家蚕蛹到蛾期蛋白SDS—PAGE电泳观察

蛹到蛾期蛋白SDS-PAGE电泳约有17条左右的蛋白带,蛋白组分有一定变化。主要观察到:1)分子量约为220kD的蛋白带在化蛹第2天出现,并随着蛹期发育至羽化,其浓度不断的增加。2)分子量约为70kD的蛋白带,化蛹第1天是一条带,第2天至羽化其蛋白组分有变化。3)分子量约为29kD的蛋白带随着蛹期发育到羽化,浓度逐渐减弱。     

新编养蚕学大要

第3章 蚕和蚕品种 第1节 概论 家蚕属节肢动物,昆虫纲,鳞翅目,蚕蛾科,蚕蛾属。如前述,家蚕是完全变态昆虫,即经过卵(胚子)—幼虫(蚕儿)—蛹—蛾(成虫)四个时期。 蚕卵由母蛾产下,卵内的胚子吸收消耗卵内的营养物质发育,孵化成蚁蚕。孵化后,幼虫从桑叶中吸收种种所需的营养物质供发育、生长。成熟即吐丝结茧。在茧内蜕皮化蛹。蛹期是幼虫期器官向成虫器官变化的时期,即是幼虫器官组织崩坏,成虫器官形成的时期。成虫是生殖期,一些必要的生殖器官充分发达,完全不吸收营养物质,生殖结束后不久即死亡。     

柞蚕卵黄磷蛋白的鉴定、纯化及其在卵形成和胚胎发育中的变化

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳、离子交换纤维素柱层析和薄层扫描等方法鉴定、纯化了柞蚕卵黄磷蛋白,并考察了该蛋白质在卵形成和胚胎发育期间的变化.结果表明:(1)发育卵巢和成熟卵内存在着一种卵黄磷蛋白(Vtn),其前体是雌蛹血淋巴内的卵黄原蛋白(Vg),该蛋白质具有雌特异性.(2)Chino等的方法也适用于以柞蚕卵为材料纯化Vtn,初步纯化的Vtn亚单位分子量是200KDa.(3)后蛹期,发育卵巢中可溶性总蛋白和Vtn的相对百分含量都迅速上升,至卵粒成熟期达最大值.(4)胚胎发育前期,卵可溶性总蛋白和Vtn的相对百分含量基本维持原水平;胚胎发育后期,二者都急剧地减少;孵化时卵可溶性总蛋白含量和Vtn的相对含量分别降至刚产下时的50%和10%以下.     

家蚕卵和幼虫、蛹、蛾血液蛋白成分的电泳观察与比较

家蚕卵和幼虫、蛹、蛾血液蛋白成分的电泳观察与比较张剑韵，黄龙全，徐永镇（安徽省农业大学蚕桑系）家蚕卵黄蛋白质是胚胎发育的重要素材和能源物质。它的形成主要通过卵母细胞从雌蛹血液中摄取并积累。探讨家蚕一生主要蛋白成分的变化和生理功能具有很重要的意义。但这...     

绢丝昆虫柳蚕的生物学特性和卵黄原蛋白鉴定

柳蚕 (ActiasseleneH櫣ｂｎｅｒ)是一种野生绢丝昆虫。通过室内饲养的方法 ,观察了柳蚕的生物学特性和卵孔的显微特征 ,在合肥地区的幼虫 4眠 5龄 ,二化性 ,蛹滞育 ,染色体n =31,全龄期达 4 0d以上。通过SDS PAGE和Westernblotting鉴定 ,柳蚕的卵黄原蛋白是由大小 2个亚基组成 ,分子量分别为 175kD和 4 5kD ,存在组织、时期、性别表达的差异性     

消特灵喷施柞叶对柞蚕防病效果的探讨

柞蚕1~3龄用消特灵主剂0.15%,4~5龄用消特灵主剂0.3%(不加辅剂)药液喷施柞叶对柞蚕防病效果好,蚕期血液型脓病发病率下降18%,镜检各龄迟眠蚕、弱小蚕、病蚕、死笼茧、病蛹,制种后全部镜检母蛾,微粒子孢子检出率大大下降,蛾期微粒子孢子检出率降低16%,蚕期无毒性反应,大大提高结茧率、上茧率、茧层率、良卵率,对单蛾产卵数影响不明显。     

