牛副结核菌感染地鼠的研究

将牛副结核菌 P_(18)株及 P_1株以不同剂量给不同日龄地鼠口服及腹腔接种证明。5mg 细菌腹腔接种30～45日龄的地鼠,能100%感染。地鼠口服细菌不能感染.认为地鼠在牛副结核菌的实验中可以作为模型动物。我们采用美国牛副结核菌株 P_(18)和本所分离的牛副结核菌株 P_1,对感染地鼠的途径、剂量、日龄进行了研究,现将结果报告如下。     

用ELISA检测牛副结核抗体时消除假阳性反应的方法

在前一报告中,采用副结核菌原生质抗原进行ELISA捡测牛副结核抗体时,由于副结核分枝杆菌与其他许多分支杆菌具有类属的抗原性,因此常出现假阳性反应而干扰对副结核抗体的检测。为此,我们参考Y. Yokomizo的方法,利用草分枝杆菌对待检血     

牛副结核病诊断与防控

<正>1病原及危害1.1病原牛副结核病的致病病原是副结核分枝杆菌，是一种宽在0.3～0.5μm之间，长在0.5～1.5μm之间的革兰氏阳性小杆菌，属于分枝杆菌科分枝杆菌属。副结核分枝杆菌无鞭毛、无荚膜、无芽孢、需氧。根据菌株特性及致病力可将副结核分枝杆菌分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。其中，造成牛副结核病的为Ⅱ型菌株。     

应用SDS-PAGE和凝胶扫描技术分析分枝杆菌菌体蛋白的特性

应用SDS-PAGE结合凝腔扫描技术分析了分枝杆菌和副结核分枝杆菌的菌体蛋白组分。结果,副结核菌、牛型结核菌、草分枝杆菌、耻垢分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶发分枝杆菌和禽型结核菌的组分数分别为43、35、35、29、22、29和25;分子量范围主要为13.7～72.7kd P18株、Teps株、316F株、Ⅱ株、2E株、P10株和吉林地方株P3副结核菌的组分数分别为42、34、38、32、21、36和37;分子量范围主要为13.7～78kd。根据不同种、不同株分枝杆菌菌体蛋白的特征性电泳图谱和凝胶扫描图,可进行分枝杆菌的分类和鉴定。本试验证明了吉林地方株P_3与国际标准株316F具有很大程度的同源性。     

一九八六年吉林省兽医科学研究所又取得了三项科研成果

于1986年底吉林省兽医科学研究所的科研人员研究的“牛副结核菌株鉴定方法的研究及我国副结核菌株 P_1、P_2、P_4、P_5、P_s 的鉴定”、“酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断猪棘球蚴病的研究”和“肉类沙门氏菌的酶联 A 蛋白染色快速检     

牛副结核病诊断技术的研究进展

牛副结核病是由副结核分枝杆菌引起的以牛慢性增生、顽固性肠炎、进行性消瘦及产奶量下降为特征的人畜共患传染病,可给畜牧业造成巨大的经济损失,目前还没有有效的治疗方案。早期快速、准确的诊断,对于预防和消除副结核病、保护人们的身体健康和促进我国畜牧业的健康高效发展具有十分重要的意义。随着研究的深入,针对副结核分枝杆菌的诊断技术不断被开发。本文从病原学、免疫学、分子生物学角度对牛副结核分枝杆菌的诊断技术进行了介绍,以期能够为牛副结核病的快速诊断和深入研究提供参考。     

抗副结核分枝杆菌细胞壁抗原单克隆抗体的制备和特性鉴定

用3M 氯化钾浸出的副结核分技杆菌细胞壁抗原(KCl-Ag)免疫的 BALB/C 小鼠脾细胞和 NS-1骨髓瘤细胞融合,制备出3株抗副结核分枝杆菌单克隆抗体—McAb-JM_1、JM_2、JM_3。用 ELISA 方法对3株单克隆抗体与副结核分枝杆菌及其他6种分枝杆菌不同抗原的反应性进行了研究.McAb-JM_1与副结核分枝杆菌不同菌株间的 KCl-Ag 和部分胞浆抗原(PPD)发生交叉反应;在其他分枝杆菌抗原中,仅与牛草分枝杆菌的 PPA 和禽型结核分枝杆菌 KCl-Ag 发生交叉反应.McAb-JM_2在副结核分枝杆菌中.与强毒株抗原发生较强反应.而与弱毒株抗原反应性较弱。McAb-JM_3在分枝杆菌中.除 Teps 株和偶发分枝杆菌抗原外.均发生交叉反应。本文讨论了这些单克隆抗体在副结核病血清学诊断及抗原分析中的意义和用途。     

