斑点免疫金银染色法检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的研究

用建立的斑点免疫金银染色（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ）法检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）抗原,确定兔抗ＩＢＶ血清工作浓度为１：４００,ＳＰＡ－胶体金探针的工作浓度为１：８０,该法对纯化ＩＢＶ抗原的最低检出量为０．４３１４ｎｇ／点,用Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ与斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）同时检测１５只人工感染ＩＢＶ鸡的气管,肺,肾病科,ＩＢＶ阳性检出率均为１００％,对３２份疑似ＩＢＶ感染鸡病料检测,Ｉ     

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体

间接血凝试验检测鸡传染性支气管炎病毒抗体江国托，徐宝春，王永坤（扬州大学农学院２２５００１）目前，鸡传染性支气管炎（ＩＢ）已成为国内养鸡业的主要疾病之一，虽然已建立的检测ＩＢＶ及其抗体的方法很多，如琼脂扩散试验、细胞中和试验、ＥＬＩＳＡ、血凝和血凝抑...     

禽用生物制品外源病原监测研究：鸡新城疫LaSota活苗中污染IBV的检测研究

使用ＳＰＦ鸡制备的抗ＮＤＶ（新城疫病毒）高免血清可中和ＮＤＶ种毒或鸡新城疫疫苗ＬａＳｏｔａ株１０~７ＥＩＤ５０／０．１ｍｌ（即１０个使用剂量），并具有高度持异性。对于ＮＤＶ疫苗实验室模拟污染ＩＢＶ传染性支气管炎病毒）研究表明，用ＮＤＶ高免血清中和ＮＤＶ疫苗１０个使用剂量后，可检测到ＩＢＶ１０~（－６）污染水平。对于某生药厂ＮＤＶＬａＳｏｔａ疫苗中疑似ＩＢＶ污染的样品进行检测，排除了ＩＢＶ污染。文章同时证明了免疫胚接种ＮＤＶＬａＳｏｔａ毒后胎儿表现出类似感染了ＩＢＶ的病变。     

5种消毒药对鸡传染性腔上囊病病毒的杀灭效果试验

用市售的腆类化合物、氯制剂、双季铵盐类化合物、酚类制剂和醛类制剂与鸡传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）相混合，在４℃和３０℃作用２４ｈ，用１０００ＩＤ５０的剂量作用后的病毒液感染２３日龄健康ＡＡ鸡。感染后７２ｈ扑杀试验鸡，取期腔上囊，用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒检测ＩＢＤＶ抗原，仍呈阳性反应；用３ｍＬ／Ｌ的甲醛溶液与ＩＢＤＶ病毒液混合，在３７℃作用２４、３６和４８ｈ后，按以上剂量感染鸡，感染后７２ｈ扑杀，取其腔上囊，用ＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ快速诊断盒 检测ＩＢＤＶ抗原，全部呈阴性。     

鸡,鸭体内传染性法氏囊病病毒的分离及理化性质比较

从疑似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病鸡及同群饲养的鸭体内各分离到１株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验证明两病毒均为ＩＢＤＶ，病毒血清型为Ⅰ型。病毒可致死鸡胚，适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变（ＣＰＥ）。理化性质比较表明，两病毒为同源ＩＢＤＶ。研究表明，鸭可成为ＩＢＤＶ的携带者或传染源。     

光敏生物素标记EDSV—DNA探针检测鸡减蛋综合症（EDS）的研究

应用光敏生物素标记ＥＤＳＶ－ＤＮＡ与ｐＵＣ１９重组质粒ＤＮＡ做探针，检测人工发病减蛋综合症蛋鸡的粪便，蛋，输卵管样品，以新城疫病毒（ＮＤＶ），传染性病毒（ＩＢＤＶ），传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），包涵体肝炎病毒（ＩＢＨＶ）作对照。实验结果显示：探针能特异地检出ＥＤＳ病鸡粪便，输卵管，蛋清样品中的病毒，与ＮＤＶ，ＩＢＤＶ，ＩＢＶ及ＩＢＨＶ均呈阴性反应。探针灵敏度达１０ｐｇＥＤＳＶ－ＤＮＡ。     

