梅花鹿XY精子分选及冷冻精液制备

为分选梅花鹿XY精子及制备冷冻精液,2006年9月21~29日,对电刺激采集的梅花鹿精液经过长距离运输,流式细胞仪分离,冷冻,解冻后精液重分析和品质鉴定。结果显示:常规冻精和X、Y型冻精性别比分别为50%、91.21%和94.08%,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(P<0.05);活率分别为0.43±0.04、0.45±0.04和0.43±0.03,常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(P>0.05);存活指数分别为0.25、0.05和0.05,常规冻精与X、Y型冻精组间差异显著(P<0.05);顶体完整率分别为(77.6±1.0)%(、84.6±0.5)%和(82.2±0.6)%常规冻精与X、Y型冻精组间差异不显著(P>0.05)。用流式细胞技术可以分选获得梅花鹿XY冷冻精液,性别比和品质达到低剂量人工授精的要求。     

不同种公牛X／Y精子分离效果及对体外受精能力的影响

本研究首先时比了3头种公牛的X/Y精子分离效果,并通过常规冻精和性控冻精的活力检测,来评价流式细胞仪分离及冷冻处理对不同种公牛精子分离效果的影响.应用体外受精试验,探讨了不同种公牛个体的常规冻精和分离冻精的受精和胚胎发育能力.试验结果表明,不同种公牛个体间除分离准确率外,精子的分离速率(4.1×103/s vs 4.5×103/s vs5.3×103/s,P<0.05)和死精率(19.3%vs 14.5%vs 11.0%,P<0.05)都存在显著差异.三头种公牛的性控冻精在体外培养过程中,精子活力的下降速率要显著快于常规冷冻精液组.不同种公牛个体的分离冻精组在4小时的精子活力也有显著差异(1号种公牛9.1%vs 2号种公牛22.1%、3号种公牛21.5%,P<0.05).此外,常规冻精和性控冻精在受精后的卵裂率和囊胚率存在显著差异(1号种公牛:64.0%vs 41.6%,26.9%vs 19.3%;2号种公牛:67.3%vs 52.3%,29.2%vs26.5%;3号种公牛:60.3%vs 43.1%,27.3%vs 29.9%).上述结果表明,不同种公牛个体间精子的分离速率、死精率、以及对分离冷冻处理的耐受性存在显著差异,造成其解冻后活力和存活时间不同程度的下降;但在体外受精试验中,3头种公牛的分离精子仍具有正常的受精能力,并能支持胚胎发育到囊胚阶段.综上结果表明,选择适宜的种公牛和降低分离及冷冻处理对精子的损伤,对于提高精子的分离效率、分离精液的品质和体外受精效率都有着重要的意义.     

日粮中添加胡萝卜对荷斯坦种公牛精液品质的影响

本试验选择16头荷斯坦种公牛随机分为2组，对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加胡萝卜，试验期为75d，观察对荷斯坦种公牛原精产量、精子密度、精子活力和制冻精数量的影响。结果表明：在荷斯坦种公牛日粮中添加胡萝卜后，试验组牛的原精产量、鲜精精子活力和制冻精数量都极显著高于对照组（P〈0．01）；精子密度与对照组间差异不显著（P〉0．05）。本试验结果验证了在荷斯坦种公牛日粮中添加胡萝卜可显著提高精液产量、精子活力和制冻精数量，提高精液品质。     

利用流式细胞仪建立牦牛X、Y精子分选体系的研究

旨在探索与优化牦牛精子分选条件,建立高效的牦牛X、Y精子分选技术体系。本研究制备了牦牛精液细胞悬液,采用不同量的DNA染料Hoechst33342和诱惑红共孵育精子细胞。利用流式细胞仪分选牦牛X、Y精子,通过比较分选效率、分选后精子活力及发育潜能,优化分选条件。运用RT-PCR检测分选精子的纯度,利用精子分析系统检测分选后精子的活力。将分选后的精子与体外成熟的卵母细胞进行体外受精,统计分选后精子的发育潜力,并采用SRY片段的PCR法检测早期胚胎的性别。结果显示,10 μL Hoechst33342染色40 min后的分选效果最佳,其分选产物的准确度和分选效率显著优于其他组,分选后的X、Y精子活力与20 μL Hoechest33342染色20 min组相当,显著高于其他组（P<0.05）。添加5 μmol·L^-1的诱惑红对分选的纯度无显著影响（P>0.05）,但能显著提高分选后精子的活力（P<0.05）。分选后X、Y精子分别与卵母细胞进行体外受精,受精率和囊胚形成率与未分选组差异不显著（P>0.05）,且胚胎性别比例与分选后精子纯度吻合。综上,本研究建立并优化了流式细胞仪分选牦牛X、Y精子的方法,添加诱惑红有助于改善分选后牦牛精子的活力,为后期牦牛性控精液的制备及生产奠定了基础。     

