菌以1∶1复配发酵时抑制酵母菌效果显著优于商业保鲜菌(P＜0.05).复配发酵的酸乳样品贮藏21d后,滴定酸度为(138.24±1.19)°T,显著低于商业保鲜菌组(146.41±1.18)°T(P＜0.05).IMAU80091和IMAU80106复配组合可有效抑制货架期内酸乳真菌污染,具有作为生物保鲜菌的优良特性.     

酿酒酵母益生特性分析及其与植物乳杆菌IMAU10120共生菌株筛选

对30株酿酒酵母进行模拟胃肠转运、胆盐耐受性以及抑菌特性的体外筛选,筛选具有潜在益生特性的酿酒酵母与植物乳杆菌IMAU10120共生.结果表明:4株酿酒酵母IMAU6Y047、IMAU7Y006、IMAU7Y007、IMAU7Y036 pH 2.5/pH 8.0胃肠转运存活率大于50％,且均为胆盐耐性菌株,对大肠杆菌O157、鼠伤寒沙门氏菌、弗氏志贺氏菌有抑制作用,且IMAU7Y006与植物乳杆菌IMAU10120互利共生,为进一步混合发酵提供基础数据.     

饲用干酪乳杆菌的生物学特性研究

针对一株干酪乳杆菌生长特性、泌酸能力、耐酸性、胆盐耐受性和抑菌能力进行研究,旨在为微生态饲料添加剂的研发提供理论依据.结果表明:干酪乳杆菌在24 h时菌体质量浓度达到最高值,在28 h时产酸量最高,pH在3.80左右维持稳定;干酪乳杆菌分别经pH 2.0和1.0％胆盐处理3h后存活率分别为81.29％、150.81％;该菌株对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均具有较好的抑菌性能,抑菌圈直径分别为17.47、18.53、16.36 mm.     

一株泡菜来源副干酪乳杆菌生物学特性及抗逆性研究

研究对从泡菜中分离的一株副干酪乳杆菌进行生长曲线测定、耐酸试验、耐猪胆盐试验、人工模拟猪胃肠道环境耐受性试验和抑菌试验等抗逆性研究。结果表明:饲用微生态制剂湖南省工程实验室从泡菜中分离得到的副干酪乳杆菌耐酸性强(pH 2.0)和耐高胆盐质量分数(质量/体积0.3%),对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、副伤寒沙门菌和鸡白痢沙门菌等具有较好的抑菌效果。     

内蒙古锡林郭勒牧区自然放养家畜肠道中乳酸菌的分离鉴定与潜在益生特性的筛选

乳酸菌是动物肠道内重要的生理性菌群,本研究以内蒙古锡林郭勒盟牧区自然放养的牛、马、山羊和绵羊为研究对象,对其肠道中的乳酸菌进行分离和16S rRNA鉴定,并对38株罗伊氏乳杆菌进行耐酸性、模拟胃肠液转运和胆盐耐受性试验。乳酸菌分离鉴定结果显示共分离到乳酸菌纯培养物96株,包括双歧杆菌属、肠球菌属、乳杆菌属和链球菌属四个菌属,其中乳杆菌属数量最多,为所有分离株的82.29%;乳杆菌属中罗伊氏乳杆菌所占比例最大,为48.10%。益生特性筛选试验结果显示菌株IMAU10240、IMAU10230和IMAU10256具有良好的耐酸、耐胃肠液和胆盐特性,可作为潜在益生菌进行进一步的益生功能研究。     

两株干酪乳杆菌生物学特性的研究

在模拟人体消化道环境中,对2株干酪乳杆菌耐酸、耐胆盐和耐NaCl等生物学特性进行了研究.结果表明,2株干酪乳杆菌在pH值为2.5～4.5的人工胃液或人工肠液中作用3h后均能生长,活菌数达到1010个/mL左右.此外,在胆盐浓度为2.5g/L或高盐浓度比例为7.5%的条件下亦能正常生长.该研究表明,这2株菌株在人体或动物中具有较好的适应性,可以作为益生菌用于食品工业.     

