ELISA操作中某些非特异性反应因素的消除

酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种敏感性高、特异性强、简便易操作的酶免疫检测技术,近年来得到了广泛应用。但在实际应用中,容易产生非特异性反应,造成假阳性结果,影响结果判定。造成这些非特异性反应的因素,除了所用试剂原因之外,还有不少是由于ELISA操作过程中产生的。笔者根据几年来工作实践,将这些非特异性反应因素及其消除方法小结如下。     

鱼粉中掺杂尿素的定性快速检验法

<正> 尿素检测方法有许多,如二缩脲法、NaOH气室法等,但是由于鱼粉的干扰使以上两种方法失去灵敏性。我们采用奈氏法和pH值升高法进行检验,效果很好,灵敏度高。现将方法介绍如下。 1.奈氏法 1.1原理鱼粉中尿素在黄豆中脲酶作用下生成碳酸铵,再与奈氏试剂中氢氧化钠作用生成氢氧化铵,再与碘化钾汞盐反应形成棕黄色的碘化双汞铵。以此来判断尿素存在。 1.2 试剂配料奈氏试剂取碘化钾15g、碘11g、汞15g、蒸馏水10ml,加入100ml锥形瓶。用力振荡15min,至碘的颜色转变为带绿色碘化钾汞止。将上清液倾     

UNG酶在兽用生物制品支原体PCR检测中防止假阳性的应用

为了研究尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG酶)在减少兽用生物制品支原体PCR检测中的假阳性情况,本研究通过在PCR试剂中加入UNG酶,在PCR反应前25℃作用10 min,再50℃作用2 min,结果显示,该法可以有效防止PCR产物的污染,减少假阳性的产生。     

氮肥对假俭草抗寒性和青绿期影响的研究

用尿素(0、5、10、15和20 g/L)对盆栽假俭草E-126材料进行处理,研究其对假俭草Elemochloa ophiuroides的抗寒性和绿期的影响,结果表明,在低温条件下,尿素处理的假俭草与对照相比,不仅降低了电导率,提高了叶绿素的含量、抑制了叶绿素的分解,而且提高了可溶性糖、脯胺酸的含量,从而提高了抗寒性.其中效果最好的处理为10 g/L,可延长假俭草绿期11～12 d.     

羊氟乙酰胺中毒的诊断

反刍动物发生氯乙酰胺中毒时，由于瘤胃活动本身产生氨，应用奈氏试剂法进行诊断时，易造成假阳性结果而误诊，因此结合应用异羟肟酸反应进行毒物检测。     

识别真假尿素

1.看:真尿素是一种半透明且大小一致的无色颗粒。若颗粒表面颜色过于发亮或发暗,或呈现明显反光,则可能混有杂质,这要多长个心眼儿,当心买到假尿素。2.查:查包装的生产批号和封口。真尿素一般包装袋上生产批号清楚且为正反面都叠边的机器封口;假尿素包装上的生产批号不清楚或没     

鱼粉中掺杂尿素的快速鉴别和定量测定

<正> 市售鱼粉中掺入尿素的商品屡见不鲜。现将我们所采用的此类伪劣商品快速鉴别和尿素定量测定方法介绍如下。 1.鱼粉中掺有尿素的快速鉴别试剂为0.1％甲酚红指示剂,由0.1g甲酚红溶液100ml95％乙醇中而得。 1.1 方法1 取约1.5g鱼粉于两支试管中,     

RT—PCR技术常见问题的分析

聚合酶链式反应（Polimerasechainreaction，简称PCR技术）具有特异性强、灵敏度高、简便快速、对原始材料质量要求低的特点，为兽医分子生物技术实验室中的首选方法之一。但因该技术高度的灵敏性容易导致交叉扩增反应，出现假阳性结果等，现就其常见问题作一探讨。１PCR技术常出现的几个问题１．１假阳性实验中设立的阴性对照出现阳性结果，则实验检测结果可能有假阳性。造成假阳性的原因主要包括监测样品污染、监测试剂污染、扩增产物污染等。１．２假阴性实验中设置的阳性对照未能扩增成阳性结果，则实验可能有假阴性结果。但应注意，…     

叶施N、N+Fe对假俭草扦插成活及成坪速度的影响

试验用不同浓度的N对假俭草插穗进行浸泡处理后,观测插穗的外观反映,并通过测定生根时间、生根长度、生根数量,说明用4%的尿素溶液处理能使假俭草插穗的成活率提高24%,过高的浓度使插穗出现中毒症状;而4%的尿素与Fe溶液共同处理后,插穗的成活率可提高32%。在假俭草幼坪上叶施不同浓度的N、N+Fe,通过测定茎的生长速度、分蘖情况,说明叶施合适的N、N+Fe可以加速假俭草草坪的成坪速度,并且提高草坪的外在品质,也提高了假俭草的活力和抗逆性。     