抗副结核分枝杆菌单克隆抗体的产生及其部分特性鉴定

通过BALB/C小鼠脾细胞和NS-I/1骨髓瘤细胞融合产生了6株抗副结核分枝杆菌单克隆抗体。用ELISA方法对其中4株与副结核分枝杆菌及其它7种分枝杆菌的反应性进行了初步研究。McAb PTB1只与副结核菌苗株Ⅱ、牛分枝杆菌及无色分枝杆菌有微弱的交叉反应。Mc Ab PTB2、McAb PTB3和McAb PTB4与试验过的7种分枝杆菌都有程度不一的反应。     

10株牛源非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析

本研究应用结核分枝杆菌的16S rDNA序列分析方法,鉴定非结核分枝杆菌菌株。应用PCR方法从10株牛源非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段并测序。用DNA分析软件将所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列相比较,计算种间相似性,构建系统发育树,对菌株进行分类与鉴定。结果显示,10株牛源非结核分枝杆菌中浅黄分枝杆菌1株;偶发分枝杆菌1株;母牛分枝杆菌2株;新金色分枝杆菌4株;另有2株N8和N9分别与新金色分枝杆菌和偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。检测结果提示,非结核分枝杆菌在牛群中存在应引起重视,而且它们对人畜的致病性需要进一步研究,以便采取有效的防制措施确保人类及畜群的健康。     

结核病牛多重耐药非结核性分枝杆菌的分离鉴定

为了调查分析目前牛群中结核病的实际感染状况,试验采用组织病理学筛查,菌株分离,16S rRNA、hsp65和rpoB三基因分析鉴定,抗结核常用药物的药敏测定等方法对某大型屠宰牛场屠宰牛的结核感染状况进行了研究。结果表明:从1 576头屠宰牛中筛选出11个疑似结核菌感染样本,经培养最终获得8株分枝杆菌分离株,分别命名为G46、F90、F20、FJ、Y28D、Y28P、5S、Y5,其中G46、F90、F20、FJ、Y28D、Y28P为偶发分枝杆菌,5S为鸟结核分枝杆菌,Y5为M.conceptionense并且M.conceptionense首次从牛中分离鉴定;16S rRNA鉴定所有菌株均为结核分枝杆菌属,hsp65和rpoB序列分析比对鉴定G46、F90、F20、FJ、Y28D、Y28P与偶发分枝杆菌的相似性为100%,5S和Y5与鸟结核分枝杆菌和M.conceptionense的相似性为100%;除菌株F20外,其余菌株表现出多重耐药性。说明目前牛群中结核病感染状况不容乐观,需要重视。     

牛副结核病PCR检测方法的建立

根据GenBank上公布的副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因序列设计特异性引物,对牛副结核分枝杆菌进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,扩增的目的片段大小为246 bp,与预期扩增序列同源性为99.6%。该PCR检测体系的特异性强,不能在非副结核分枝杆菌 DNA中扩增出条带;敏感性高,最低检测的DNA含量为1 pg。该检测体系的成功构建为牛副结核病的检测、鉴定和流行病学调查提供了有力的技术支持。     

应用琼脂扩散试验诊断绵羊副结核的研究报告

副结核病是由副结核分枝杆菌引起的慢性传染病。主要侵害牛、绵羊、山羊、鹿等反刍动物。为了更好的防治本病,研究一种简便易行、特异性高的诊断方法是十分必要的。我们于1986年应用琼脂扩散试验做了绵羊副结核病的诊断研究,现报告如下。材料与方法菌种:牛副结核分枝杆菌P18菌株,由中国兽药监察所惠赠。琼扩抗原制备     

一例肉牛副结核分枝杆菌感染的诊断

2018年6月份,齐齐哈尔市某规模肉牛场1头肉牛发生以腹泻为主要症状的疾病,采用抗菌药物消炎治疗后病情好转,但腹泻反复发作,为了对该病例进行确诊,试验通过直肠采集病牛腹泻粪便,采用萋-尼氏染色及PCR方法进行诊断。结果表明:该腹泻病例为副结核分枝杆菌感染引起的牛副结核病。说明该肉牛场已存在牛副结核分枝杆菌,该肉牛场针对该病进行了排查,对检测为副结核分枝杆菌阳性牛进行了隔离、淘汰。     