分离自蒙古国发酵乳制品的保加利亚乳杆菌产酸特性及发酵乳的酸组分

以保加利亚乳杆菌生产菌株结合实验室不同分离源的库存菌株为研究对象,评价保加利亚乳杆菌后酸化过程.选取12株分离自蒙古国不同地区发酵乳制品中保加利亚乳杆菌菌株结合1株商业菌株为研究对象并发酵酸奶,在发酵完成后的低温贮藏阶段(0～48 h、7d、14d和21 d),分别测定菌株发酵酸奶所需时间、贮藏期间滴定酸度、pH值以及采用反相高效液相色谱法测定有机酸含量,综合发酵产酸特性和酸奶后发酵过程中酸组分含量变化,最终得到弱后酸化菌株IMAU20458.     

陕北白绒山羊瘤胃乳酸杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

无菌采集陕北白绒山羊瘤胃内容物,梯度稀释后涂布CaCO3-MRS培养基,厌氧培养分离乳酸杆菌,并对分离菌株的生长、发酵液pH、酸耐受性、胆盐耐受性、抑菌性及有无内源质粒等生物学特性进行了比较研究。结果显示:从陕北白绒山羊瘤胃液中共分离出11株乳酸杆菌,经16S rDNA比对鉴定,分别是植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)4株(ZW-4、ZW-8、ZW-10、ZW-11),干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei)2株(GL-1、GL-5),罗伊乳酸杆菌(Lactobacillus reuteri)2株(LY-6、LY-7),短乳杆菌(Lactobacillus brevis)1株(DR-9),棒状乳酸杆菌(Lactobacillus coryniformis)1株(BZ-2)及弯曲乳酸杆菌(Lactobacillus curvatus)1株(WQ-3)。在相同培养条件下,植物乳酸杆菌ZW-4和干酪乳酸杆菌GL-1生长、产酸以及抑菌能力较强,同时植物乳酸杆菌ZW-4对胆盐和酸的耐受能力强于其他菌株;在上述菌株中,仅罗伊乳酸杆菌LY-7没检测到内源质粒,而植物乳酸杆菌ZW-4有6个内源质粒,明显多于其他几株乳酸杆菌。结果表明,分离自陕北白绒山羊瘤胃的植物乳酸杆菌ZW-4和干酪乳酸杆菌GL-1具有优良生物学特性,初步具备了作为益生菌使用的基本条件。     

鸡源乳杆菌的分离鉴定及其益生特性研究

利用选择性培养、革兰氏染色、芽孢染色、糖发酵试验、经典生理生化试验、耐酸和耐胆盐试验等方法,成功地从健康鸡的肠道中分离、鉴定并筛选出1株耐酸和耐胆盐能力较强的乳杆菌,命名为乳杆菌L3株。采用雏鸡安全性试验和肠黏液糖蛋白黏附性试验对乳杆菌L3株的安全性和黏附能力进行检测,证明所筛选的乳杆菌不仅对酸和胆盐的耐受性较好,且具有良好的安全性和肠道黏附能力。     

不同植物乳杆菌对樱桃谷肉鸭生长性能、血浆生化指标、屠宰性能与肌肉品质的影响

试验旨在研究产胆盐水解酶植物乳杆菌对樱桃谷肉鸭生长性能、血浆生化指标、屠宰性能与肌肉品质的影响。选取540只1日龄樱桃谷肉鸭,随机分为3组,1个对照组和2个试验组,每组6个重复,每个重复30只。各组均饲喂基础日粮,2个试验组在饮水中分别添加无胆盐水解酶植物乳杆菌和产胆盐水解酶植物乳杆菌,活菌数含量均为106cfu/mL,试验期为42 d。结果显示:无胆盐水解酶植物乳杆菌组1～42日龄日增重、出栏重与成活率均显著低于其余两组(P0.05),而产胆盐水解酶植物乳杆菌未对肉鸭生长性能产生显著影响(P0.05)。产胆盐水解酶植物乳杆菌组肉鸭21日龄血浆甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及游离脂肪酸水平均为最低,其中甘油三酯、总胆固醇与游离脂肪酸水平显著低于无胆盐水解酶植物乳杆菌组(P0.05),同时HDL-C水平显著低于其余两组(P0.05)。两种植物乳杆菌对42日龄肉鸭血浆脂质水平与屠宰性能均未产生显著影响(P0.05)。此外,两菌株可显著提高肉鸭屠宰后45 min胸肌肌肉红度值(P0.05),其中无胆盐水解酶植物乳杆菌可显著降低胸肌肌肉亮度值(P0.05),显著提高pH45 min值(P0.05);两菌株对屠宰后24 h肉色或pH值均无显著影响(P0.05),其中产胆盐水解酶植物乳杆菌较对照组可显著降低滴水损失(P0.05)。研究结果提示产胆盐水解酶植物乳杆菌不会对樱桃谷肉鸭生长性能与屠宰性能产生不利影响,可降低21日龄血浆脂质水平,改善42日龄胸肌肌肉品质。     