牛、梅花鹿和山羊X、Y精子头部面积差异分析

用流式细胞仪分选有正常繁殖力的公牛(n=3)、公鹿(n=3)、公山羊(n=1)的精液,获得高纯度(≥91%)X和Y细管冷冻精液,对解冻后的X和Y精子进行常规染色制片,采用Motic Images Advanced 3.2软件自动测量X精子和Y精子头部面积。结果显示,公牛X精子的头部面积35.84μm2±4.12μm2,极显著高于Y精子(34.81μm2±3.72μm2)(P<0.01);梅花鹿X精子的头部面积33.29μm2±2.93μm2,极显著高于Y精子(32.90μm2±3.25μm2)(P<0.01);山羊X精子的头部面积28.53μm2±3.16μm2,也极显著高于Y精子(28.07μm2±3.19μm2)(P<0.01);不同分选纯度的公牛精液X精子之间、Y精子之间头部面积差异均不显著(P>0.05)。结论:牛、梅花鹿、山羊X精子头部面积均极显著高于Y精子。     

牛性控精液纯度快速评价方法研究

为建立一种方便快捷的性控精液品质鉴定方法,本研究选择牛X、Y染色体特异基因PLP与SRY,对其提取质粒,构建含有不同比例的PLP和SRY质粒模板,即X:Y为1:20、1:10、1:5、1:1、5:1、10:1、20:1,并将其作为性别相关DNA定量的参考模板,使用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)对市售的3头公牛性控精液进行了性别比例检测。结果表明:采用该方法检测的X-分选精液、Y-分选精液与未分选精液中X与Y精子比例与其所标注的X、Y精子比例(流式细胞仪重分析检测纯度)差异不显著。因此,本研究中建立的实时荧光定量PCR测定法可用于评估性控精液的纯度。     

关于公牛冷冻精液冻后存活精子数的探讨

当前评定公牛精液品质的主要依据是采精量、原精活力、精子密度、精子的冻后复活率(冻精活力/原精活力)等项指标。由于不同公牛精液活力、密度、及冻后复活率不同,总的精液品质优劣就无法衡量。在实际工作中,我们常常发现生产性能和外貌优秀的公牛,由于精液品质低     

不同稀释液配方对牛冻精品质的影响

选用3种稀释液配方分别对6头种公牛精液进行稀释、封装、冷冻,并检查种公牛冻精解冻后的精子活力、畸形率、顶体完整率、冻后废弃率、存活时间及镜检感光度.结果表明：3种不同稀释液配方对种公牛精液冻后活力影响差异均显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液生产冻精的畸形率极显著高于Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液（P＜0.01）,3种稀释液冻精精子顶体完整率之间差异均极显著（P＜0.01）,Ⅲ稀释液与Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液间对牛精液所生产冻精的冻后废弃率影响均差异显著（P＜0.05）,Ⅰ稀释液与Ⅱ稀释液和Ⅲ稀释液间对牛精液所生产冻精的存活时间影响差异也显著（P＜0.05）,Ⅲ稀释液生产的冻精精子感光度优于Ⅰ稀释液和Ⅱ稀释液,其余各项指标差异均不显著（P＞0.05）.因此,可用自配Ⅱ稀释液替代进口专用Ⅲ稀释液.     

退掉性别控制胚胎移植试验

试验的目的是研究分选X型冻精与常规冻精品质的比较，结果显示：分选X精子的精液密度、活率、存活指数等各方面指标均明显低于常规冻精（P〈0．05）；使用4支分选X型冻精进行体内受精胚胎生产，结果对排卵数小于17枚的供体母牛进行体内受精胚胎生产效果良好，大于17枚则部分未受精；分选X型冻精奶牛鲜胚双胚移植与分选X型冻精奶牛鲜胚单胚移植进行比较，结果性控奶牛鲜胚双胚移植与单胚移植产犊率差异不大，双胚移植经济效益较高；分选X型冻精与常规冻精所产母犊比较，结果性控胚胎移植所产犊牛初生和60日龄各项指标与常规冻精所产犊牛差异不显著（P〉0．05）。     

