香蕉茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 以香蕉(Musa spp. ) 为试材, 对其离体培养茎尖玻璃化法超低温保存影响因素进行研究。结果表明, 不定芽在MS + 3.0～5.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA的培养基上分化较好。香蕉茎尖超低温保存较佳体系是: 2.0～3.0 cm的茎尖在含0.4 mol/L蔗糖培养基上预培养2 d, 剥取带1～2个叶原基的茎尖(长1.0～1.5 mm) , 室温(25℃) 下装载液(MS + 2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖) 装载20～30 min, 然后用玻璃化溶液( PVS2 ) 于0℃下处理40 min, 换1次PVS2后迅速投入液氮。保存至少1 h后, 在40℃水浴中化冻90 s, 用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤2次, 每次10 min, 然后转入含0.3 mol /L蔗糖的MS培养基上,暗培养10～15 h后转移到含0.5 mg/L 62BA的MS培养基中, 暗培养1周后转移到正常光下, 3个香蕉品种(巴西蕉、广东香蕉2 号、广东粉蕉1 号) 的成活率分别为75.9%、40.0%和69.6% , 再生率分别为63.4%、35.0%和63.4%。再生植株生长和分化正常, 生根后可移栽成活。     

玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生

 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究。约10 mm 长的柑桔茎尖于含5 %二甲基亚砜(DMSO) 的培养基上预培养3 d , 切取2～2. 5 mm 长的茎尖, 室温下60 %玻璃化溶液2 (PVS2) 装载20～30 min , 然后用PVS2 于0 ℃处理50～60 min , 换入新鲜的PVS2 , 迅速投入液氮中, 24 h 后在40 ℃水浴中迅速化冻, 再用1. 2 mol/L 蔗糖培养基洗涤2次, 接种于含BA 1. 0 mg/L 的MT培养基上, 26 ℃暗培养1 周后转于正常光下培养。枳壳茎尖超低温保存后用氯化三苯基四氮唑(TTC) 法检测, 成活率为100 % , 培养再生率达到90 % ,再生后的苗能正常生根, 与对照没有形态上的变异, 移栽可成活。     

玻璃化法超低温保存猕猴桃离体茎尖及其植株再生

 以中华猕猴桃矮型种质为离体培养材料, 建立试管无性系, 对其离体茎尖的玻璃化法超低温保存技术进行研究, 探讨猕猴桃种质长期保存的适宜途径。结果表明, 含1～2个叶原基(1.5～2.5 mm) 的茎尖, 在5%二甲基亚砜(DMSO) + 5%蔗糖+MS培养基上预培养4 d后, 于室温下用2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖预处理30 min, 再在0℃下用玻璃化液(PVS2 ) 脱水处理40 min并迅速投入液氮中, 保存24 h后接种至继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别为56.7%和51.6%。再生植株生根后可移栽成活。     

食用百合种质的玻璃化法超低温保存技术初探

以离体茎尖为试材 ,采用玻璃化法 ,对食用百合离体超低温保存技术进行了初步研究。结果表明 ,用2～ 3mm茎尖 ,在MS +0 .5mol·L-1蔗糖浓度的培养基上预培养 1～ 2d ,室温下植物玻璃化溶液 (PVS2 )处理 2 0min ,换入新鲜的PVS2 ,迅速投入液氮中 ,2d后取出 ,在 4 0℃水浴中解冻 2min ,再在 2 5℃水浴中解冻 10min ,用1.2mol·L-1蔗糖液体培养基洗涤 2 0min ,接种在 6 -BA 0 .5mg·L-1+NAA 0 .1mg·L-1+GA3 0 .3mg·L-1+蔗糖 30 g·L-1+琼脂 7g·L-1的MS培养基上 ,2 5℃弱光培养 1周后转为正常光下培养 ,2周后再生率达到 5 2 .6 %。     

大蒜茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

 用山东‘苍山大蒜’进行了茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究。5～8 mm大蒜茎尖在MS +0.7 mol/L蔗糖的固体培养基上预培养7 d, 切取3.0～3.5 mm的茎尖, 在20℃下经60% PVS2 处理60 min,再于0℃下用PVS2 处理5～60 min后, 换适量新鲜PVS2 , 浸入液氮。保存2 d或1个月后取出, 在37℃水浴中解冻2 min, 用MS + 1.2 mol/L蔗糖液体培养基洗涤2次, 每次10 min, 经过恢复培养, 茎尖成活率最高可达到100%。     

马铃薯(Solanum tuberosum L.)茎尖超低温保存的研究

以克新8号为试验材料,通过优化超低温保存马铃薯茎尖中影响成活及再生的几个关键因素,成功建立了基于玻璃化法的马铃薯茎尖超低温保存体系。茎尖在MS+0.3M蔗糖的培养基上预培养1天后,经2M甘油+0.4M蔗糖的加载液室温加载30 min,浸入到PVS2溶液中(00C)处理60 min,将处理后的茎尖转至含有0.05 mg/L GA3的MS后培养基上培养,成活率和再生率达到94.8%和78.1%。并将建立的玻璃化法应用到其它4个品种,平均再生率为65.5%,研究结果可为中国马铃薯种质资源的超低温保存提供技术支持。     

