FBXO31对肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨FBXO31基因对肺腺癌细胞系A549增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染法将FBXO31表达质粒及FBXO31 siRNA序列分别转染肺癌A549细胞,用Western blot、MTT、平板克隆、划痕和Transwell实验分别检测A549细胞中FBXO31蛋白表达、细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力.结果Western blot显示FBXO31表达质粒转染上调A549细胞中FBXO31蛋白表达,而转染siRNA下调FBXO31蛋白表达.FBXO31基因过表达增强A549细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力,而FBXO31基因沉默抑制细胞增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力(P＜0.01).结论FBXO31基因可促进肺癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力.     

长链非编码RNA-PVT1在顺铂诱导DNA损伤修复中的作用机制

目的 研究长链非编码RNA-PVT1对顺铂诱导DNA损伤修复的影响及其作用机制.方法 建立顺铂诱导非小细胞肺癌细胞株A549细胞DNA损伤模型,用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1表达.通过siPVT1沉默A549细胞中PVT1表达,用qRT-PCR和Western blot检测核苷酸切除修复(NER)相关基因表达.用RNA免疫共沉淀(RIP)检测PVT1与ERCC1相互作用.结果 顺铂处理A549细胞明显下调PVT1表达.沉默PVT1后A549细胞中γH2AX表达显著增高,而NER途径中关键基因如ERCC1、DDB2表达明显降低.RIP实验表明PVT1可与ERCC1蛋白直接相互作用.结论 PVT1可能通过调节NER途径促进顺铂诱导DNA损伤修复.     

siRNA干扰Notch1诱导肝癌细胞凋亡的机制研究

目的 研究Notch1在肝癌组织及细胞中的表达并初步探讨Notch1下调后诱导肝癌细胞调亡的机制。方法 2016年3月至2016年9月于广东医科大学附属医院肝胆外科收集32例肝癌病人样本,利用qRT-PCR方法检测肝癌癌组织及癌旁组织中Notch1基因的表达,免疫组化检测组织中Notch1蛋白表达,siRNA沉默肝癌细胞Notch1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot方法检测Notch1、Bcl2和Bax蛋白表达,统计分析Notch1表达水平与肝癌病人临床诊断指标甲胎蛋白（AFP）的相关性。结果 肝癌组织标本中Notch1高表达率为71.9%（23/32）,明显高于癌旁组织的28.1%（9/32）,差异具有显著统计学意义（P<0.01）;Pearson相关性分析显示,Notch1与AFP存在正相关性（R²=0.3376,P=0.0036）;免疫组化验证Notch1蛋白分别在肝癌癌组织样本中高表达和癌旁组织中低表达;siRNA干扰Notch1基因表达后,镜下发现肝癌细胞4401增殖抑制,流式检测示转染组明显凋亡,蛋白免疫印迹显示凋亡相关蛋白Bcl2蛋白下调、Bax表达上调。结论 Notch1与肝癌的发生、发展相关,下调Notch1可诱导肝癌细胞凋亡,同时Notch1还可作为临床治疗肝癌的潜在新靶点。     

干扰素通过上调BAX蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨干扰素(IFN)体外诱导肝癌细胞凋亡及其相关基因表达的作用。[方法]不同浓度的干扰素(IFN)处理肝癌细胞系CBRH-7919细胞不同时间后,光学显微镜下观察其形态学改变,用琼脂糖凝胶电泳检测作用不同时间干扰素对其细胞凋亡的影响,利用细胞免疫组化技术检测不同作用时间下BAX蛋白表达量的变化。[结果]干扰素作用肝癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞体积缩小,变形,细胞膜完整;细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等。琼脂糖凝胶电泳测得随着干扰素浓度的增高,出现典型的DNA LADDER。随着时间的增加BAX蛋白表达量出现增加,尤以48 h较明显。[结论]IFN可以诱导肝癌细胞凋亡,可能是由于IFN上调了BAX蛋白的表达,从而增强了自身对肝癌细胞的凋亡作用。     

MIκBα对TNF-α诱导的大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的:探讨MIκBα对TNF-α诱导的大鼠肝星状细胞生长抑制和凋亡的影响。方法:首先用不同剂量的TNF-α对培养成功的MIκBα稳定转染组细胞和未转染大鼠肝星状细胞进行诱导,并使用间接免疫荧光法检测细胞中NF-κB/P65蛋白的表达,应用MTT法测定细胞生长率,然后用Annexin V-FITC和PI试剂分别进行双标记利用流式细胞仪对两组细胞的凋亡情况进行检测。结果:转染MIκBα的大鼠肝星状细胞的组NF-κB蛋白的表达明显被抑制,转染组较未转染组的细胞生长明显受到抑制,两者比较有统计学差异性。转染MIκBα的大鼠肝星状细胞有较高的凋亡率,而未转染MIκBα的大鼠肝星状细胞只有少许细胞发生凋亡,两者比较差异有统计学意义。结论:MIκBα表达可以抑制NF-κB蛋白的表达,从而提高大鼠肝星状细胞对TNF-α的敏感性,通过诱导肝星状细胞的凋亡,可能寻找到一条治疗肝纤维化的途径。     

