黄芪多糖对新支二联疫苗免疫雏鸡的免疫调节作用

为探讨黄芪多糖(APS)对免疫雏鸡的免疫调节作用和机理,本研究将150羽14日龄罗曼公鸡随机均分成3组,用鸡新支二联疫苗(ND-IB)免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的APS溶液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续3d。免疫后第10d～60d,每隔10d每组随机取10只鸡,用微量法测定血清中抗新城疫病毒血凝抑制(HI)抗体效价;每组随机取5只鸡,用流式细胞双染色法检测外周血CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+淋巴细胞百分数,用ELISA方法测定空肠黏液中SIgA的含量,用免疫组织化学法测定盲肠扁桃体和十二指肠绒毛中SIgA阳性细胞数。结果显示,APS组的HI抗体效价、CD3+淋巴细胞数、CD4+/CD8+比值、SIgA的含量和SIgA阳性细胞数都明显高于对照组,且低剂量的APS的效果优于高剂量。本实验表明合适剂量APS对ND-IB疫苗的免疫效果有明显的增强作用。     

4种多糖对鸡脾脏淋巴细胞增殖和一氧化氮分泌的影响

将5种浓度的黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、牛膝多糖(ARPS)和山药多糖(CYPS)分别加入到培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养48 h时用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。将3种浓度的APS、IRPS、ARPS和CYPS分别加入到培养的淋巴细胞中培养24 h时收集细胞培养上清液,测定一氧化氮含量和一氧化氮合酶的活力。结果表明,适宜浓度的4种多糖均能提高细胞培养液中一氧化氮的含量、一氧化氮合酶的活力和促进淋巴细胞增殖,且4种多糖效果相当,这可能是多糖提高细胞免疫功能的机理之一。     

半滑舌鳎肠黏液非特异免疫相关酶对黄芪多糖的免疫应答

采用单因素6水平3重复的试验方法,通过探讨半滑舌鳎肠黏液溶菌酶(LSZ)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)等对黄芪多糖(APS)的免疫应答情况,确定APS对半滑舌鳎肠黏液免疫力的作用效果以及其发挥作用的较佳剂量。结果显示,半滑舌鳎肠黏液的非特异性免疫活性对低剂量APS(300 mg/kg或600 mg/kg)的免疫应答表现为随黄芪多糖(APS)添加剂量的增加而增强,对中高剂量的APS(900 mg/kg≤APS≤1 800 mg/kg)的免疫应答则表现为随APS添加剂量的增加,其达到较好免疫效果的时间越早,随后则表现为较为强烈的抑制作用,且与APS的添加剂量呈正相关。可见,APS对半滑舌鳎肠黏液非特异免疫活性在低剂量时具有改善和增强的作用,而较高剂量也会有抑制作用。从节约成本与增强半滑舌鳎肠黏液非特异免疫活性的角度来看,半滑舌鳎人工配合饵料中添加APS的较佳剂量应为600 mg/kg。     

板蓝根多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

150只14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新城疫传染性支气管炎二联(Newcastle disease-infectious bronchi-tis,ND-IB)弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的板蓝根多糖(Isatis root polysaccha-ride,IRPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后7、14、21、28、354、2 d各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价;于免疫后10、20、30、40、50 d每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用流式细胞仪双染色法检测CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞含量,并放血致死称取体质量和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,板蓝根多糖高、低剂量组的HI抗体效价、CD4+/CD8+比值和免疫器官指数均明显高于对照组;提示板蓝根多糖对新城疫疫苗的免疫效果有明显的增强作用。     

半滑舌鳎体表黏液非特异性免疫相关酶对黄芪多糖的免疫应答

采用单因素6水平3重复的试验方法,通过探讨半滑舌鳎体表黏液溶菌酶(LSZ)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)等对黄芪多糖(APS)的免疫应答情况,确定APS对半滑舌鳎体表黏液免疫力的作用效果及其发挥作用的最佳剂量。结果表明,半滑舌鳎体表黏液的非特异性免疫活性对低剂量APS(300~600 mg/kg)的免疫应答表现为随APS添加剂量的增加而增强,对中高剂量的APS(900~1 800 mg/kg)的免疫应答则表现为随APS添加剂量的增加,达到较好免疫效果的时间就越早,随后则表现为较为强烈的抑制作用,且与APS的添加剂量呈正相关。可见,APS对半滑舌鳎体表黏液非特异免疫活性具有改善、增强亦或抑制的作用。从节约饵料成本与增强半滑舌鳎体表黏液非特异免疫活性的角度来看,半滑舌鳎人工配合饵料中添加APS最佳剂量应为600 mg/kg。     

