大片吸虫分泌排泄抗原的分析

取广西牛源大片吸虫成虫制备出分泌排泄（ＥＳ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝染色显出７条蛋白带。免疫印迹试验（ＥＩＴＢ）测出其主要特异性免疫成分分子量为３６．３，２８．５及２５．５ｋＤａ，其中２８．５与２５．５ｋＤａ与法国肝片吸虫ＥＳ的部分抗原成分相同。两种片形吸虫与抗血清可以交叉使用无特异性，但与日本血吸虫抗原及抗血清均无交叉反应，人工感染大片吸虫２周后的兔血清即能识别此抗原。ＥＳ抗原提取方法简便，特异性好，敏感性高，可用于片形吸虫病免疫诊断。     

应用RAMP标记研究黑麦属遗传多样性*

对黑麦属(Secale L．)10个野生居群和11个栽培居群共21份材料进行了RAMP(random amplified microsatellite polymorphism)标记分析，结果表明，被测材料间RAMP标记多态性较高。80个：RAMP引物中，有41个引物(占50．5％)可扩增出清晰且具多态性的条带。这41个引物共扩增出445条带，其中428条(占95．9％)具有多态性，每个引物可扩增出3—19条多态性带，平均10．4条。RAMP标记遗传相似性系数(GS)变异范围为0．266-0．658，平均值为0．449。RAMP标记可将所有21份黑麦材料完全区分开，聚类结果与材料的地理分布有一定关系，但与黑麦属传统的系统分类体系存在明显差异。据此认为，RAMP标记可以有效地评价黑麦属植物的遗传多样性，并为其物种亲缘关系的界定提供信息。     

塔玛亚历山大藻对中国明对虾免疫相关基因表达和抗病力的影响

以一株能产生麻痹性贝毒（ParalyticShellfishPoison,PSP）的赤潮甲藻塔玛亚历山大藻（Alexandriumtamarense,ATHK株）为研究对象,研究了其对中国明对虾（Fenneropenaeuschinensis）免疫相关基因（TLR和Relish基因）表达和抗病力的影响。结果表明：200cells·mL^-1塔玛亚历山大藻胁迫72~144h,中国明对虾的肝胰腺、鳃和血淋巴的TLR和Relish基因表达或被显著抑制（P〈0．05）,或恢复至海水对照组的水平（P〉0．05）;而1000cells·mL。藻中对虾鳃组织和血淋巴的上述基因表达在48～144h被显著抑制（P〈0．05）,肝胰腺的表达在72-144h被显著抑制（P〈0．05）。塔玛亚历山大藻胁迫下投喂感染WSSV的病虾后,加藻的感染组和未加藻的感染组的中国明对虾虽然都在第3d时检测到阳性结果,7d内累积死亡率为100％,但同一时间点加藻组的累积死亡率高于未加藻组。塔玛亚历山大藻胁迫6d后的中国明对虾,经鳗弧菌（Vibrioanguillarum）人工急性感染后,两个加藻组在同一取样时间点的累积死亡率高于未加藻的海水对照组,且随着藻浓度升高而有升高的趋势。研究表明塔玛亚历山大藻可影响中国明对虾TLR和Relish基因表达,从而影响机体韵抗病力。t     

镜鲤体重的QTL定位

本研究利用217个微卫星标记和336个SNPs标记对德国镜鲤F2代68个个体基因组DNA进行基因型检测。其中507个标记共组成62个连锁群,覆盖基因组总长度为2805．85cM,标记问平均距离为6-31cM;利用软件MapQTL4．0采用区间作图法对体重性状进行QTL定位分析。研究结果共检测到14个与体重性状有关的QTLs,分布于9个连锁群。其中BIV-5-J有最大的LOD值,为4．46;BIV—I-1的LOD值最小,为2．25。单个QTL平均解释表型变异介于14．10％～45．50％之间,其中贡献率大于20％的主效QTLs有9个。通过BLASTX与斑马鱼蛋白质序列数据库进行序列比对,找到了与斑马鱼酰基辅酶A脱氢酶蛋白、胰淀粉酶仅2蛋白、Apoebprotein和甘油醛-3-磷酸脱氢酶蛋白同源的分子标记。本研究结果对分子标记辅助育种具有重要应用价值。     