防止种茧后期死蛹 提高蚕种繁育系数

死蛹分前期死蛹和后期死蛹。前期死蛹是指熟蚕上蔟后至第7～9天(一般以茧质调查为界)发生的死蛹,蛹死于茧内。前期死蛹发生的原因主要是由于大蚕期或上蔟时感染病原引起,对后期死蛹影响较大。后期死蛹是指从茧质调查结束(开始削茧鉴蛹)到化蛾这段时间发生的死蛹。主要有各种败血蛹     

蛹蛾期不同冷藏处理对桂蚕二号亲本产卵的影响

为明确家蚕原种生产中蛹蛾期最佳低温保护法,调查了桂蚕二号（8810·932）×（8711·7532）4个亲本在蛹期和蛾期冷藏对不受精卵率和良卵率的影响,结果表明：桂蚕二号各亲本品种在蛹期和蛾期不同冷藏处理,其不受精卵率和良卵率在处理间的差异都达到显著性水平。试验证实8810的雌蛾不宜冷藏;932在雌蛹触肢着色期不宜冷藏...     

家蚕自交系的研究

用80KRγ—射线辐照羽化前2—3日的雌蛹,使卵母细胞灭活,羽化后与供试蚕品种雄蛾交配,借助雌蛾卵实现双精雄核发育,产卵后再以高温适当处理,其后代均为雄蚕,均表现父本性状。以后连续多次自交继代,形成自交系,其个体比常规的蛾区内杂交后代个体相对纯化,大大加快了纯合进度,为家蚕育种方法的改进及对基因表达、性状形成、杂种优势机理等理论问题的研究提供了新的途径。     

家蚕突变新小卵(sm-n)的特异性状及其遗传

家蚕卵形突变sm-n(new small egg)为家蚕小卵突变的新类型,与前人研究报道的几种家蚕小卵突变sm、sm-2、sm-3、emi等明显不同,其主要特征为：同一母蛾产卵分离出正常型卵和小卵两种,其中小卵大小不一,为不受精卵,而正常型卵孵化与生长均正常。解剖母蛾观察卵巢管,大小卵粒在每根卵巢管里随机排列,个体间出现小卵的比例有较大差异(分布在20%～90%之间),但总体上小卵比正常卵多,且在越往卵巢管的后端小卵的比例越大,小卵的排列不规则;交配产卵后,初步统计发现小卵百分率越大,则遗腹卵有越多的倾向。同时在解剖过程中发现此小卵系统和无卵突变系统(sm~n)的母蛾卵巢管有增多现象,每个卵巢发生4～6条,每蛾共8～12条卵巢管。用正常系统C108与新小卵杂交,进行遗传分析,结果：新小卵为隐性遗传基因支配,遵循伪母性遗传模式。     

柞蚕卵黄原蛋白的合成与转运

本文用免疫扩散和脂蛋白染色方法证实柞蚕印黄原蛋白系雌性所特有.卵黄原蛋白的免疫学一致性也得到确定.柞蚕卵黄原蛋白在进人预蛹期开始出现于雌体血淋巴中.在整个蛹滞育期间.卵黄原蛋白含量约为血淋巴总蛋白的50%;在成虫发育期印黄原蛋白含量剧降,与此同时.卵黄蛋白含量则激增,约占卵黄总蛋白的80%.卵巢摘除导致血淋巴印黄原蛋白含量剧增.     