山药多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

将150羽14日龄蛋公鸡随机分成3组,每组50羽,用新支二联弱毒苗点眼、滴鼻免疫的同时2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的山药多糖（CYPS）溶液,对照组肌肉注射生理盐水。1次／d,连续3d。分别于免疫后第10,20,30,40,50,60天每组随机抽取8只蛋公鸡,翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制抗体效价;每组再随机抽取5只蛋公鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用MTT法测定淋巴细胞增殖的动态变化,用流式细胞仪双染色法检测CD3^＋、CD3^＋CD4^＋和CD3^＋CD8^＋淋巴细胞含量。试验结果表明,山药多糖高剂量组的血凝抑制抗体效价、CD4^＋／CD8^＋比值明显高于对照组,并可显著促进T淋巴细胞增殖,提示山药多糖对鸡新城疫疫苗的免疫效果有明显增强作用。     

玉屏风多糖对小鼠肠黏膜免疫应答和免疫损伤的调控作用

为研究玉屏风多糖对肠黏膜免疫应答和免疫损伤的调控作用,本试验以黄芪多糖为对照药物,以正常小鼠和免疫抑制小鼠为动物模型,150只SPF小鼠随机分为空白对照组、环磷酰胺免疫抑制对照组、玉屏风多糖治疗组、玉屏风多糖阳性对照组和黄芪多糖对照组,每组30只。多糖剂量为200mg/Kg/d,连续灌服7d,环磷酰胺剂量为80mg/Kg,隔日腹腔注射。检测SIgA、IL-2、TGF-β1和IL-6以及小肠黏膜相关淋巴组织的变化。结果发现,玉屏风多糖和黄芪多糖均可显著提高小鼠SIgA、IL-2、TGF-β1和IL-6水平(P<0.05或P<0.01),小鼠肠上皮细胞增生,杯状细胞增多,肠绒毛长度、宽度和隐窝深度均显著增加(P<0.05或P<0.01),肠上皮细胞间淋巴细胞和黏膜固有层淋巴细胞数量明显增多(P<0.05或P<0.01),PP结体积增大,淋巴细胞增生。与黄芪多糖比较,玉屏风多糖对肠黏膜免疫应答的正向调节作用更为明显。对免疫抑制小鼠,玉屏风多糖可有效拮抗环磷酰胺诱导的SIgA降低(P<0.05),并可通过调节TGF-β1(P<0.05)和IL-6(P<0.01)水平,调控Th1/Th2 漂移状态,缓解环磷酰胺所致的免疫损伤,对免疫抑制小鼠小肠黏膜相关淋巴组织也有明显的保护和恢复作用。结果表明,玉屏风多糖可从多方面调控小鼠肠黏膜的免疫应答,可有效增强肠黏膜免疫功能,缓解和改善免疫抑制小鼠肠黏膜免疫屏障的损伤。     

中药成分对培养的鸡脾脏淋巴细胞增殖的影响

为筛选增强免疫作用较好的中药成分和研制新型复方中药成分免疫增强剂,比较了4种浓度的当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶     

山药多糖组分对小鼠免疫功能的影响

探讨山药多糖不同活性组分对淋巴细胞功能及体内免疫活性的影响。采取一步醇沉和分级醇沉法提取4种山药多糖CYPSt、CYPS40、CYPS60和CYPS80,体外试验采用MTT法测定4种山药多糖活性组分单独和协同Con A对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响;体内试验分别对健康小鼠和免疫抑制模型小鼠分组后腹腔注射不同山药多糖,试验结束取脾脏称重计算脾脏指数。结果表明,CYPSt、CYPS60和CYPS80均具有一定的促进淋巴细胞增殖和增加脾脏指数的作用。综合评价CYPS80增强小鼠脾脏淋巴细胞功能和体内免疫活性的作用最强,可以作为进一步研制成免疫增强剂的候选药物。     