预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化

试验旨在研究预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化。通过研究嗜酸乳杆菌、布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌不同浓度人工胃液、人工肠液、牛胆盐的耐受性及其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性,确定其生物学特性;以大肠杆菌K99为指示菌,研究3种益生菌不同配比对大肠杆菌K99的抑菌效果,以确定其最佳组合。结果表明:(1)3种益生菌在不同pH人工胃培养条件下都具有较好的耐受性,其中嗜酸乳杆菌、芽孢杆菌在pH为5时,存活率达到了118.75%、142.24%,布氏酵母菌对不同pH均表现成活率达到了100%以上。(2)3种益生菌在人工胃液中9 h存活率较高,与0 h的OD600相比,布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率分别为108.7%、129.73%、96.37%。(3)在含有不同浓度的牛胆盐培养基中,布氏酵母菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌存活率较对照组的存活率最高为60.49%、85.1%、47.42%。(4)3株益生菌按照不同配比在培养12 h后,试验组第2、4、8组较对照组相比差异显著(P<0.05);培养24 h后,试验组第3、4、5、6较对照组差异显著(P<0.05),组间差异不显著(P>0.05);第8个处理组在培养12 h后对大肠杆菌K99的抑菌效果较好。综合分析,3株益生菌对人工胃液、人工肠液、牛胆盐具有较好的耐受性,并具对大肠杆菌K99、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌均有一定的抑菌特性。嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏酵母菌最佳的优化配比为3:3:1。     

Preparation of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA and Its Evaluation as Probiotic

The composition of colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was optimized to obtain the stable long-term storage agent,at the same time,the evaluation of this strain as a probiotic strain was conducted in this paper. The effects of different stabilizers,pH,NaCl and preservative concentrations on the preservation characteristics of this strain were studied. And spore yield,heat resistance,antibiotic sensitivity,artificial gastrointestinal tolerance,bile salt tolerance and other biological characteristics of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA as a probiotic strain were evaluated. The results showed that the colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was composed of 4% NaCl,0.1‰ calcium citrate,0.1‰ sodium diacetate,0.1‰ potassium sorbate and 2.0‰ xanthan gum with pH 7.Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could inhibit the growth of Salmonella, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. It had good tolerance to artificial gastric and intestinal juice, 0.3% pig bile salt, high spore production rate and strong heat resistance,and it could be used in conjunction with streptomycin and ampicillin. Therefore,Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could be used as a probiotic strain in livestock production.     

动物益生菌短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA制剂的制备及其益生特性评价

为优化短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂配方,获得性状稳定可长期贮存的菌剂,同时对其作为益生菌进行益生特性评价,本试验研究了不同稳定剂、pH、NaCl及防腐剂浓度对短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA发酵液保存特性的影响,并对其产芽孢率、耐热性、抗生素敏感性、人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性等生物学特性进行评估。结果显示,添加4% NaCl、0.1‰柠檬酸钙、0.1‰双乙酸钠、0.1‰山梨酸钾、2.0‰黄原胶,调节pH为7,可作为短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂保存的参考条件。短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA能够抑制沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种动物肠道病原菌的生长,具有产孢率高、耐热、耐酸、耐胆盐的特点,可与链霉素、氨苄西林同时使用,益生效果良好。因此,短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA可作为益生菌菌株应用于畜牧生产。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