叶施N、N+Fe对假俭草扦插成活及成坪速度的影响

试验用不同浓度的N对假俭草插穗进行浸泡处理后,观测插穗的外观反映,并通过测定生根时间、生根长度、生根数量,说明用4%的尿素溶液处理能使假俭草插穗的成活率提高24%,过高的浓度使插穗出现中毒症状;而4%的尿素与Fe溶液共同处理后,插穗的成活率可提高32%.在假俭草幼坪上叶施不同浓度的N、N+Fe,通过测定茎的生长速度、分蘖情况,说明叶施合适的N、N+Fe可以加速假俭草草坪的成坪速度,并且提高草坪的外在品质,也提高了假俭草的活力和抗逆性.     

影响ELISA检测结果的因素

1试剂因素1.1试剂的选择保证ELISA检测结果关键的因素。不要用无批号的试剂,要选用知名的,具有"三证"的试剂。不同批号的试剂不能混合使用,过期试剂则不能使用。1.2临床试验试剂的温度大多数的做法是在做试验时直接将试剂从冰箱里拿出即用,这样会导致对一些弱阳性样品的检测出现假阳性。因此,在ELISA检测中试剂的准备最为关键的是,将试剂盒从4℃冰箱拿来,不需要避     

腐植酸尿素代替豆饼育肥肉牛试验

尿素是反刍动物较理想的非蛋白氮补充来源，但尿素在牛瘤胃中迅速分解易导致中毒，使尿素的应用受到限制。腐植酸与尿素反应生成的络化物，可抑制尿素分解，促进尿素的转化和吸收。我们用腐植酸尿素代替一般饲料配方中的豆饼进行育肥肉牛试验，取得了较好的经济效益，现介绍如下。     

高效液相色谱法测定卡巴匹林钙产品与反应液中尿素的含量

建立了一种用于测定卡巴匹林钙产品及反应液中尿素含量的高效液相色谱法。确立了最佳色谱条件,色谱柱为Waters Xselect HSS T3 C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(5∶95,V/V),检测波长为195 nm,流速为0.5 mL/min,柱温30℃,进样量10μL。结果显示,尿素浓度在0.12~120μg/mL范围内具有良好的线性关系(r>0.999);尿素的检出限为0.05μg/mL,定量限为0.1μg/mL;分离度R>1.5,重复性的相对标准偏差<1.0%(n=6);卡巴匹林钙产品中尿素的回收率范围为98.10%~100.46%,反应液中尿素的回收率范围为95.32%~101.20%。本方法操作简便、准确度高、重复性好、检测速度快,在合成工艺中对卡巴匹林钙产品及反应液中尿素的质量控制具有重要意义。     

假高粱的生物学特征及防治对策的研究进展

假高粱是外来恶性杂草,在我国不断扩散和为害,必须对它进行防治。本文综述假高粱的研究成果,为它的防治提供指导。首先综述了假高粱的形态特征与同属其他种的区别,主要是秆粗0.5 cm,叶舌长1.0~1.5 cm,外颖顶端3齿裂。含假高粱的土壤中小麦、棉花、莴苣的种子发芽率被抑制40%以上;小麦、玉米、棉花地上部分生长被抑制9.8%以上。对假高粱的防治可以采用10%尿素和15%碳铵灭杀其种子;可以用白萝卜和昆虫抑制其生长;使用咪唑乙烟酸、甲氧咪草烟、草铵膦、烯草酮加草铵膦可以杀死94%的植株;喔草酯和喹禾灵可以减少假高粱的生长97%以上。可以利用假高粱喂养中华稻蝗,也可以用来造纸。提出了加强假高粱生理生态习性研究、开发专性除草剂、筛选和利用生物进行防治、进行景观利用和综合利用等建议和措施。     

生长毛兔不同蛋白质水平日粮添加羟甲基尿素试验

生长毛兔不同蛋白质水平日粮添加羟甲基尿素试验赵国成（江苏省淮阴县外贸公司２２３３００）前言羟甲基尿素是在一定反应条件下，甲醛与尿素氨基发生反应生成的产物，是一种白色无味的粉状固体，可溶于水，含氮量３９～４０％。它在消化道酸性环境中水解产生甲醛和尿素，...     