牛副结核分枝杆菌实时荧光定量 PCR 检测方法的建立

根据GenBank上公布的牛副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因保守区域序列设计合成1对特异性引物,建立了一套SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测牛副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis)的方法。以实验室构建的牛副结核分枝杆菌pMD-ISMav2阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,其相关系数为0.999。以构建的标准品为模板,进行了特异性和敏感性试验。结果显示,该方法检测布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌DNA均为阴性;最低可检测到相当于每微升1.96×10¹拷贝数的标准品阳性质粒。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感和快速等优点,可用于牛副结核杆菌病的监测。     

牛副结核病的危害及其防控措施

由副结核分枝杆菌引起牛的副结核病常导致感染牛的慢性增生性肠炎,以及体重、产奶量等生产性能下降,给畜牧业带来了严重的经济损失,目前尚无有效治疗药物。人们常采用不同的检测技术定期对牛群进行监测、淘汰活动带菌期的牛、对牛群进行疫苗接种、采用生物安全防控等措施比较有效地避免了副结核分枝杆菌在牛群中的传播。文章主要从副结核分枝杆菌背景,牛副结核病的危害及防控措施三个方面进行了综述,以期为牛副结核病的防控提供思路。     

14株非结核分枝杆菌16S rRNA基因序列分析

为了对非结核分枝杆菌菌株进行分类与鉴定,试验采用PCR方法从14株非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5'端片段,并对所得DNA基因片段进行测序;同时用DNAMan软件对所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列进行比较,计算种间相似性,构建系统发育树。结果表明:14株非结核分枝杆菌中有浅黄分枝杆菌2株、偶发分枝杆菌3株、母牛分枝杆菌2株、新金色分枝杆菌4株,另有3株分别与Mycobacterium sp.Myc399、新金色分枝杆菌与偶发分枝杆菌有较好的亲缘关系。     

牛副结核检疫中的非特异性干扰

给犊牛接种各种分枝杆菌，然后以副结核ＰＰＤ进行变态反应试验，观察各分枝杆菌感染对副结核变态反应的干扰；从各种分枝杆菌感染牛群采取血清进行副结核ＥＬＩＳＡ检测，以观察各分枝杆菌血清对牛副结核ＥＬＩＳＡ的干扰。结果：多种分枝杆菌，特别是鸟胞内分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌的感染可干扰副结核变态反应；部分结核牛血清干扰副结核ＥＬＩＳＡ的检测     

高分辨率熔解曲线快速检测结核分枝杆菌对链霉素耐药情况的研究

探讨高分辨率熔解曲线（HRM）技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测;以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析,判断菌株是否对链霉素耐药;以药敏结果为标准,应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率;Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示,84株菌株中有20株对链霉素耐药,64株为敏感株;HRM检测结果显示,24株菌株对链霉素耐药,60株为敏感株;以药敏结果为参照,HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%,特异性为85.9%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性,具有较好的灵敏度,在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。     

副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的表达及在间接ELISA中的初步应用

本研究的目的是探索副结核分枝杆菌特异性蛋白MAP0862在牛副结核病血清学诊断中的作用,建立牛副结核病特异性ELISA诊断方法。将通过原核表达获得的副结核特异性蛋白MAP0862纯化并定量后作为包被抗原,经过一系列条件优化后初步建立了牛副结核病间接ELISA诊断方法。使用牛副结核阳性血清、牛布病阳性血清、牛结核阳性血清、卡介苗免疫牛血清、牛大肠杆菌阳性血清以及健康阴性牛血清对该方法的验证表明其具有良好的特异性。使用该方法对300份临床血清进行检测,结果表明该方法与IDEXX副结核检测试剂盒的符合率为94.3%。基于副结核特异性蛋白质MAP0862建立的间接ELISA诊断方法能有效检测牛副结核病。     

14株非结核分枝杆菌16SrRNA基因序列分析

为了对非结核分枝杆菌菌株进行分类与鉴定,试验采用PCR方法从14株非结核分枝杆菌中扩增16S rDNA基因5′端片段,并对所得DNA基因片段进行测序;同时用DNAMan软件对所获得的序列与GenBank中分枝杆菌序列进行比较,计算种间相似性,构建系统发育树.结果表明:14株非结核分枝杆菌中有浅黄分枝杆菌2株、偶发分枝杆...