二化性家蚕卵低温和常温催青的胚胎期蛋白质表达差异分析

家蚕二化性品种的滞育性受上代胚胎期环境条件调控,查找家蚕胚胎期滞育关联蛋白,可为最终阐明家蚕滞育的分子机制提供实验依据。以家蚕二化性品种秋丰的蚕卵为材料,分别在25℃常温和18℃低温条件下催青,提取胚胎不同发育时期蚕卵的易溶性和难溶性蛋白,采用蛋白质双向电泳(2-DE)和图像分析技术,研究蚕卵在胚胎不同发育时期的蛋白质差异表达谱。在易溶性和难溶性蛋白图谱中分别检测到5个和7个差异显著的蛋白点。对这些差异蛋白点进行质谱鉴定,有8个蛋白点得到可信的最佳匹配蛋白报告,共鉴定出卵特异蛋白、卵黄原蛋白、表皮蛋白和丙酮酸脱氢酶激酶4种蛋白。这些差异表达蛋白可能导致蚕卵胚胎中物质代谢和能量代谢的不同,据此推测低温和常温催青可能在蚕卵胚胎中诱导了不同的生理生化反应。     

催青温度对家蚕二化性品种丙酮酸脱氢酶激酶基因(BmPDK)表达的影响

丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)在生物体的新陈代谢中具有重要的生理功能。为了探讨家蚕(Bombyx mori)PDK基因的表达特性,用蛾区半分法将二化性家蚕品种的活化越年卵(丙2期)分别以常温(25℃)光照和低温(15℃)黑暗催青,通过实时荧光定量PCR技术检测分析2种温度催青处理后家蚕不同发育阶段和不同组织的BmPDK表达水平。常温光照催青区BmP-DK的表达水平表现出发育时期和组织差异:胚胎发育阶段BmPDK在己4期的表达水平最高,其次是戊2、己3和己5期;幼虫发育阶段BmPDK的表达水平在蚁蚕期极显著高于其它龄期,5龄期在卵巢和精巢的表达水平高于其它组织;蛹期BmPDK的表达水平比其它发育时期低;成虫期的表达水平与胚胎发育末期相当,其中雌蛾的脂肪体和卵巢中BmPDK的表达水平较高。推测BmPDK在家蚕胚胎发育末期及产卵过程中有重要作用。催青温度影响BmPDK在家蚕各发育时期及卵巢组织中的表达水平:胚胎发育阶段戊2期BmPDK的表达水平为常温催青区显著高于低温催青区,己3～己5期常温催青区BmPDK的表达呈低-高-低的趋势,而低温催青区则呈上升趋势;蚁蚕期BmPDK表达水平为低温催青区极显著低于常温催青区;蛹期和成虫期卵巢中,常温催青区BmPDK的表达水平极显著高于低温催青区。催青温度对二化性家蚕BmPDK的表达的影响主要出现在胚胎戊2期、胚胎己3期～蚁蚕期、蛹期、成虫期。     

家蚕性别相关血液蛋白质组的一维电泳-液相色谱-质谱分析

分别从家蚕5龄幼虫和蛹期不同发育阶段提取雌、雄蚕血液总蛋白质,采用一维电泳-液相色谱-质谱(1DE-LC-MS)技术分析家蚕血液蛋白质的差异性表达及差异蛋白组分。在家蚕血液蛋白质含量与种类方面检测到与性别及发育相关的差异性表达,数据库检索结果共获得96个相匹配的候选蛋白质,剔除冗余部分后鉴定其中的27个蛋白质组分,分别属于13种蛋白质或其亚基。雌、雄蚕之间的差异组分主要出现在分子质量70~100 kD之间,其中芳基贮存蛋白、卵黄蛋白原、抗胰凝乳蛋白酶因子为雌特异性表达组分。30K蛋白家族是家蚕血液中高丰度表达的蛋白组分。这些差异蛋白质的鉴定与功能分析为研究家蚕性别发育调控机制提供了新的信息。     