硫酸化黄芪多糖对IBD疫苗接种雏鸡免疫水平的影响

200只14日龄雏鸡随机均分为9组,6个试验组分别肌肉注射高、低剂量的3种硫酸化黄芪多糖(sAPS)即sAPS40、sAPS50和sAPS60,2个多糖对照组注射高、低剂量的未修饰黄芪多糖(APS),无佐剂对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d,第4天用鸡传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫,2周后二免。分别于首次免疫后第7,14,21,28天翼静脉采血,用琼脂扩散法测定血清抗体效价;于首次免疫后第14,21,28和35天心脏采血测定T淋巴细胞增殖。结果表明,3种修饰多糖均能显著提高血清抗体效价,促进T淋巴细胞增殖,作用强于未修饰多糖,且有一定的量效关系,低剂量的效果优于高剂量。综合评价以sAPS60的效果最好,可以作为新型免疫佐剂的候选。     

3种植物多糖对鸡外周血和脾脏淋巴细胞体外增殖作用的影响

本试验旨在比较3种植物多糖对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞体外增强免疫活性的研究.通过酶学检测法测定3种植物多糖对鸡胚成纤维细胞的安全浓度,MTT法比较3种植物多糖单独刺激和PHA协同刺激对鸡外周血T淋巴细胞增殖指数的影响,同时比较3种植物多糖单独刺激及与LPS协同刺激对鸡脾脏B淋巴细胞增殖率的影响.结果显示,黄芪多糖和桑叶多糖具有较高的细胞安全浓度,在64~512 μg/mL时,3种植物多糖对鸡外周血T淋巴细胞和脾脏B淋巴细胞的增殖作用较强.结果表明,3种植物多糖对鸡外周血和脾脏淋巴细胞都有不同程度的体外增殖作用,其中黄芪多糖的增殖作用最强,桑叶多糖其次,山药多糖最差.     

10种中药成分对CEF的增殖和抵抗NDV感染的影响

分别将5种浓度的黄芪多糖(APS)、当归多糖(CAPS)、淫羊藿多糖(EPS)、板蓝根多糖(IRPS)、蜂胶多糖(PPS)、黄芪黄酮(AF)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)10种中药成分加入到培养24h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，再培养12h后接种新城疫病毒(NDV)，于病毒接种后72h用中性红染料吸收法测定CEF活性以评价各中药成分对细胞增殖及其抵抗病毒感染的影响。结果表明，10种中药成分均能不同程度地促进细胞增殖和抵抗病毒感染，前者以AF、APS、IRPS、PF、和GS的作用较强，后者以GS和IRPS的作用较强，部分中药成分在两方面作用中各有所长，且有一定的量效关系。     

3种中药及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究

为研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,本试验在研究板蓝根、黄芪和青蒿及其提取物对Marc-145细胞最大安全浓度的基础上,研究3种中药提取物体外抗PRRSV的作用。结果显示,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素3种中药提取物对Marc-145细胞安全浓度分别为为0.03、0.03和0.06 mg/mL,板蓝根、黄芪和青蒿3种中药单方的安全浓度分别为6.25、6.25和3.13 mg/mL。在体外抗PRRSV作用的试验中,3种中药单方中黄芪的阻断作用最强,能达到100%的保护率,中药提取物中板蓝根多糖对PRRSV的阻断作用最强,在浓度为0.031 mg/mL时对细胞保护率能达到48.03%,青蒿素最差,在0.16 mg/mL时就已不具有阻断作用。板蓝根多糖对病毒不具有直接杀灭作用,黄芪多糖和青蒿素在浓度为0.32 mg/mL时,保护率都是20%左右;黄芪的直接杀灭作用保护率为100%,且非常稳定,青蒿在浓度较高时还有促进细胞生长的作用,但稳定性差,随浓度降低其保护率迅速下降。在对病毒的抑制作用试验中,3种中药提取物的作用相当,浓度为0.01 mg/mL时,板蓝根多糖、黄芪多糖和青蒿素多糖对细胞的保护率分别为24.57%、24.30%和26.20%;而3种中药单方的细胞保护率都能达到100%甚至以上。综合3种作用方式可知,3种中药提取物中,黄芪多糖的抗PRRSV作用最好,青蒿素次之,板蓝根多糖最差;3种中药单方中黄芪的效果最好,青蒿最差。因此,可知黄芪及其提取物具有非常强的抗PRRSV作用,可对其进行进一步研究,以供临床上使用。     