1株牦牛瘤胃源无色杆菌的鉴定及生物学特性评价

【目的】对分离得到的1株牦牛瘤胃源菌株进行鉴定和生物学特性分析,开发新型动物源益生菌。【方法】通过显微镜和菌落观察试验菌株的形态学特征,采用VITEK2微生物生化自动鉴定仪鉴定其生化特性,并对其16S rDNA进行PCR扩增、相似性比对和遗传进化树构建。进一步对其生长性能、产酸能力、自凝聚、疏水性、溶血性和耐药性、耐酸耐胆盐及胃肠环境适应性等生物学特性进行研究。【结果】试验菌株经过形态学、分子鉴定和16S rDNA扩增鉴定为无色杆菌（Achromobacter）,命名为无色杆菌YKS2。该菌株2 h进入对数生长期,持续增长至20 h后开始出现平台期并缓慢下降。发酵48 h后pH未降低,说明该菌株不具产酸性能;自凝聚力为28.7%,表面疏水性在氯仿中达到77.1%,其他溶剂均>60.0%,平均达到60%以上,表明细菌有一定的黏附能力;在血琼脂平板培养48 h后未出现溶血环;通过K-B法测试了对14种抗生素的敏感性,发现其对常见的12种抗生素敏感;在pH 2.0的培养基中不能存活,在pH 4.0的培养基中存活率为61.4%;对0.1%和0.3%胆盐培养基有较高的耐受;在人工胃液重悬后培养3 h的细菌存活率为78.18%,在人工肠液中处理4、8 h后,与对照组相比,菌落数极显著增长（P<0.05）,说明YKS2菌株能够耐受一定程度的人工肠液。【结论】牦牛瘤胃源YKS2菌株为肠杆菌科无色杆菌亚种,无溶血、产酸及耐强酸特性,非耐药菌株,增殖性能较好,具有耐胆盐、耐胃肠液、自凝聚及表面疏水特性,可作为一种候选益生菌菌株进行进一步的评价和研究。     

Isolation and Identification of Enterococcus faecalis from Fur-bearing Animals

In order to obtain Enterococcus faecalis from fur animals and evaluate its prebiotic properties,in this study,Enterococcus faecalis was isolated from the feces of healthy adult fur-bearing animals (mink,fox,raccoon dog),identified by morphological observation,biochemical test and 16S rRNA sequence analysis.The growth curve,acid production capacity and antibiotic sensitivity of the Enterococcus faecalis isolates were measured to evaluate their probiotic properties.Some strains were selected to determine their tolerance to temperature,artificial gastric juice and artificial bile salt.The results showed that five strains were Gram-positive,and their biochemical characteristics were basically consistent with the standard strains of Enterococcus faecalis,and they were identified as Enterococcus faecalis by 16S rRNA sequence analysis.The five strains all entered the logarithmic phase at 2 h after culture,and entered the stable phase at 8-10 h,and had weak acid production capacity.The resistance rate of the isolates to tetracycline and levofloxacin was 100%,followed by penicillin (80%),erythromycin (80%),gentamicin (80%) and chloramphenicol (40%).All the isolates were sensitive to ampicillin and vancomycin.Enterococcus faecalis from mink,fox and raccoon dog had strong tolerance to temperature below 60 ℃,artificial gastric juice with pH>3.0 and 0.3%-0.5% concentration of bile salt,but poor tolerance to temperature above 70 ℃,and artificial gastric juice with pH<3.0.In conclusion,five strains of Enterococcus faecalis from fur animals (mink,fox,raccoon dog) were obtained in this study.The isolated strains propagated rapidly,which were suitable for colonization and played a prebiotic role in fur animals' intestines,and had good prebiotic characteristics and stress resistance.They could be used as candidate strains for animal microbiological agents for further study.     