鸡大肠杆菌地方菌株的分离培养与药敏试验

由于鸡大肠杆菌血清型（群）比较复杂 ,且变异性较强 ,很难用疫苗得到有效的预防 ,并且对抗生素容易产生耐药性 ,在临床防治工作中 ,要取得较好的治疗效果 ,就需要选择对大肠杆菌比较敏感的药物 ,来进行预防与治疗 ,才能达到控制该病的目的。本文针对这一方面作了有益的探讨。１材料１．１病料采自黄河三角洲部分县市。１．２试剂ＭＲ、Ｖ -Ｐ、靛基质、明胶液化、氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶试验培养基及反应试剂由本所自制。１．３普通琼脂平板按照常规 ,由本所自制。１．４麦康凯琼脂、伊红美兰琼脂、三糖铁琼脂均购自山东省卫生防疫站 ,…     

腐植酸尿素代替豆饼育肥肉牛试验报告

尿素是反刍动物较理想的非蛋白氮补充来源 ,但尿素在牛瘤胃中迅速分解易导致氨中毒 ,使尿素的应用受到限制。腐植酸与尿素反应生成的络合物可抑制尿素分解 ,促进尿素的转化和吸收。我们用腐植酸尿素代替一般饲料配方中的豆饼进行了育肥肉牛试验 ,取得了较好的经济效果 ,现报道如下。1　材料与方法1.1　试验材料1.1.1　腐植酸尿素　中国科学院山西煤炭化学研究所研制。1.1.2　试验选择与分组　选择鸡西市西郊乡一养牛户饲养的18～ 2 4月龄、体重在 390kg左右的改良利木赞肉牛 4 0头 ,随机分为两组 ,Ⅰ组和Ⅱ组 ,每组 2 0头 ,组间体重差异不显…     

猪腎虫病(stephanuriasis)皮內反应試驗报告

(1) 本文报告了猪腎虫冷浸和热浸两种抗原的制备方法及其皮內反应試驗的初步結果。(2) 根据尿液检查与皮內反应丘疹直径的大小以及剖检部分受检猪对比的結果分析,初步定出皮內反应标准为:注射抗原0.1毫升,經10—15分钟后观察,丘疹直径扩大至1.2厘米或1.2厘米以上者为阳性;丘疹直径在1.2厘米以下者为阴性反应。(3) 1:100冷浸抗原和1:100热浸抗原分别試驗猪只53例和49例,与尿液检查符合率各为90.6%和83.8%,平均符合率为87.2%。根据試驗后剖检12例受試猪証明:抗原皮內反应出現早于虫卵,即早期病例亦能出現阳性結果,因此皮內反应实际阳性检出率可达99%。(4) 对所謂“假阳性”反应作了分析,指出由于尿液检查不能检出早期病例。經剖检証明:这种所謂“假阳性”反应的12例受試猪都有猪腎虫的幼虫感染,故所謂“假阳性”反应,实际上并不假,說明抗原皮內反应敏感性很高,具有早期診断的价值,給猪腎虫病早期治疗提供了依据。(5) 在兽医临床診疗工作中,皮內反应可以协助兽医师迅速判断疾病,节約时間,提高效力。     

混菌发酵酒糟饲料的初步研究

选用产朊假丝酵母和霉菌2株真菌,以酒糟为原料,对混菌固态发酵酒糟的添加营养条件和发酵物真蛋白的含量进行了初步研究和测定。结果表明,基础培养基中添加0.5%尿素、1%硫酸铵及0.5%磷酸二氢钾,发酵物的含真蛋白量较高;通过正交试验,确定了混菌固态发酵酒糟的最佳培养基配方为酒糟90%、麸皮10%并添加尿素0.3%,硫酸铵0.5%和磷酸二氢钾0.5%,其发酵物的含真蛋白量高达13.13%。     

免疫胶体金法现场快速测定乳品中的三聚氰胺的应用研究

为了研究和验证免疫胶体金法快速检测乳制品中的三聚氰胺的效果,通过协同实验的方法,研究该方法的灵敏度、重复性、基质影响、特异性。利用随机于市场抽样乳品120件,分别用免疫胶体金法和国标法进行检测,验证该方法的假阴性、假阳性率。结果表明,用免疫胶体金法测定乳品中的三聚氰胺,检测限为0.5mg/kg,方法的稳定性较好,亚硝酸盐、三聚氰酸、L-脯氨酸对测定结果无干扰,但尿素对测定结果有干扰。免疫胶体金法测定乳品中三聚氰胺的假阴性为0%,假阳性率为0%。可见,免疫胶体金法快速检测乳品中三聚氰胺,方法简便、快速、准确、稳定,可作为乳品中三聚氰胺现场快速检测的一种有效手段。