德宏水牛及其杂交后代染色体多态性分析

[目的]为德宏水牛进一步级进杂交方案的选择提供科学依据。[方法]采用外周血及耳组织细胞培养法与染色体G-带分析对20头德宏本地水牛、25头摩拉与德宏二元杂水牛以及35头尼里与摩拉和德宏三元杂水牛进行了染色体核型分析。[结果]表明:德宏水牛染色体数均为2n=48;二元杂水牛染色体数均为2n=49;三元杂水牛出现2n=49,2n=50两种类型。[结论]从细胞遗传学角度首次阐明了德宏水牛染色体核型特征,揭示了德宏水牛二元杂、三元杂后代染色体多态性遗传规律,并探讨了染色体多态性遗传机理及与繁殖性能的关系。     

广西的尼里—拉菲水牛和摩拉水牛mtDNA D-loop区遗传多样性研究

[目的]探究引入广西南宁的尼里-拉菲水牛和摩拉水牛的mtDNA D-loop区遗传多样性与母系起源。[方法]采用PCR扩增、测序及生物信息学方法。[结果]对从广西南宁采集的52个江河型水牛（尼里-拉菲水牛25个,摩拉水牛27个）mtDNA D-loop序列与GenBank下载的20条尼里-拉菲水牛和23条摩拉水牛序列进行联合分析,共检测到112个变异位点,定义42个单倍型,发现摩拉水牛（Hd: 0.934±0.027）与尼里-拉菲水牛的遗传多样性（Hd: 0.929±0.017）都很丰富。NJ系统发育树显示尼里-拉菲水牛和摩拉水牛含有江河型和沼泽型水牛mtDNA支系,表明尼里-拉菲水牛和摩拉水牛引入中国后均与沼泽型水牛进行了杂交,在外貌上很难区分。[结论]引入广西南宁的尼里-拉菲水牛和摩拉水牛与沼泽型水牛存在广泛的血缘混杂现象。     

尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃产甲烷菌多样性比较

试验旨在比较尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃液中产甲烷菌的多样性,选取成年雌性尼里-拉菲水牛及海子水牛各3头作为试验动物,采用口腔导管法收集瘤胃液,提取瘤胃液总DNA,采用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rDNA,构建16S rDNA基因克隆文库。结果显示,从尼里-拉菲水牛和海子水牛中分别获得73、100条有效序列,均以Methanobrevibacter属为主。其中尼里-拉菲水牛有70条序列（17个OTUs）与已知菌的16S rDNA序列相似性 ≥ 97%,占总序列的95.89%,有3条序列（3个OTUs）与已知菌16S rDNA序列相似性处于93%~96%;海子水牛有70条序列（15个OTUs）与已知菌16S rDNA序列相似性 ≥ 97%,占总序列的70%,有30条序列（18个OTUs）与已培养菌16S rDNA序列相似性处于84%~96%。尼里-拉菲水牛和海子水牛瘤胃中的SGMT簇序列、RO簇序列所占总序列比例分别为76.71%、21.91%和76.00%、19.00%。系统进化树分析表明,所有序列分别聚集于两大分支上,其中海子水牛有16个OTUs代表序列和尼里-拉菲水牛8个OTUs代表序列聚集在进化树顶端的同一分支上,且系统发育距离与古菌中任何已知相似序列都相隔较远。综上所述,在本试验同等日粮条件下,尼里-拉菲水牛及海子水牛瘤胃内产甲烷菌序列均以Methanobrevibacter属为主,两水牛品种的SGMT簇序列比例基本一致,但尼里-拉菲水牛中的RO簇序列比例更高,海子水牛瘤胃内存在更多的未知产甲烷菌。     

河流型水牛种公牛染色体罗伯逊易位筛查

为了筛查河流型水牛种公牛染色体罗伯逊易位,试验采用常规微量全血培养和空气干燥制片法对摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、地中海水牛及其杂交后代共49头河流型水牛种公牛进行染色体的遗传检测和分析。结果表明:河流型水牛种公牛染色体数目均为2n=48+XY,包含5对双臂(中部、亚中部或亚端部)常染色体、19对端部着丝粒常染色体和1对性染色体,未发现染色体罗伯逊易位现象。     

摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因SNPs检测及遗传多样性分析

为研究水牛蛋白激酶AMP活化的催化亚基α2（protein kinase AMP-activated catalytic subunit alpha 2,PRKAA2）基因多态性,本试验以摩拉水牛和尼里-拉菲水牛基因组DNA为模板,扩增PRKAA2基因外显子4及内含子3部分序列,通过常规测序法检测其SNP并进行遗传多样性分析。结果发现,PRKAA2基因外显子4内存在1个SNP位点（c.462 G>A）,PRKAA2基因内含子3部分序列存在3个SNPs位点（IVS3.557 T>C、IVS3.560 C>T和IVS3.565 G>A）。经遗传多样性分析表明,在c.462 G>A位点的野生纯合型和杂合型比突变纯合型更有优势,IVS3.557 T>C和IVS3.560 C>T位点的突变纯合型为非优势基因型,IVS3.565 G>A位点杂合型为优势基因型。IVS3.565 G>A位点在摩拉水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态;c.462 G>A位点在尼里-拉菲水牛群体中处于Hardy-Weinberg非平衡状态。4个SNPs位点在摩拉水牛群体中均为中度多态;c.462 G>A、IVS3.557 T>C位点在尼里-拉菲水牛群体中为低度多态,IVS3.560 C>T、IVS3.565 G>A位点为中度多态。IVS3.557 T>C位点在两个水牛群体中杂合度较低。说明摩拉水牛IVS3.565 G>A位点和尼里-拉菲水牛c.462 G>A位点的基因型频率和基因频率遗传状态不平衡,尼里-拉菲水牛群体中IVS3.557 T>C位点遗传变异小,选择潜力不高。4个多态位点可以构建5种单倍型,其中T-C-G-G是摩拉水牛群体和尼里-拉菲水牛群体的优势单倍型。综上,本研究检测的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛PRKAA2基因上4个SNPs位点可为水牛标记辅助选择育种提供参考。     

热应激对摩拉和尼里-拉菲水牛血液生化指标的影响

【目的】 试验旨在探究热应激条件下摩拉和尼里-拉菲水牛的血液生化指标变化规律。【方法】 选取体况相近的健康摩拉和尼里-拉菲水牛各11头。试验期划分为热应激期和非应激期, 并于各试验期分别进行4次采血, 每次间隔1周。测定血清激素浓度、抗氧化指标和离子浓度等生化指标。【结果】 摩拉水牛热应激期血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及总胆固醇(CHOL)、丙二醛(MDA)、热休克蛋白70(HSP70)、钾离子(K⁺)、钠离子(Na⁺)、氯离子(Cl^-)含量均显著高于非应激期(P<0.05), 谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总抗氧化能力(T-AOC)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、皮质醇(CORT)、瘦素(LEP)、钙离子(Ca²⁺)含量均显著低于非应激期(P<0.05);尼里-拉菲水牛热应激期血清白蛋白(ALB)、CHOL水平及谷氨酰基转移酶(GGT)活性均显著高于非应激期(P<0.05), 球蛋白(GLOB)含量显著低于非应激期(P<0.05)。在热应激期, 摩拉水牛ALT活性及总蛋白(TP)、GLOB、CHOL、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)含量均显著高于尼里-拉菲水牛(P<0.05), ALB、四碘甲腺原氨酸(T₄)、K⁺含量均显著低于尼里-拉菲水牛(P<0.05);在非应激期, 摩拉水牛ALT活性、BUN、TG、葡萄糖(GLU)含量及T-AOC均显著高于尼里-拉菲水牛(P<0.05)。【结论】 热应激降低了摩拉和尼里-拉菲水牛的内分泌激素水平和抗氧化能力并影响了机体电解质平衡, 尼里-拉菲水牛的免疫功能也有一定下降; 在热应激条件下, 摩拉水牛表现出更强的清除自由基能力, 尼里-拉菲水牛表现出更好的代谢、体温调节能力以及电解质代偿能力。     

