用于SSR分析的大豆干种子DNA提取条件的优化

[目的]探讨适于SSR分析的大豆干种子DNA提取的最佳方法。[方法]以2个大豆品种的干种子为材料,分别采用改良SDS法和CTAB法提取大豆基因组DNA,用1％琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定其DNA在A230、A260和A280下的吸光值,根据A260／A230和A260／A280的比值检测DNA的纯度和浓度,并分别以两种DNA为模版进行SSR—PCR扩增。[结果]相同DNA提取条件下,SDS法提取DNA样品的纯度和浓度均高于CTAB法,SDS终浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时所提取大豆种子DNA的纯度及浓度最高,其DNA的0D260／0D280值为1．86,SDS法所提的DNA泳带分布较集中,无拖尾现象,其DNA浓度能够满足SSR扩增模板的需求。[结论]SDS浓度为2％（W／V）,水浴15min,氯仿／异戊醇抽提2次时提取大豆干种子DNA的浓度和纯度都较高,可以满足后续的各种分子生物学操作的要求。     

桫椤科植物DNA提取方法研究

[目的]探讨桫椤科植物DNA提取的最优方法。[方法]采用经过改良的SDS法和CTAB法对3种桫椤科植物进行基因组DNA提取,用紫外分光光度计测定其在波长260和280nm处的吸光值,并根据A260nm/A280nm的比值分析其DNA的纯度。将提取的基因组DNA进行叶绿体trnL-trnF非编码区序列扩增和ISSR分析。[结果]改进的CTAB法所提出的DNA较纯净,所获得DNA样品的A260nm/A280nm比值在1.750～2.050范围内,琼脂糖凝胶电泳图谱显示条带清晰。[结论]改良的CTAB法更适合桫椤科植物DNA的提取。     

中药材附子基因组DNA提取方法研究

[目的]为研究附子的遗传多样性、种质鉴定和指纹图谱的构建提供基本保证。[方法]以中药材附子药源植物的幼嫩叶片和块根为试材,分别采用SDS法、CTAB法和改良CTAB法从中药材附子药源植物中提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。[结果]对于新鲜叶子,采用SDS法提取DNA的A260/A280值最接近1.80,其次为改良CTAB。采用改良CTAB法从新鲜附子提取DNA的A260/A280值最接近1.80,表明改良CTAB法的除杂效果优于SDS法。SDS法适于杂质含量较低的试材。采用SDS法提取的DNA浓度最高,改良CTAB法次之,CTAB法最低;从鲜材料提取基因组DNA浓度比干材料高。[结论]3种方法均能提取到中药材附子药源植物的基因组DNA,SDS法对新鲜叶子提取的基因组DNA效果最佳,改良CTAB法对新鲜附子进行DNA提取的效果最好。     

雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

适合库尔勒香梨SCoT分析用的DNA提取方法研究

[目的]有效利用SCoT分子标记法对库尔勒香梨优良营养系中相关基因,获得高质量基因组DNA,对目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法进行比较研究,研究最适合库尔勒香梨SCoT分析的DNA提取方法.[方法]采用改良CTAB法,改良SDS法和试剂盒法从库尔勒香梨优良营养系的叶片中提取基因组DNA.采用NANODROP 2000核酸仪检测DNA浓度和纯度,并用1.2;琼脂糖凝胶电泳检测其完整性.以3种方法提取的基因组DNA为模板分别进行SCoT-PCR.[结果]改良CTAB法提取的基因组DNA的浓度为600 ～1 600 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230＜2.0,电泳结果显示:有一条清晰的带,有拖尾现象,点样孔发亮;改良SDS法提取的基因组DNA的浓度为600 ～ 900 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为1.9 ～2.2,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾现象只有一个点样孔发亮;试剂盒法提取的基因组DNA的浓度为100 ～ 200 ng/μL,A260/A280为1.8 ～2.0,A260/A230为2.2 ～2.5,电泳结果显示:一条清晰的带,无拖尾,无点样孔发亮现象,蛋白、多糖、酚类物质、RNA等去除彻底;以3种方法提取的基因组DNA为模板进行SCoT-PCR,PCR产物电泳结果显示:试剂盒法提取的DNA可以扩增出7条清晰明亮的带,改良CTAB法提取的DNA只能扩增出4条清晰的带,改良SDS法提取的DNA只能扩增出2条带.[结论]比较目前常用的3种提取植物基因组DNA的方法,综合成本高低,毒性大小,步骤多少,时间长短,试剂盒法是最适合提取库尔勒香梨优良营养系叶片基因组DNA的方法.     