对奶牛配种中几种性别控制技术的比较

1性控精液 性控精液包括鲜精和冻精两种方式。首先是提取优种公牛的精液；然后根据精液中含X、Y染色体不同精子其物理特性（包括体积、密度、电荷、运动状态）、化学特性（包括DNA含量、特异抗原）的不同。运用光学、电学等原理对精子进行分离：再剔除含有Y染色体多的精子。提取保留含X染色体多的精子，即获得性控鲜精，含X染色体的精子达到90％以上。可直接用于输精配种。而经过这样分离后的性控鲜精，再制作成冻精就称为性控冻精。     

不同季节和气候条件对种公牛精液品质的影响的研究

[目的]研究不同季节气候条件对种公牛精液品质的影响。[方法]从采精种公牛中随机抽出5头,选取气温最高（7月份）最低（1月份）和适中温度（4,9月份）进行试验,分别对不同时期所采得的精液进行检测。[结果]在最高温度月份7月份（25℃）时5头种公牛的平均精液量为5.88mL,原精活率67.2%,精液密度16.64亿/mL,冻后活率33.8%,生产冻精数143.4剂,精子畸形率23%。1月份环境温度平均在-11.2℃时,5头种公牛的精液量平均为5.7mL,原精活率66.8%,精液密度13.3亿/mL,冻后活率37.4%,生产冻精数为275.8剂,精子畸形率17.8%。在4,9月份环境温度12℃时精液量为6.6mL,原精活率73.2%,精液密度16.92亿/mL,冻后活率41.8%,生产冻精数404.4剂,精子畸形率12.6%。精液量之间差异显著（P〈0.05）,原精活率之间差异显著（P〈0.05）,精子畸形率之间差异显著（P〈0.05）。冻后活率和冻精生产数差异不显著。[结论]环境温度过高或者过低都会影响精液品质,种公牛在适宜的温度下生产的精液品质也会更加优良,种公牛在温度较高的条件下生产精液品质比在低温条件下还要差,种公牛最适宜的生产温度为12℃～16℃。     

低剂量马鹿XY精液人工授精试验

利用流式细胞仪分离的马鹿X和Y型冷冻精液与常规精液对比，针对自然发情的马鹿采用直肠把握人工授精。结果表明：每剂（0．25mL）含有10。个有效精子的X和Y型冻精输精产仔率分别为70％和80％，而含有10^7个有效精子的常规冻精为87％，两组间差异不显著（P〉0．05），所产后代性别比率分别为0：7，8：0和12：14，与对照组相比性别比显著偏离。X和Y型冻精与常规冻精产后代的出生及60日龄的体重差异不显著（P〉0．05）。     

利用流式细胞仪分离奶牛精液的性别控制效果观察

目前,常见的牛性别控制方法有早期胚胎性别鉴定法和利用流式细胞仪进行X、Y精子分离法两种。流式细胞仪精子分离法是根据X、Y精子在DNA含量上的差异来分离精子。分离后的X、Y精子用于人工授精或显微授精可在授精之前就控制其性别,因而被认为是更具有实用价值的方法。此次研究通过对分离后精子的人工授精效果和性别控制效果进行试验观察,以期为该方法的进一步应用提供依据。1材料与方法1.1公牛及采精公牛为大庆田丰生物有限公司饲养的荷斯坦牛,共12头。饲以全价营养日粮,每天喂给鸡蛋1枚。采用常规的假阴道法采集精液。1.2精液的处理将采…     

提高种公牛冷冻精液品质的综合措施

【目的】冷冻精液的品质直接关系到家畜品种改良工作的成效,通过改进和规范冻精制作操作规程,为家畜品种改良生产并提供高品质的冻精。【方法】结合多年从事种公牛饲养管理、采精技术、冻精生产、保存与运输等多方面的工作经验,综合了整体提高牛冷冻精液的质量措施以及相应的关键配套技术。【结果】采用上述措施,本站生产的鲜精精子正常形态率达99%,冻精精子正常形态率为84%,冻精活力提高5%~10%,充分挖掘了种公牛的生产潜力。【结论】通过采用本套技术措施,有效提高了种公牛冻精质量,并且冻精产量增加,冻后品质也有提高。     