家蚕ycaCR基因的表达特征及蛋白质的亚细胞定位

ycaC相关蛋白含有一个保守的ycaC-related结构域,属于异分支酸酶超家族成员。从家蚕蛹cDNA文库中检索到一条EST序列,编码一个含ycaC-related保守结构域的蛋白质,将该cDNA的全长序列命名为BmycaCR(GenBank登录号:GU292794)。通过基因克隆、原核表达和纯化技术得到BmycaCR蛋白,用纯化的蛋白质为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western blot检测BmycaCR蛋白在家蚕卵期的表达水平明显高于其它发育时期,蛋白质在5龄幼虫的睾丸、马氏管、气管、卵巢、表皮、肠和脂肪体中均有表达,而在头部、血液和丝腺中没有检测到阳性信号。荧光定量PCR检测BmycaCR在家蚕卵期的转录水平明显高于其它发育时期,在5龄幼虫各组织中,BmycaCR的转录水平由高到低依次为睾丸、气管、脂肪体、卵巢、表皮、肠、血液、马氏管、丝腺和头部。亚细胞定位显示BmycaCR蛋白在细胞核和细胞质中均有分布,可能发挥基本的生物学功能,并在靠近质膜区域有强的荧光信号,可能具有与其它蛋白质相互结合的功能。     

柞蚕脂肪体RNA量的消长与体液卵黄原蛋白含量的关系

测定了柞蚕吐丝当日至化蛹第 1日不同日龄雌体脂肪体和吐丝期第 5日雄体RNA的含量。雌体RNA的含量随发育日龄的增加而增加 ,吐丝第 5日达到高峰 ,脂肪体RNA的含量为 2 4 1μg/mg,化蛹当日脂肪体RNA的含量开始下降。雄体中的RNA含量甚少。柞蚕体液SDS PAGE分析结果 ,吐丝当日已出现卵黄原蛋白 ,随日龄的增加而增加 ,第 5日达到高峰 ,化蛹当日有所下降 ,这与测定的脂肪体中RNA的变化趋势是一致的。Northern印迹分析的结果表明柞蚕雄体中的RNA并非是卵黄原蛋白mRNA ,卵黄原蛋白的表达具有时期特异性和性特异性。证明了柞蚕卵黄原蛋白的合成与家蚕和惜古比天蚕一样 ,从吐丝期到蛹初期的脂肪体卵黄原蛋白mRNA的增加和体液中卵黄原蛋白量的增加的时期一致。     

家蚕主要血浆蛋白质的发育变化及与其它蚕的比较研究

用SDS-聚丙烯酰腔凝胶电泳(SDS—PAGE)法,观察了家蚕不同发育阶段血液主要血浆蛋白质浓度的发育变化,比较了不同的地方性三眠蚕品种间主要血浆蛋白质组成及浓度的异同。比较家蚕与野桑蚕、蓖麻蚕、樗蚕及柞蚕血浆的电泳图谱,发现家蚕与野桑蚕的电泳图谱相似而不同于蓖麻蚕、樗蚕和柞蚕。后三者之间的电泳图谱很相似,它们不存在类似于家蚕及野桑蚕中的分子量为30KD的一组蛋白质,但也存在分子量相当于家蚕贮藏蛋白质的成分。用精制的家蚕贮藏蛋白质、30K蛋白质和卵黄磷蛋白分别制备免抗血清,并使之与五种试验蚕的血液分别进行了双向免疫扩散试验。     

Partial characterization of the antigen recognized by a monoclonal antibody to Ascaris suum ovary extracts

A monoclonal antibody produced against ovary extracts from the worm Ascaris suum showed immunoreactivity against granules in the rachis and oocytes, the inner layer of the eggshell and the middle layer of some egg, but not against either ovary wall or uterus wall. Furthermore, the same antigens were detected on the body surface of migrated larva in guinea pig lung, whereas none were detected in adult male worm or adult female worm, except for the female reproductive organs. The ovary extracts were passed through an affinity column and the eluted fractions analyzed by SDS-PAGE, Western blotting and native-PAGE. Western blotting after SDS-PAGE detected chemiluminescence primarily as three bands of about 70, 78 and 90 kDa. However, Western blotting after native-PAGE of the partially purified ovary extracts demonstrated only one band at a position of about 230 kDa. LC-nanoESI-MS/MS analysis of protein band gel slices from silver-stained SDS-PAGE revealed one peptide sequence "ILVGLIGTNR", that matched only the hypothetical protein F14D2.8 of Caenorhabditis elegans (gi/7499081).