Isolation and Analysis of Genes Induced by Rehydration after SeriousDrought in Broomcorn Millet (Panicum miliaceum) by Using SSH

利用抑制消减杂交(suppression subtraction hybridization，SSH)技术构建了糜子(Panicum miliaceum)干旱后复水条件与正常浇水条件下基因差异表达的SSH-cDNA文库。对其中的60个阳性克隆进行了测序，在去除冗余的cDNA后，利用NCBI的BLAST软件在GenBank 中进行核酸和蛋白质同源性的比较和功能分析。核酸比对结果表明,有32个cDNA片段与已知cDNA片段具有较高的同源性，且多数与植物受到生物或非生物胁迫时的反应机制相关，同时有11条序列与小鼠肝被手术切除后再生时产生的EST有一定同源性。蛋白分析结果显示，有28个序列与已知功能蛋白序列同源性较高，这些功能蛋白涉及植物体内的信号转导、转录调控及蛋白加工等。实验结果表明糜子在干旱复水条件下可诱导一系列特异基因的表达。     

香鱼Wap65-2在昆虫杆状病毒系统中的表达及其与补体C3的相互作用验证

Wap65-2 (Warm temperature acclimation related 65 kD protein-2)是至今仅在鱼类中发现的糖蛋白,与鱼类温度、细菌感染、重金属等胁迫等紧密相关。近年来其在鱼类抗细菌免疫反应中的作用引起广泛关注。本研究主要利用昆虫细胞杆状病毒载体系统(baculovirus expression vector system, BEVS)表达重组香鱼(Plecoglossus altivelis) Wap65-2成熟肽(recombinant ayu mature Wap65-2, rPaWap65-2m),建立真核生物表达具有生物活性rPaWap65-2m的制备方法。首先克隆获得香鱼Wap65-2基因的重组杆粒,将重组杆粒转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)卵巢细胞(Sf9)获得病毒储液,用高滴度P3代病毒储液继续感染Sf9细胞,Western blot技术检测培养基中的重组蛋白。在最佳条件下无血清悬浮扩大培养,收集培养基上清,再经阴离子交换层析柱和镍亲和层析柱纯化获得rPaWap65-2m。采用His-tag pulldown技术验证rPaWap65-2m与血清补体C3 (complement 3)蛋白之间的相互作用。结果表明,P3代病毒储液感染Sf9细胞后,Western blot结果表明r PaWap65-2m以非N-连接糖基化形式表达并分泌至培养基上清。感染复数(multiplicity of infection, MOI)为5且感染72 h后,重组蛋白表达条件最佳。经纯化的rPaWap65-2m纯度大于93%,可用于后续实验。pulldown实验显示rPaWap65-2m蛋白与C3蛋白相互作用。综上,本研究获得了具有生物活性的rPaWap65-2m蛋白,并验证了r PaWap65-2m蛋白与血清中补体C3的相互作用,为后续免疫相关功能研究奠定了基础。     

免疫抑制素提高粤黄鸡产蛋性能的研究

将鸡抑制素α亚基成熟肽cDNA片段克隆入表达载体pRSETA的BamHⅠ和HindⅢ位点之间,在大肠杆菌(Es-cherichiacoli)BL21(DE3)中表达了分子量为15.8kD左右的重组鸡抑制素融合蛋白,在0.005mmol/LIPTG诱导4h时达最高表达量,约占总菌体蛋白的37%。将此融合蛋白用Ni-NTA树脂经亲和层析纯化后与矿物油佐剂制成蛋白含量为1mg/mL的免疫原。对25只240日龄的粤黄鸡种(Gallusgallus)母鸡在第5和第26天肌肉注射1mL重组鸡抑制素融合蛋白免疫原,另外25只种鸡接种1mL不含蛋白的油乳剂。免疫组鸡在首次免疫后血浆抗重组鸡抑制素的抗体水平持续且极显著高于对照组(P<0.01)。在50d试验期内,免疫组鸡的产蛋量在第2次免疫后明显高于对照组约5%￣8%左右,表明鸡免疫抑制素重组融合蛋白仅能有限地提高其产蛋性能。     