豆制品转基因检测中不同DNA提取方法的比较

高品质的DNA是分子生物学研究的关键,大豆及豆制品中含有较多的蛋白质、酚类、糖类和脂类物质,从中提取高品质的DNA比较困难。拟采用十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)法、改良CTAB法、十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide,简称CTAB)法、SDS-聚乙烯吡咯烷酮(简称SDS-PVP)法和TIANGEN试剂盒法对大豆MON 89788、小黄豆、豆腐及大豆油中的DNA进行提取,对试验过程中的蛋白酶K、RNA酶A的浓度进行优化,并对DNA浓度及纯度进行综合分析。结果表明,对于大豆MON 89788、小黄豆和豆腐,用SDS法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.8左右,DNA产量最高,用改良CTAB法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.8左右,用TIANGEN试剂盒法提取的DNA的D_(260 nm)/D_(280 nm)值在1.75左右,2种方法的DNA产量均比SDS法低,而用SDS-PVP法与CTAB法提取的DNA含有较多杂质。综合分析可知,大豆油的最佳DNA提取方法为改良CTAB法。     

枸杞DNA的提取方法研究

[目的]寻求高质量枸杞DNA的有效提取方法,为开展我国枸杞种质资源准确的分子鉴定评价提供试验基础。[方法]针对枸杞组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,比较了常规十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法和改良CTAB法的处理效果。[结果]常规CTAB法提取DNA难以除去多糖类杂质,溶液极黏稠,致使移液枪吸取困难,取量不准;改良CTAB法提取DNA产率高,无明显降解,杂质少,OD260nm／OD280nm比值在1．80左右,表明DNA纯度高,污染少。通过基因组DNA—AFLP指纹图谱分析,改良CTAB法完全满足试验要求。并对改良CTAB法的关键步骤作了分析讨论。[结论]为枸杞DNA的有效提取提供了方法依据。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较(英文)

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适的DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法Ⅰ、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取的DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法Ⅰ提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法比较

[目的]对4种滑叶铁线莲基因组DNA提取方法进行比较研究,建立滑叶铁线莲最适DNA提取方法。[方法]以滑叶铁线莲叶片为材料,比较改良CTAB法I、改良CTAB法Ⅱ、改良CTAB法Ⅲ、改良SDS法这4种基因组DNA提取法在提取DNA纯度、浓度和提取时间等方面的不同。[结果]4种方法都可提取滑叶铁线莲基因组DNA。改良CTAB法I提取DNA纯度最高,但浓度最低且提取时间最长;改良SDS法提取DNA浓度最高,所需时间较短,但纯度较低;改良CTAB法Ⅲ提取所需时间最短。[结论]建立了铁线莲最适DNA提取方法,为运用分子生物学手段对其研究提供支持。     

羌活基因组DNA提取方法

[目的]探索一种用于RAPD分析的羌活基因组DNA提取方法。[方法]分别采取CTAB法S、DS法和改良的CTAB法提取羌活基因组DNA,通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳和RAPD分析对提取的DNA进行检测。[结果]3种方法均能有效地从羌活中获得较高产量的DNA,以改良的CTAB法所得的DNA纯度最高,此法提取的羌活基因组DNAOD260/OD280为1.8~2.0,DNA干重得率约为0.235μg/mg。[结论]改良的CTAB法更适于羌活基因组DNA的提取,可以完全满足RAPD扩增的需要。     