马铃薯茎尖小滴玻璃化法超低温保存及其再生植株的遗传稳定性

以马铃薯试管苗为试材,对其茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究,并对再生植株进行了遗传稳定性检测。结果表明,马铃薯茎尖依次在含有0.3 mol · L-1和0.5 mol · L-1蔗糖的液体MS培养基中预培养各1 d后,在0 ℃下PVS2处理30 min,转到铝箔条上PVS2小滴上（约15 μL）,将粘有茎尖的铝箔条在液氮里蘸一下,然后直接装入盛满液氮的冷冻管中,投入液氮至少保持1 h。室温下用含有1.2 mol · L-1蔗糖的MS液体培养基解冻并洗涤30 min后,接种到MS + 0.5 mg · L-1 Zeatin + 0.1 mg · L-1 NAA＋1.0 mg · L-1 GA3恢复培养基上,存活率和再生率最高达79.91%和62.52%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。     

“童子一号”草莓玻璃化法超低温保存技术研究

以玻璃化法进行"童子一号"草莓离体茎尖的超低温保存研究,探讨了低温锻炼时间、预培养时间、预处理时间、PVS2处理时间等对存活率的影响。结果表明:将4℃条件下低温锻炼30d的健壮草莓苗茎尖,接种在固体预培养培养基中预培养4d,预处理30min后,吸出预处理液,加入PVS2,0℃处理80min后,更换新鲜的PVS2,并迅速投入液氮60min后,置于40℃快速化冻1min;室温洗涤3次并取出茎尖,接种到再生培养基恢复培养;成活率最高可达43.00%,且再生植株分化正常。     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。     

青岛百合包埋-玻璃化法超低温保存技术研究

以青岛百合茎尖为试材,研究了外植体的选择、预培养的蔗糖浓度、预培养时间、包埋预处理方法、PVS2处理时间对百合存活率的影响。结果表明:小鳞茎在4℃冷锻炼培养28d后,剥取2～3mm的茎尖为试验材料,在蔗糖浓度0.4mol/L的MS+100g/L海藻糖+1mg/LABA的培养基上,预培养3d,然后加0.4mol/L蔗糖和2mol/L甘油、3%褐藻酸钠进行包埋预处理,在0℃条件下用PVS2处理60min,投入液氮保存1h,38℃解冻2min、洗涤后转接至恢复培养基上暗培养7d,用TTC检测存活率最高可达到67.5%。     

Cryopreservation of Malus cultivars: Comparison of two droplet protocols

Two droplet procedures, droplet-vitrification (PVS2) and droplet (DMSO) were applied for cryopreservation of in vitro cultured apple (Malus domestica Borkh., cvs. Florina, Idared, Colmar and Rebra) plants. The highest post-thaw regrowth rates (70% for cv. Florina, 66% for cv. Idared, 63% for cv. Colmar and 60% for cv. Rebra) were achieved after using the droplet-vitrification (PVS2) protocol. The excised shoot tips (2–3 mm in length) were precultured in 0.5 M sucrose enriched media for 24 h. Subsequently they were transferred in PVS2 vitrification solution for 30 or 40 min (depending on cultivar) at 24 °C and then immersed in liquid nitrogen. Rewarming was performed in liquid MS medium at 24 °C. Plants regenerated from cryopreserved shoot tips did not display any sign of morphological alteration or abnormalities in growth in comparison with control plants.     

通过玻璃化超低温处理脱除草莓轻型黄边病毒(SMYEV)研究

以草莓品种明宝为材料,取茎尖做初代培养,继代扩繁5次后,取2mm左右的茎尖,利用玻璃化超低温技术对SMYEV进行脱除,并利用结合内标的多重RT-PCR技术对再生植株进行病毒检测。结果表明,在病毒脱除过程中,预培养蔗糖浓度为0.5mol/L,处理3d;装载处理为25℃,60min;玻璃化处理为0℃,120min;液氮处理60min后,进行40℃水浴2min,草莓茎尖的存活率为76%,而草莓轻型黄边病毒的脱除率为95%。只有通过液氮处理才可以脱除该病毒,液氮处理前的玻璃化处理脱毒率为0。利用超低温脱毒法可以简便有效地脱除SMYEV。     

李离体茎尖的超低温保存

 以简单玻璃化法为基本方法,研究了影响李离体茎尖超低温保存的因子—继代培养时间、低温驯化时间、PVS3处理时间以及化冻后茎尖存活检测;建立了较为简单的李离体茎尖超低温保存技术程序：即选择继代培养120 d的试管材料,经过5 ℃低温驯化21 d,0.7 mol·L^-1蔗糖预培养1 d,PVS3处理100 min,浸入液氮。化冻后茎尖存活率可达60 %以上。