传染性囊病病毒VP2蛋白诱导细胞凋亡的研究

在体外分别构建了3种重组表达质粒，含传染性囊病病毒GZ911株VP2基因的pGVP2、含HK46株VP2基因的pHVP2以及含HK46株5‘-端序列（包括非编码区，VP5和VP2基因）的pHVP2 5用不同的重组质粒转染质代鸡胚成纤维细胞（CEF），在转染后0、14、38h，收集对照组和转染组细胞，用酶联免疫吸附试验检测CEF中降解DNA量，结果，在14和38h，各组细胞中测得的Dλ值均为转染pHVP2 5组最大，其次为转染pHVP2,pCVP2的组，并都大于其他对照组，表明2个IBDV毒株的VP2蛋白在CEF中表达后都能诱导CEF发生凋亡，但不同毒株的VP2蛋白诱导CEF凋亡的能力不则；VP5蛋白可增强VP2蛋白诱导CEF凋亡的作用。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对BHK-21细胞的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

为了探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养仓鼠肾细胞(BHK-21)的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞化学染色等方法,研究DON对细胞早期凋亡率、线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果显示:不同浓度的DON均可诱导BHK-21细胞凋亡,各浓度组的凋亡率都显著高于对照组(P<0.05);DON可使BHK-21细胞线粒体膜电位下降,且表现出剂量和时间效应关系.免疫组织化学染色显示,DON处理细胞24 h,Bax蛋白表达显著高于对照组,而Bcl-2蛋白表达均低于对照组.上述结果表明:DON诱导了BHK-21细胞凋亡和线粒体膜电位下降,Bax表达增强而Bcl-2表达下降是DON诱导BHK-21细胞凋亡的分子机制之一.     

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。     

白术多糖对环磷酰胺致雏鸡肝脏细胞凋亡中线粒体通路的影响

试验旨在从线粒体介导的细胞凋亡通路,探讨白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的雏鸡肝脏损伤的影响。试验选取1日龄岭南黄鸡240羽,随机分成4组:对照(Control)、环磷酰胺(CTX)、白术多糖(PAMK)以及白术多糖环磷酰胺联合组(PAMK+CTX)。试验结束后,采集雏鸡肝脏组织,用于形态学观察及线粒体介导的细胞凋亡通路相关基因mRNA表达量和蛋白表达水平检测。光镜结果显示,环磷酰胺诱导雏鸡肝脏组织细胞形态结构不完整、肝细胞索排列紊乱、空泡化。电镜结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织细胞线粒体明显受损,并发生细胞凋亡。从分子水平探讨线粒体介导的细胞凋亡通路结果显示,环磷酰胺可导致雏鸡肝脏组织中促凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax和p53 mRNA表达量显著升高(P0.05),抑凋亡基因Bcl-2mRNA表达量显著降低(P0.05)。白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Bax的mRNA表达量显著降低(P0.05),Bcl-2 mRNA表达量显著升高(P0.05)。此外,白术多糖环磷酰胺联合组雏鸡肝脏组织中Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。研究结果表明,环磷酰胺可诱导雏鸡肝细胞凋亡,白术多糖可通过调节线粒体通路相关基因表达抵抗环磷酰胺诱导雏鸡肝细胞凋亡,对雏鸡肝脏产生保护作用。     

谷胱甘肽与顺铂联用对肺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨谷胱甘肽与顺铂联用对肺癌A549细胞增殖的影响。方法应用MTT法及细胞计数评价细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧(ROS)水平,Western blot检测P53表达。结果 0.3、0.9g/L谷胱甘肽与3mg/L顺铂联用72h,1、3、9g/L谷胱甘肽与9mg/L顺铂联用30h,均可显著降低顺铂对A549细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。9g/L谷胱甘肽与9mg/L顺铂联用,可减少A549细胞ROS产生和早期凋亡(P<0.01)。谷胱甘肽、顺铂单独或联用对P53蛋白表达无影响。结论谷胱甘肽与顺铂联用对A549增殖的影响取决于谷胱甘肽剂量。