Antiviral Effects of Three Chinese Herbal Medicine and Their Polysaccharides on Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) in vitro

In order to figure out the antiviral effects of Radix Isatidis,Astragalus herb,Artemisia annua and their polysaccharides on porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) in vitro,the antiviral activity of the three Chinese herbal medicine and their polysaccharides,Isatis root polysaccharide (IRPS),Astragalus polysaccharides (APS) and artemisinin maximum were evaluated by adding to Marc-145 cell cultured with PRRSV respectively.The results showed that the safety concentrations of IRPS,APS and artemisinin to Marc-145 cells were 0.03,0.03 and 0.06 mg/mL;The safety concentrations of Radix Isatidis,Astragalus herb,Artemisia annua to Marc-145 cells were 6.25,6.25 and 3.13 mg/mL.Almost all the cells (about 100%) were protected from PRRSV when Astragalus herb were added early to PRRSV,while IRPS had the same effect on PRRSV among three extracts with 48.03% cells were protect and artemisinin could not protect cells when the concentration was lower than 0.16 mg/mL.IRPS had no effect on PRRSV while APS and artemisinin got a protection rate for cells at about 20% when simultaneously added with PRRSV,under the concentration of 0.32 mg/mL.In terms of simultaneously added with PRRSV,Chinese herb Astragalus could exterminate the virus directly with its protect cells coming to 100% and more.Artemisia annua could promote the growth of cells but its stability was weak.Its protection rate decreased as its concentration reducing.In the experiment of exploring the antivirus effect of infected cells,polysaccharides of these three herbs had nearly the same effect.When in a concentration of 0.01 mg/mL,IRPS,APS and artemisinin respectively protected 24.57%,24.30% and 26.20% cells.However,the protection rate to cells of the three herbs themselves was respectively up to 100% or more.In conclusion,in the extracts of the three herbs,APS had the best antiviral effect,followed by artemisinin and IRPS,and in the single herbal medicines,Astragalus was the best and Artemisia annua was worst.Therefore,Astragalus and APS had the best antiviral effect on PRRSV.It needed more research on Astragalus and APS,and try to use them as antiviral drug in clinical application.     

猪源约氏乳酸杆菌JJB3和枯草芽孢杆菌JS01对仔猪肠道分泌型免疫球蛋白A和菌群的影响

本文旨在研究不同来源的益生素对仔猪分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和主要肠道菌群的影响.选取初生仔猪72头,分别饲喂猪源约氏乳酸杆菌JJB3和枯草芽孢杆菌JS01,检测粪样SIgA和主要肠道菌群.结果表明:采用双抗夹心ELISA方法检测粪样SIgA,不同处理组仔猪的SIgA水平没有显著差异,随日龄增加而降低,但是,益生素可以延缓仔猪断奶前抗体水平下降的速度,约氏乳酸杆菌的效果优于枯草芽孢杆菌.35日龄时,对照组大肠杆菌数量显著高于约氏乳酸杆菌组(P<0.05);在7、14和29日龄时,试验组梭菌的数量显著高于对照组(P<0.05);在7和21日龄时,约氏乳酸杆菌处理组消化球菌显著高于对照组(P<0.05);约氏乳酸杆菌组的肠球菌数量只是在29日龄显著高于对照组(P<0.05);试验组乳酸杆菌的数量只是在7日龄显著高于对照组(P<0.05);双歧杆菌在不同处理组之间都没有显著差异.添加这2种益生素均可以显著提高仔猪日增重和降低腹泻指数(P<0.05).该试验结果说明这2种益生素虽然对初生仔猪肠道SIgA没有显著影响,但是能增加肠道厌氧菌的数量,并有效控制仔猪腹泻和提高仔猪日增重.     