小麦不同部位DNA提取的比较研究

[目的]探讨小麦不同取材部位对DNA提取质量和产率的影响。[方法]分别以小麦的种子、根尖和幼嫩叶片为材料,采用改良CTAB法分别提取小麦3个部位的基因组DNA,用0．8％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量,用紫外分光光度计分别测定3个部位的DNA在A260和A280下的吸光值,根据A260/A280的值检测DNA的浓度和纯度,并以3个部位提取的DNA为模版进行RAPD扩增。[结果]采用小麦叶片提取DNA的产率最高,种子次之,根尖最低。3个部位提取的DNA纯度均相近,提取叶片获得的DNA浓度最大,为756μg/ml;其次是种子,为233μg/ml;根尖获得的DNA浓度最低,为90μg/ml。小麦不同部位提取的DNA模板对RAPD扩增没有明显影响,DNA浓度都能达到扩增的要求。[结论]小麦3个部位提取的DNA质量均较好,可以进行后续的酶切和PCR扩增等实验。     

刺山柑(Capparis spinosa L.)基因组 DNA提取方法的比较

[目的]为获得野生刺山柑DNA 提取的最佳方法.[方法]以野生刺山柑叶片为材料, 采用 CTAB 法、SDS-CTAB 法、SDS法和尿素法提取了3个不同地方采集的野生刺山柑DNA.[结果]通过A260/A280、琼脂糖电泳法对所提取的DNA质量进行检验,将其纯度、完整性、得率及耗时等方面进行比较.[结论]4种方法提取DNA结果比较显示,CTAB 法是野生刺山柑 DNA 提取的最佳方法.     

适于TAIL-CR模板的水稻基因组DNA提取方法的优化

[目的]筛选适合作为TAIL-PCR模板的水稻基因组DNA提取方法。[方法]采用5种方法提取水稻叶片基因组DNA,筛选出DNA纯度及浓度较高的、适合作为TAIL-PCR模板的水稻基因组DNA提取方法。[结果]改良的SDS法及CTAB法提取的基因组DNA纯度及浓度较高,效果明显优于脲法及简易法。以TAIL-PCR技术对选择的同一个含Ds元件的样品的5种提取方法的基因组DNA作为模板进行Ds侧翼序列的扩增,改良的SDS法及CTAB法得到的条带特异,这些产物经回收、纯化后可直接用于序列的测定。但考虑到CTAB价格比较昂贵,毒性较大,一般不主张采用。[结论]改良的SDS法提取的水稻基因组DNA最适作为TAIL-PCR的模板。     

豆象干标本基因组DNA提取方法的改进

[目的]筛选豆象干标本基因组DNA的有效提取方法。[方法]以口岸截获时间不等的豆象干标本为材料,在传统方法上加以改进,对从干标本中提取豆象基因组DNA的方法进行了研究。将其所提取的基因组DNA的纯度和浓度与CTAB法和SDS法进行了比较,并对DNA进行了完整性及PCR验证。[结果]与CTAB法和SDS法相比,豆象干标本提取方法提取的DNA OD260/OD280值均在1.7~1.9,且浓度合适。DNA完整性及PCR验证结果表明,豆象干标本提取方法比较适合后续PCR试验的开展。[结论]豆象干标本提取方法适合该研究中豆象干标本基因组DNA的提取,可推广到检验检疫工作中截获豆象的检疫鉴定中,以缩短检验检疫工作周期,提高检验检疫工作准确性。     

4种镰刀菌基因组DNA提取方法的比较研究

[目的]寻找一种简便、高效的基因组DNA提取方法,为进一步开展镰刀菌等丝状真菌的分子生物学研究提供科学基础。[方法]采用改良的CTABS、DS、高盐沉淀和SDS-CTAB 4种方法提取8个镰刀菌菌株的基因组DNA,并对其进行质量测定及PCR分析,比较不同提取方法的效果。[结果]4种提取方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为SDS、SDS-CTAB法、高盐沉淀法和CTAB法。其中采用SDS法可成功提取到所有供试菌株基因组DNA,而且DNA浓度和纯度均较高,RNA及其他杂质污染少。而高盐沉淀法和CTAB法提取到的基因组DNA不够完整或浓度较低。[结论]SDS法更适合于镰刀菌等丝状真菌基因组DNA的提取。