麻雀自然感染鸡传染性法氏病病毒的调查

从鸡传染性法氏囊病流行的鸡场捕杀麻雀５４只，用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ检测抗体，阳性检出率为７．４％；以逆转录－聚合酶链反应检测病毒核酸，阳性检出率为１１．１％；ＲＴ－ＰＣＲ阳性样本病毒分离亦为阳性。结果表明；ＩＢＤ流行的鸡场里的麻雀能够发生ＩＢＤＶ自然感染，麻雀可能是ＩＢＤＶ的贮存宿主或二次传染源之一。     

用对流免疫电泳试验检测鸡传染性法氏囊病血清抗体

利用自制传染性法氏囊病抗原,采用对流免疫电泳试验检测鸡ＩＢＤＶ抗体。结果表明,该方法能在３０－６０ｍｉｎ内使阳性血清和抗原之间出现明显的沉淀反应,且能被特异性抗原阻断;用ＮＤＶ,ＩＢＶ和ＥＤＳ７６Ｖ等血清代替ＩＢＤＶ血清无交叉反应,对同一批样品进行两次检测,结果具有良好的重复性,同琼脂免疫扩散方法比较,ＣＩＥ法需时短,敏感性高。     

抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体的特性研究——传染性法氏囊病病毒抗原的培养与提纯

在制备传染性法氏囊病病毒 (ＩＢＤＶ)单克隆抗体前 ,首先要提纯ＩＢＤＶ抗原 ,然后才能免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,检测和筛选阳性孔 ,克隆阳性孔并制备单克隆抗体。本实验采用蔗糖密度梯度离心法和超滤膜超滤浓缩法提纯ＩＢＤＶ ,并以纯化抗原免疫ＢＡＬＢ/ｃ小鼠 ,成功地制备出抗ＩＢＤＶ单克隆抗体。1　材料和方法1.1　材料ＩＢＤＶＤ78、ＮＤＶ、ＩＢＶ和ＭＤＶ均由哈兽研生物技术国家重点实验室提供 ;ＳＰＦ鸡胚 ,购自黑龙江省生物制品一厂。1.2　鸡胚成纤维原代细胞制备按Ｈａｎｓｏｎ[1] 等描述方法制备鸡胚成纤维细胞。1.3　病毒繁殖将…     

IBDV逆转录—聚合酶链反应和核酸杂交检测方法的研究

以建立的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和核酸杂交检测方法，检测了细胞培养物、病理组织、粪便和饲料中的ＩＢＤＶ，并与ＩＢＤＶ夹心ＥＬＩＳＡ、琼脂扩散试验（ＩＤ）和病毒分离方法进行了平行比较试验。结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交检测方法具有高度的敏感性和特异性，是深入研究ＩＢＤ流行病学，特别是传播途径的新手段     

用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究

用传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｈ１２０、Ｈ５２、Ｍ４１、ＡＲＫ、澳大利亚Ｔ株、野外分离株ＲＳ、ＲＹ及鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）等分别接种９日龄ＳＰＦ鸡胚，３７℃孵育４８小时后，将其尿囊液离心，沉淀用ＰＢＳ悬浮，涂片，用抗ＩＢＶ单抗ＭＣ作一抗、进行间接荧光抗体检测。结果：Ｈ１２Ｏ、Ｈ５２、Ｍ４１“ＡＲＫ、Ｔ株及ＲＳ、ＲＹ均显阳性，而ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＩＬＴＶ、ＥＤＳＶ均为阴性。结果表明、用此法检测鸡胚尿囊液中ＩＢＶ．具有快速、敏感、特异的优点。     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。     