不同因素对广西地区摩拉、尼里/拉菲种公牛精液质量的影响分析

为了研究不同品种、不同年龄结构、不同温度对广西地区河流型水牛种公牛精液质量的影响,选取摩拉种公牛33头、尼里/拉菲种公牛44头,对其2013—2019年的原精及冷冻精液质量检测纪录进行分析。结果:(1)摩拉种公牛的射精量显著高于尼里/拉菲种公牛(P0.05),尼里/拉菲种公牛的原精活力显著高于摩拉种公牛(P0.05)。(2)同一品种不同年龄比较,3～5岁摩拉、尼里/拉菲种公牛的精子密度、精子抗冻性最高(P0.05),10～16岁尼里/拉菲种公牛的射精量最高(P0.05)。(3)摩拉、尼里/拉菲种公牛在平均气温15℃以下原精活力最低,平均气温24℃原精活力最高(P0.05)。(4)将种公牛冻精解冻后活力与原精活力、原精密度建立回归方程:摩拉种公牛为Y_1=0.269+0.08X_2+0.001X_3;尼里/拉菲种公牛为Y_3=0.305+0.02X_5+0.001X_6。将每头每次冻精剂数与射精量、原精活力、原精精密度建立回归方程:摩拉种公牛为Y_2=-144.601+14.266X_1+72.950X_2+17.357X_3;尼里/拉菲种公牛为Y_4=-102.824+17.844X_4+2.778X_5+15.848X_6。     

水牛的毛色遗传规律研究

[目的]家养水牛分沼泽型水牛和河流型水牛两大类型。沼泽型水牛是中国的主要牛种之一,其被毛主要为灰色和白色,而河流型水牛为黑色。本研究开展并统计了德宏水牛及其与河流型水牛杂交后代的被毛颜色以期探讨水牛的毛色遗传规律。[方法]统计了十几年来盈江县德宏水牛及其与河流型水牛(摩拉水牛和尼里—拉菲水牛)杂交后代的被毛颜色,经x2检验确定毛色的遗传规律。[结果]表明:沼泽型水牛白色与灰色交配的F1代全部为白色,F2代白色与灰色的比例为3∶1,白色对灰色完全显性;河流型水牛(黑色)与沼泽型纯合灰色交配,F1代全部为黑色,F2代黑色与灰色的比例为3∶1,黑色对灰色完全显性;河流型黑色与沼泽型白色交配,F1代表现型是两个亲本类型相对性状的综合,即棕褐色,F2代则出现了白色、棕褐色和黑色3种毛色,三者比例为1∶2∶1,白色对黑色为部分显性或不完全显性。[结论]因而推测沼泽型水牛白色与河流型黑色对灰色为完全显性,灰色为隐性纯合;沼泽型白色对河流型黑色为部分显性或不完全显性。     

三品种杂交水牛及其亲,子代染色体的研究

三品种杂交水牛是尼里/拉菲×么拉×本地水牛的后代。应用染色体常规分析和G、C带技术,系统地研究三品杂水牛及其亲代和子代的染色体,结果表明,么拉、尼里/拉菲、本地水牛和么杂一代的染色体数目,分别是2n=50、2n=50、2n=48和2n=49,与前人报道相符。发现三品杂水牛及其横交子一代的染色体组型不一致、前者有2n=50和49两种,后者有2n=50、49和48三种。     

尼里水牛与温州水牛杂交效果研究

利用巴基斯坦尼里水牛与温州水牛进行杂交试验 ,观察其生长性能。结果表明 ,尼温一代水牛的初生体重、体尺及成年牛的体重、体高、体斜长、胸围、管围等与温州水牛相比较差异极显著 (P <0 0 1) ,杂交后成年体重增加 10 0kg以上 (公牛增重 10 9 9kg ,母牛增重 10 3 4kg) ,增幅达 2 0 %以上 (公牛增幅 2 1 2 %,母牛增幅 2 0 8%) ,杂交优势明显     

摩拉水牛改良云南本地水牛的效果研究

为了提高云南本地水牛的产奶和产肉性能,云南省1974年、1997年和2002年先后从广西水牛研究所引进摩拉水牛对云南本地水牛进行杂交改良.以杂交一代、杂交二代及摩拉水牛、本地水牛为研究对象,从杂交后代体形外貌、生长发育情况、产奶情况几方面对杂交改良效果进行了总结,结果发现引进的种公牛对云南高原的气候条件适应性良好,精液品质优良.杂交一代水牛初生重、1月龄、3月龄、12月龄体尺、体重均显著高于本地水牛(P＜0.05),杂交一代水牛和本地水牛12月龄体尺、体重均极显著低于同龄摩拉水牛(P＜0.01),杂交一代母水牛产奶量极显著高于本地母水牛(P＜0.01),但显著低于杂交二代母水牛产奶量(P＜0.05).表明本地水牛可望利用摩拉水牛进行改良培育成乳用型水牛.     