大豆种质资源RAPD标记遗传多样性研究

为深入研究并充分利用野生大豆资源,本文利用RAPD分子标记对40份大豆材料加以分析,旨在从DNA分子水平上探索野生大豆、地方品种和育成品种之间的遗传多样性状况。结果表明:50个RAPD引物筛选出具有多态性且扩增条带清晰的引物38个,共检测出407条带,其中多态谱带309条,多态性程度为75.92%。每个引物可扩增出2～14条多态性带,平均产生多态性谱带8.1条;平均多样性指数为2.3377,变幅范围为0.5865～4.2133。遗传相似系数变幅范围为0.44～0.92,平均为0.75。野生大豆的多态比例(94.35%)、多样性指数(2.2336)分别高于育成品种(87.47%、1.7331)和地方品种(83.54%、1.6198)。遗传相似系数为野生大豆(0.6498)地方品种(0.7015)育成品种(0.7177),育成品种与地方品种间为0.6599,育成品种与野生大豆间为0.6487,地方品种与野生大豆间为0.6045。UPGMA聚类分析结果表明,40份大豆材料聚为6类,育成品种和地方品种各自聚为一类,野生大豆聚为4类。野生大豆特异等位基因数远远高于育成品种和地方品种二者的相加之和。本研究从分子水平上揭示了野生大豆与栽培大豆区别明显,宜作为一个独立的种,同时野生大豆变异幅度大,遗传基础广,是大豆育种实践中的优良基因资源。     

山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白.用RT-PCR方法从山羊(Capra hircus)肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒.DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320 bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为99.2%.将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc.经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75 kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带.Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别.本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞(induced pluripotent stem cells)检测创造了条件.     

包被铜对西门塔尔牛日粮养分消化代谢和血液指标的影响

16头中国西门塔尔阉牛采用随机区组设计被分为4组,以混合精料和风干玉米秸秆为基础日粮,以包被铜为铜源,在基础日粮中分别添加铜0、8、16和24mg/kg,研究包被铜对西门塔尔牛营养物质消化代谢和血液指标的影响。结果表明:8和16mg/kg组有机物质表观消化率显著高于24mg/kg和对照组(P<0.05);粗蛋白、粗脂肪、无氮浸出物、中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维表观消化率均比对照显著增加(P<0.05);各组可消化氮、沉积氮和可消化氮/沉积氮也较对照显著增加(P<0.05),16和24mg/kg组显著高于8mg/kg组(P<0.05)。矿物质存留率、血清甘油三酯、葡萄糖、总胆固醇、白蛋白和总蛋白含量显著增加(P<0.05)。尿素氮则呈现下降趋势,且16和24mg/kg组显著低于对照组和8mg/kg组(P<0.05);对照组和处理组之间血清谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(CDH)差异均不显著(P>0.05);血清铜蓝蛋白(CP)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性显著提高(P<0.05);丙二醛显著下降(P<0.05)。血清铜、铁和锌含量显著高于对照(P<0.05),但处理组间差异不显著;血清锰含量呈上升趋势,但差异不显著(P>0.05)。根据试验结果,包被铜添加量以8~16mg/kg干物质为宜。     