毛皮动物源粪肠球菌的分离鉴定

为获得毛皮动物源粪肠球菌,并评价其益生特性,本研究从健康成年毛皮动物（水貂、狐狸、貉）粪便中分离粪肠球菌,通过形态学观察、生化试验和16S rRNA序列分析等方法进行种属鉴定。测定分离菌株生长曲线、产酸能力、抗菌药敏感性,并挑取部分菌株测定其对于温度、人工胃液、人工胆盐的耐受能力。结果表明,分离菌株中共5株为革兰氏阳性菌,生化特性与粪肠球菌标准株基本相符,且经16S rRNA序列分析鉴定为粪肠球菌。5株菌均于培养后2 h进入对数期,8~10 h进入稳定期,且具有弱产酸能力。分离菌株对四环素、左氟沙星耐药性强,耐药率为100%,其次为青霉素（80%）、红霉素（80%）、庆大霉素（80%）、氯霉素（40%）,对氨苄西林和万古霉素敏感。水貂、狐狸和貉源的粪肠球菌对于60 ℃以下温度处理、pH>3.0的人工胃液、0.3%~0.5%浓度的胆盐耐受能力较强,对70 ℃以上高温和pH<3.0的人工胃液耐受性差。综上所述,本研究共获得5株毛皮动物源（水貂、狐狸、貉）粪肠球菌,分离菌株繁殖较快,适合在毛皮动物肠道中定植并发挥益生作用,且具有较好的益生特性和抗逆性,可作为动物用微生态制剂的候选菌种进一步研究。     

犊牛源乳酸菌的筛选及抑菌性能研究

从15日龄健康犊牛的肠道黏膜和食糜分离得到31株革兰氏阳性、无芽孢乳酸菌。通过耐消化道环境筛选得到4株乳酸菌M5、M7、SB1和Z4,在pH=2条件下处理2h后的存活率分别为39.24%、28.08%、44.20%、23.28%,有较强的耐牛胆盐能力,经人工胃液处理后各菌的存活率均可达到30%以上,且活菌数超过108CFU/mL。能抵御体外模拟的胃肠道逆环境的影响,且对大肠杆菌的抑制作用明显,抑菌圈直径为16～21mm。     

猪饲料添加剂复合菌种的筛选和特性研究

根据微生态理论,文章选用嗜酸乳杆菌、纳豆芽孢杆菌、酿酒酵母作为制备复合微生物饲料添加剂的试验菌株。经一系列实验,结果表明:所选3种试验菌均能耐受0.3%的猪胆盐,对pH值为3.0的酸性环境也有较强的抵抗力,活菌数均在106CFU/ml以上;3种试验菌对人工胃肠液均有理想的耐受能力,能顺利通过胃、十二指肠到达小肠发挥作用,并能抑制猪体常见致病菌,是制备复合微生物饲料添加剂的优良菌种。     

饲用地衣芽孢杆菌抗逆性与益生性的体外评价

为了探讨地衣芽孢杆菌的抗逆性与益生性,研究通过5个试验评定地衣芽孢杆菌的耐高温、耐酸性、耐胆盐、抑菌性和黏附性,于85℃水浴分别处理地衣芽孢杆菌2.5 min、5 min、7.5 min模拟制粒条件;利用pH值分别为2,3,4的人工胃液模拟胃液环境;用0.3%的胆盐模拟肠液环境;抑菌试验测定地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制能力;以蛋鸡肠道上皮细胞为模型测定地衣芽孢杆菌的黏附能力。结果表明:85℃处理地衣芽孢杆菌2.5 min后活菌数最高,与对照组相比提高了2.25%(P>0.05);用pH值为2,3,4的胃液分别处理,与对照组相比活菌数分别提高0.77%(P>0.05)、1.54%(P>0.05)、1.34%(P>0.05);地衣芽孢杆菌发酵液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌环直径分别为0和16.16 mm;在黏附性试验中,每100个蛋鸡肠道黏膜上皮细胞上平均可以黏附27个地衣芽孢杆菌。说明制粒过程、人工胃液、人工肠液不影响地衣芽孢杆菌的活菌数,地衣芽孢杆菌对金黄色葡萄球菌有显著抑制作用,使金黄色葡萄球菌基本不能在蛋鸡消化道内定植。