摩拉水牛改良滇东南水牛的效果研究

[目的]探索摩拉水牛改良滇东南水牛的杂交效果。[方法]采用直肠把握输精法,用摩拉水牛冻精冷配滇东南水牛。[结果]表明,摩本杂F1代成年公牛的各项体尺体重指标与滇东南水牛的差别不大,而摩本杂F1代成年母牛的体重、体高、体斜长、十字部高、髋宽、胸围、管围等比滇东南水牛有不同程度的提高(P0.05或P0.01),而其他体尺二者间差别不大(P0.05)。至一岁前的摩本杂F1代生长速度较快,1岁公母牛的体重分别为274.08±36.40kg和278.25±55.05kg,较国内其他地方水牛品种的杂交一代高。摩本杂F1代成年公母牛的体重分别为474.54±63.00kg和459.39±68.12kg,摩本杂F1代母牛的体格得到明显的改善,体重增大。[结论]用摩拉水牛与滇东南水牛杂交,可以提高滇东南水牛摩本杂F1代的体格、早期生长速度、生长性能及泌乳性能。     

水牛性控精液微生物分析

研究针对目前分离水牛X和Y精子性别控制过程中,容易导致微生物快速繁殖进而污染性控精液的问题,对水牛新鲜及冷冻性控精液中的微生物进行分析研究,以期改进水牛分离精子保存方法。结果表明:新鲜采集的水牛精液、常规冷冻精液及分离后的冷冻精液中,平均菌落密度分别为10 619个/mL、293个/mL和18935个/mL,三者差异显著(P0.05)。新鲜精液检测到的菌落中,革兰氏阳性球菌占48%,阴性杆菌占41%,阳性杆菌占9%,霉菌占2%;性控冷冻精液中的菌落100%为革兰氏阴性杆菌。对性控冻精菌落药敏检测发现,菌落对妥布霉素和庆大霉素均呈现耐药性,而对丁胺卡那霉素以及药物环丙氟哌酸药物敏感性较强。本研究结果,为改进水牛分离精子稀释液以及冷冻保存液中的抗生素使用提供了有价值的参考。     

德昌水牛类群结构分析

为了全面了解和考察德昌水牛的品种现状,笔者对98头德昌水牛育成母牛的体重、体尺性状指标进行了聚类分析。结果表明,德昌水牛性状离散差异性大,且明显分为4种类群,群体中具有一定比例的优良群体,存在可选性。     

水牛卵母细胞在不同培养液中成熟与凋亡的比较研究

为了解卵母细胞体外成熟与凋亡过程,进而提高卵母细胞体外成熟率,本试验研究了在培养液中添加不同浓度的表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对水牛卵母细胞体外成熟和凋亡的影响。结果表明:(1)添加各种浓度的EGF(10,20,30,50,100 ng/mL)均可以提高水牛卵母细胞的成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,其中50 ng/mL EGF有显著影响(P<0.05);(2)添加各种浓度的IGF-1(10,30,50,100 ng/mL)均能提高水牛卵母细胞体外成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,以30 ng/mL效果明显(P<0.05);(3)添加20 ng/mL EGF+30ng/mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率和凋亡率分别高于和低于单独添加IGF-1和EGF组。     

杂交奶水牛犊牛培育关键技术

通过实施杂交奶水牛犊牛和后备牛早期培育,可有效缩短后备母牛饲养期,提早进行配种产犊,延长奶水牛使用年限,降低养殖成本,提高生产效益。本文介绍了犊牛早期断奶的优点、方法以及后备牛的培育目标和技术要点及关键技术措施等。     