芪蓝四君子汤对雏鸡小肠IgA分泌细胞和SIgA(分泌型IgA)的影响

雏鸡在新城疫La Sota系冻干苗进行口腔免疫时,分别按0.125,0.250,0.500 g/mL 3个剂量灌服芪蓝四君子汤1 mL,连续10 d。于20,40,60日龄时剖杀摘取各段肠管,免疫组织化学方法检测十二指肠、空肠、Peyer's斑单位面积IgA分泌细胞的变化,同时通过ELISA方法测定空肠中SIgA的含量。结果表明,与对照组相比,芪蓝四君子汤能显著提高雏鸡小肠IgA分泌细胞的阳性表达率及空肠SIgA抗体水平,揭示芪蓝四君子汤能提高新城疫的免疫原性,增强雏鸡的黏膜免疫力,是有效的口服佐剂。     

太子参多糖对环磷酰胺所致肠道黏膜损伤小鼠SIgA、IL-2、IL-6含量的影响

试验将36只18~22 g雄性昆明小鼠随机分为空白对照组、太子参多糖对照组(400 mg/kg体重)、环磷酰胺(CY)模型组、太子参多糖低、中、高剂量组(100、200、400 mg/kg体重),上述各组分别灌喂蒸馏水和多糖,连续灌胃19 d,第20天,除空白对照组和太子参多糖对照组小鼠腹腔注射生理盐水外,其余4组均腹腔注射CY(100 mg/kg体重),24 h处死小鼠,取十二指肠和回肠,放免法测定分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)的含量,研究太子参多糖对CY所致肠道黏膜损伤小鼠中SIgA、IL-2、IL-6分泌的影响。结果显示,与CY模型组相比,太子参多糖高、中剂量组十二指肠SIgA含量显著升高(P<0.05),太子参多糖高剂量组回肠SIgA含量极显著升高(P<0.01);太子参多糖高剂量组中十二指肠和回肠IL-2含量显著升高(P<0.05),十二指肠IL-6含量极显著升高(P<0.01),回肠IL-6含量显著升高(P<0.05)。上述结果表明太子参多糖在一定程度上能颉颃CY所致的肠道黏膜免疫损伤。     

Effect of Pseudostellaria Polysaccharides on SIgA,IL-2 and IL-6 Contents of Intestinal Mucosal Injured Mice Caused by Cyclophosphamide

Effects of Pseudostellaria polysaccharides on the contents of intestinal mucosal SIgA, IL-2 and IL-6 in mice were reported in this paper.36 Kunming male mice with 18 to 22 g were randomly divided into six groups, blank control group, Pseudostellaria polysaccharides control group, cyclophosphamide (CY) model group, and Pseudostellaria polysaccharides low, middle, high dose groups.Each mouse in Pseudostellaria polysaccharides control group and Pseudostellaria polysaccharides low, middle, high dose groups was respectively treated with polysaccharides at the dose of 400, 100, 200 and 400 mg/kg body weight by intragastrical treatment for 19 continuous days, CY was given to each mouse in CY model group and Pseudostellaria polysaccharides low, middle, high dose groups by intraperitoneal injection with 100 mg/kg body weight in the 20th day, duodenum and ileum samples were collected from mice after 24 h, and SIgA, IL-2 and IL-6 contents were determined.The results showed that SIgA contents in duodenum were significantly increased (P<0.05) in Pseudostellaria polysaccharides middle and high dose groups compared to CY model group, SIgA contents in ileum were extremely significantly increased (P<0.01) in Pseudostellaria polysaccharides high dose group compared to CY model group.IL-2 contents in duodenum and ileum were significantly increased (P<0.05), IL-6 contents in duodenum were extremely significantly increased (P<0.01), IL-6 contents in ileum were significantly increased (P<0.05) in Pseudostellaria polysaccharides high dose group compared to CY model group.It was concluded that Pseudostellaria polysaccharide could antagonize intestinal mucosal injury caused by CY.     

10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响

将鸡胚成纤维细胞(CEF)分别与当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪黄酮(AF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)等10种中药成分一起加入到96孔细胞培养板中培养，分别在培养24、36、48、60、72h时用MTT法测定中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，所有中药成分均能显著促进CEF增殖，并有一定的量效和时效关系。