IBDV灭活病毒口服接种雏鸡后诱导的保护性免疫

本研究检测了口服福尔马林灭活的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）对雏鸡的免疫效果。灭活ＩＢＤＶ悬浮于含碳酸钠的ＰＢＳ中，当口灌服后，这种抗原可使雏鸡产生一种抗ＩＢＤＶ血清抗体，这些雏鸡可以抵抗病毒的攻击，当用ＥＬＩＳＡ检测时，证实血清中ＩＢＤＶ特异抗体的免疫球蛋白属于ＩｇＧ，曾报道霍乱毒素对哺乳动物有很地的粘膜辅助特性，但不能增强血清抗体应答，雏鸡经口接种，随后经非肠道途径接种抗原可使抗体应答增强。     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

禽用生物制品外源病原监测研究：传染性支气管炎疫苗外源病毒检测

６４倍稀释的抗ＩＢＶ（传染性支气管炎病毒）高免血清可中和１００个ＥＩＤ＿（５０）ＩＢＶ病毒；２倍稀释抗ＩＢＶ高免血清可中和１０个羽份ＩＢＶＨ５２病毒。用ＮＤＶ（鸡新城疫病毒）ＬａＳｏｔａ或Ⅰ系病毒模拟污染ＩＢＶＨ５２毒株后，再用抗ＩＢＶ高免血清中和，可以检出污染的病毒。抽检ＩＢＶＨ１２０疫苗的１０个羽份可被ＩＢＶ高免血清中和。     

琼脂凝胶扩散试验检测鸡传染性支气管炎抗体

本文对鸡传染性支气管炎琼脂凝胶扩散试验进行了研究。试验结果表明，感染鸡传染性支气管炎病毒的鸡胚绒毛尿囊膜和尿囊液都能用于制备琼扩抗原，而且以感染ＩＢＶ后２０－３０小时的绒毛尿囊膜和感染ＩＢＶ后４８－６０小时的尿囊液效果最佳。通过传染性支气管炎琼脂凝胶扩散试验的研究和对血清样品的测定，以及与美国ＫＰＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ的ＩＢＶ－ＥＬＩＳＡ诊断盒比较，表明所建立的琼脂凝胶扩散试验可用于鸡传染性支气     

Dot—ELISA间接法检测鸡新城疫病毒（NDV）的研究

常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１：１０００;选用硝酸纤维素（ＮＣ）膜作固相载体,建立检测ＮＤＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＮＤＶ鸡胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染非免疫鸡的气管组织、肺组织各４７份,检出率为９３．６％;人工感染ＳＰＦ鸡气管组织、肺组织各４０份,检出率１００％。与传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）无交叉反应。试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观,便于生产应用     

麻雀体内传染性法氏囊病病毒的分离鉴定及理化特性研究

从传染性法氏囊病（ＩＢＤ）阳性麻雀体内分离到了一株病毒，用传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体心ＥＬＩＳＡ试验和ＤＩＧ－标记ＩＢＤＶｃＤＮＡ探针班点杂交试验证明该病毒为ＩＢＤＶ。病毒可适应于鸡胚和鸡胚成纤维细胞，产生细胞病变效应（ＣＰＥ）。病毒血清型为Ｉ型，病毒代谢抑制试验证明其基因组为ＲＮＡ，病毒核酸的电泳图谱呈两条特征带。病毒对乙醚不敏感ＰＨ２．０不能灭活可使病毒失感染性，５６℃作用３小时     

用ELISA检测牛血清中的牛病毒性腹泻病毒抗体

一般均用血清中和（ＳＮ）试验和间接免疫荧光（１１Ｆ）试验检测牛血清中的抗牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）抗体，本文用ＳＮ和１１Ｆ敏感性相当的ＥＬＩＳＡ检测ＢＶＤＶ抗体，共测定４７２份牛血清，有７９．２％为阳性。ＥＳＩＳＡ与ＳＮ呈正相关，表明ＥＬＩＳＡ可用于ＢＶＤＶ的常规诊断。