Analysis of Codon Usage Bias of Leptin Receptor Gene in Buffalo

The experiment was aimed to study the synonymous codon usage features of leptin receptor (LEPR) gene in buffalos, the codon usage differences and evolutionary relationships between buffalo and other reference species. The coding region of LEPR gene from 27 river buffalo and 41 swamp buffalo were sequencing,and Bos taurus,Bos mutus,Bos bison,Ovis aries,Capra hircus,Mus musculus and Homo sapiens were chosen as reference species from NCBI database. The results showed that all synonymous codons were used in the LEPR gene of river buffalo and swamp buffalo. Two kinds of buffalo had 28 biased usage codons. Among them,strongly biased codon was AGA (RSCU≥2),which indicated that codon usage features were similar in LEPR gene of two types of buffalo. Furthermore,buffalo and the species compared in this study were bias toward the synonymous codons with A/U at the third codon position in LEPR gene.However,the types and numbers of bias usage codons were different between buffalo and the species compared. Clustering analysis showed that the relationship between river buffalo and swamp buffalo was the closest,and they gathered into one group firstly,then they gathered with Bos taurus,Bos mutus and Bos bison,and further gathered in turn with Ovis aries,Capra hircus,Mus musculus and Homo sapiens.The frequency differences of synonymous codon usage between buffalo LEPR gene and yeast genome were less than that between buffalo and E.coli,Mus musculus genome,suggesting that yeast might be more suitable as an external expression system for buffalo LEPR gene.     

水牛瘦素受体基因密码子使用偏好性分析

试验选取27头河流型水牛和41头沼泽型水牛,以从NCBI数据库中下载的家牛、野牦牛、野牛、绵羊、山羊、小鼠和人的序列作对照,对编码瘦素受体（leptin receptor,LEPR）基因的密码子偏好性及水牛与其他物种间密码子使用的差异和进化关系进行了深入分析。结果发现,所有的密码子在河流型水牛和沼泽型水牛LEPR基因中均有使用,两种类型水牛偏好使用的密码子有28个,其中使用偏好性较强的密码子为AGA（RSCU≥2）,表明河流型水牛和沼泽型水牛LEPR基因密码子使用特征相似。水牛及参考物种LEPR基因均偏好使用以A/U结尾的密码子,但水牛与其他参考物种间偏好使用密码子的种类和数目有差异。密码子使用偏好聚类分析表明,河流型水牛与沼泽型水牛亲缘关系最近,先聚为一类,然后与家牛、野牦牛和野牛聚为一类,再与绵羊、山羊、小鼠和人等物种聚为一类。在密码子使用频率上,河流型水牛LEPR基因与酵母密码子偏好性差异小于与大肠杆菌和小鼠密码子偏好性差异,从而揭示酵母更适合作为水牛LEPR基因的外源表达系统。     

应用ICSI技术生产转基因水牛胚胎的初步研究

本研究旨在探讨水牛精子完整质膜和破损质膜的方法对水牛单精子注射(ICSI)技术转基因效果的影响。水牛精子经冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜后与外源质粒DNA混合,采用ICSI的方法将基因转染后的精子注射到水牛体外成熟卵内,观察水牛ICSI卵激活后的发育状态和外源基因的表达效果。结果表明:精子质膜完整性实验中,冻融破损精子质膜组早期胚胎基因表达率为21.8%,显著高于活精子组的5.1%(P<0.01);冻融组与活精子组的卵裂率、囊胚发育率均无显著差异(P>0.05)。以冻融、Triton×-100、超声波3种方法破损精子质膜,冻融组的囊胚发育率(16.7%)最高,显著高于Triton×-100组(P<0.01)。同时,冻融组的早期胚胎基因表达率亦显著高于Triton×-100组和超声断尾组(60.3%vs.31.7%vs.18.2%,P<0.01)。上述结果说明,使用ICSI技术转外源基因可获得表达EGFP基因的水牛早期胚胎;冻融精子质膜破损法能有效破损精子质膜,有利于外源DNA与精子的结合,且提高转基因效率。     

我国中东部地区地方水牛品种的遗传多样性分析

采用中心产区典型群随机抽样方法,检测了峡江水牛、海子水牛、西林水牛、恩施山地水牛、江汉水牛及一个对照群体尼里—拉菲水牛位点的遗传多态性并作分析,来探讨群体的遗传分化关系。研究表明:(1)五个群体及一个对照群体在11个微卫星座位中共检测到174个等位基因,其中有28个等位基因为品种所特有。(2)根据主成份分析结果聚类,先是江汉水牛与恩施水牛聚为一类,然后是与峡江水牛聚为一类,接着与海子水牛聚为一类,再后与西林水牛聚为一类,最后与尼里—拉菲水牛聚类。群体间亲缘关系的远近与其所处地理位置远近表现出了紧密相关。