绵羊和水牛实验感染大片吸虫后外周血白细胞计数的分析

对绵羊和水牛在感染大片吸虫后外周血白细胞总数计数和白细胞分类计数(嗜酸性细胞、嗜中性细胞、嗜碱性细胞、淋巴细胞和单核细胞)的特性进行研究。结果表明,绵羊对大片吸虫很不易感,水牛对大片吸虫很易感。未感染绵羊和水牛的白细胞总数有较大的差距,分别为5 956(±825)个细胞/mm3血液和12 657(±1 053)个细胞/mm3血液。未感染绵羊和水牛的嗜酸性细胞占白细胞总数的百分比小于5%。淋巴细胞占的比例最大,绵羊为59.5%,水牛达70.8%。感染绵羊和未感染绵羊的白细胞总数、嗜酸性细胞计数在感染过程中总体上存在显著差异,感染后绵羊的嗜酸性细胞的数量迅速升高,在感染后4周(4W P I)达到高峰。而感染水牛和未感染水牛白细胞总数差异不显著,但嗜酸性细胞存在显著差异,感染后水牛的嗜酸性细胞的数量升高缓慢,到8 W P I达到高峰。结果提示嗜酸性细胞在感染绵羊中更加有效地参与了杀灭大片吸虫。     

肝片形吸虫神经系统内5-羟色胺的定位和色胺能神经元超微结构的研究

用间接免疫荧光技术鉴定了肝片形吸虫神经系统内5-羟色胺(5-HT)的定位。在中枢,脑神经节内胞体、突起、连合和发出的纵神经干均呈现免疫反应;在外周,皮肌层、肠管壁、睾丸和卵巢上皮周围、子宫和卵模肌内层等的神经丛也有免疫反应。用电镜技术进一步研究色胺能神经元的超微结构,发现其胞体集中于神经节,其终末纤维有经典的突触结构,内含5-HT颗粒.因此,5-HT作为肝片形吸虫的神经递质有了直接证据。     

筛选抗片形吸虫病绵羊品种的研究进展

本文综述了抗片形吸虫病绵羊品种的研究概况 ,通过红细胞压积、红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白浓度、血清谷氨酸脱氢酶、γ 谷氨酰胺转移酶、天冬氨酸转氨酶等血液学参数 ,囊蚴感染成活率的测定等方法来筛选抗片形吸虫病的绵羊品种 ,研究证明印度尼西亚细尾绵羊对大片吸虫感染具有较高的抵抗力 ,并概述了其抗虫感染的机制及杀虫作用时间。印度尼西亚细尾绵羊对大片吸虫的抵抗力包括先天性抵抗力和获得性抵抗力 ,杀虫时间集中在感染后 3-4周和 1 5-2 1周。未发现对肝片吸虫感染有高抵抗力的品种。     

青海省耕地资源开发利用分析及对策研究

分析论述了青海省耕地资源开发利用的现状、特点和问题。在此基础上,提出了对青海省耕地资源进行研究的框架体系和思路,同时基于GIS/RS技术设计了相关的技术路线。最后依据所做设计对青海省耕地资源开发利用做了初步分析,并进行了相关的对策研究分析。     

氟对小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用

为观察氟对成年雄性小鼠生精细胞凋亡的影响及锌的保护作用,通过腹腔注射氟化钠建立氟中毒动物模型及锌保护实验。采用石蜡切片、苏木精-伊红染色(HE染色)、末端原位标记(TUNEL)及琼脂糖凝胶电泳的方法检测小鼠生精细胞的凋亡情况。结果显示:(1)氟感染组无论是低剂量组(NaF10 mg/kg)或是高剂量组(NaF 20 mg/kg)生精细胞都发生了明显的凋亡。生精细胞凋亡主要发生在精母细胞和精原细胞,凋亡指数与对照组差异极显著(P<0.05)。(2)无论是高剂量锌(ZnSO430 mg/kg)和低剂量锌(ZnSO415 mg/kg)都可以使凋亡指数明显降低,高剂量锌组的凋亡指数与对照组差异不显著(P>0.05)。     

烘焙对生物质热解产物特性的影响

烘焙可有效地降低生物质中的水分和氧,对其热解过程有显著的影响。该文主要研究了烘焙温度（200,230,260,290℃）对生物质热解过程及产物特性的影响行为及影响机制;研究发现烘焙能改善热解产物的品质,随着烘焙温度的升高,热解合成气中CO含量由48%逐渐减少到34%,CH4和H2增加,其中H2含量最大增加了77.4%,而液体产物中,乙酸和水分含量逐渐减小,水分含量最大减少了42.8%,而酚类产物的含量明显增加,有利于生物油品质的提高。该研究为烘焙技术的发展和生物质高效热化学转化提供科学参考。     