影响荷斯坦种公牛冷冻精液精子活力和剂数诸因素分析

应用多元回归分析和通径分析的原理，系统分析了荷斯坦种公牛原精各主要指标（射精量、原精密度、原精活力）及冻后精子复苏率对冻后精子活力和冻精剂数的影响程度，以及它们之间的相关程度大小。分析结果说明，要想提高冻后精子活力这一质量指标，就要提高原精活力、原精密度、冻后精子复苏率；而提高冷冻精液剂数这一数量指标，就要提高射精量、原精密度。且只有通过提高种公牛营养水平，提高来精技术和冷冻技术才能达到。     

饲料中添加Penergetic-T对种公牛精液品质的影响

试验旨在研究 Penergetic-T 对种公牛精液品质的影响,选择 120 头健康无疾病的西门塔尔种公牛随机分为试验组和对照组,每组 60头,每头牛为 1个重复。对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加 0.25 g(/ d 头)Penergetic-T,共饲喂 90 d,检测射精量、精子密度、冻精产量及精子活力、精子畸形率。结果表明:饲料中添加 Penergetic-T 种公牛鲜精的射精量、精子密度、冻后产量、精子活力及畸形率均优于对照组,且差异显著。说明,饲料中添加 Penergetic-T 可显著提高种公牛的精液品质与冻精产量,给种公牛站带来更多的经济价值。     

注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响研究

[目的]研究注射口蹄疫疫苗对种公牛精液品质的影响。[方法]随机选择6头种公牛,并采其精液进行检测,用比较方法研究。[结果]注射双价灭活疫苗前精液量6.8ml,鲜精活率70%,精液密度17.3亿/mL,冻后活率39.7%冻精数414.8剂,精子畸形率14.2%。注射双价疫苗之后精液量4.3 mL,鲜精活率6.5%,精液密度12.7亿/mL,冻后活率34.8%冻精数162.3剂,精子畸形率18%。[结论]注射疫苗后,种公牛的精液品质也随之下降,精液量、精子密度和原精活率注射后较注射前极显著降低,认为注射口蹄疫疫苗对种公牛的精液品质产生较大影响。     

马鹿XY精子对梅花鹿腹腔内窥镜输精试验

41头梅花鹿被分为3组,CIDR+PMSG法同期发情,用流式细胞仪分离的马鹿X和Y型冷冻精液与常规精液对梅花鹿进行腹腔内窥镜子宫角人工授精.结果表明,0.25 mL/支含有106个有效精子的X和Y型冻精产仔率分别为100 %(2 / 2)和92 %(22 / 24),而含有107个有效精子0.25 mL/支的常规冻精产仔率为 93%(14/ 15),X和Y型冻精与常规冻精组间的受胎率差异不显著(P＞0.05).X和Y精子受精后产出后代全部为预定性别,所产后代雌雄比率分别为:X组为0∶2,Y组为22∶0,与对照6∶8相比性别比显著偏离.X和Y型冻精与常规冻精所产后代出生重及60 d时的体重差异不显著(P＞0.05).     

低剂量梅花鹿XY精子马花杂交人工授精试验

采用流式细胞分离仪分离的梅花鹿X和Y型冷冻精液与常规冻精对62头3组同期化处理的马鹿进行直肠把握人工授精。结果表明,0.25 mL/支含106个有效精子的X和Y型冻精产仔率分别为43%和37%,而0.25 mL/支含107个有效精子的常规冻精产仔率为55%,X、Y型冻精与常规冻精组间差异显著(P<0.05),所产后代性别比率分别为0∶10,9∶0和5∶6,X、Y型冻精与常规冻精组间差异显著(P<0.05),X、Y型冻精与常规冻精所产后代出生及60 d时的体重差异不显著(P>0.05)。     

青海气候条件下热应激对不同品种公牛精液品质的影响

采用三个不同品种公牛研究了青海气候条件下热应激对其精液品质的影响。结果表明：三个不同品种公牛在热应激状态下,新西兰荷斯坦公牛（HS）原精精液量、精子密度显著降低（P〈0．05）、原精活力及冻后活力极显著降低（P〈0．01）;德国西门塔尔公牛（XM）的原精精液量、精子密度极显著降低（P〈0．01）,原精活力及冻精品质无明显变化（P〉0．05）;澳洲矮脚公牛（LL）的原精精液量、精子密度、原精活力、冻精品质却显著提高（P〈0．05）。