Towards bioremediation of toxic unresolved complex mixtures of hydrocarbons: identification of bacteria capable of rapid degradation of alkyltetralins

Background, aim and scope  Unresolved complex mixtures (UCMs) of aromatic hydrocarbons are widespread, but often overlooked, environmental contaminants. Since UCMs are generally rather resistant to bacterial degradation, bioremediation of UCM-contaminated sites by bacteria is a challenging goal. Branched chain alkyltetralins are amongst the individual classes of components of aromatic UCMs which have been identified in hydrocarbon-contaminated sediments and a number of synthetic alkyltetralins have proved toxic in laboratory studies. Thus, alkyltetralins should perhaps be amongst the targets for UCM bioremediation strategies. The slow degradation of several alkyltetralins by a microbial consortium has been reported previously; however, the bacteria involved remain unidentified and no single strain capable of alkyltetralin biodegradation has been isolated. The present project therefore aimed to enrich and identify bacterial consortia and single strains of bacteria from a naturally hydrocarbon-contaminated site (Whitley Bay, UK), which were capable of the degradation of two synthetic alkyltetralins (6-cyclohexyltetralin (CHT) and 1-(3’-methylbutyl)-7-cyclohexyltetralin (MBCHT)). Materials and methods  Bacteria were enriched from sediment collected from Whitley Bay, UK by culturing with CHT and MBCHT for a period of 4 months. Biodegradation experiments were then established and degradation of model compounds monitored by gas chromatography–mass spectrometry. Internal standards allowed the generation of quantitative data. 16S rRNA gene clone libraries were constructed from individual enrichments to allow assessment of microbial community structure. Selective media containing MBCHT were used to isolate single bacterial strains. These strains were then tested in liquid culture for their ability to degrade MBCHT. Results  The consortia obtained through enrichment culture were able to degrade 87% of CHT and 76% of MBCHT after only 46 days compared with abiotic controls. The 16S ribosomal RNA gene clone libraries of these bacteria were dominated by sequences of Rhodococcus spp. Using selective media, a strain of Rhodococcus was then isolated that was also able to biodegrade 63% of MBCHT in only 21 days. Discussion  The present report describes the isolation of a single bacterial strain able to degrade the resistant MBCHT. Although significant losses of MBCHT were observed, putative metabolites were not detectable. Rhodococcus sp. have been reported previously to be able to biodegrade a range of hydrocarbon compounds. Recommendations and perspectives  Due to their environmental persistence and toxicity, aromatic UCMs require bioremediation. The culturing and identification of such bacteria capable of rapid degradation of alkyltetralins may be an important step toward the development of bioremediation strategies for sites contaminated with toxic UCMs.     

食用仙人掌萎蔫气象条件分析

塑料大棚内种植的食用仙人掌在土壤墒情较好时也有萎蔫现象发生，通过试验观测和对仙人掌生理习性的分析，发现阴雨过后天气突然放晴温度急剧上升易使仙人掌发生萎蔫现象，并提出了田间管理的应对措施。     

三门峡水库库岸坍塌成因分析与防治措施研究

三门峡水库自1960年9月蓄水运行以来,库岸坍塌现象频繁发生,平均每年塌岸0.5～0.7亿m3.指出了造成库岸坍塌的原因主要是地质环境的影响以及水力条件的变化;不同的地形、地貌、地质结构和岩性特征,表现了不同的塌岸强度,其中黄土塬区为极强塌岸段,黄河Ⅱ级阶地为强烈塌岸段,黄河Ⅰ级阶地为中等强烈塌岸段;分析了引起库岸坍塌的主要水力条件有大气降水、地表水和地下水,并且不同水力条件及其变化特征,对库岸坍塌影响的方式和程度也不同;最后给出了防治库岸坍塌应采用标本兼治的原则,治标是指对塌岸进行必要的加固、支挡、衬砌等;治本就是根据引起塌岸的原因以及不同地质环境条件下的塌岸特征和水力条件,因地制宜,因害设防,从根本上进行综合治理.