运用RAPD对我国川西高原及秦巴山区核桃的研究

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对原产于川西高原和秦巴山区的74个核桃样本进行基因组DNA多态性分析,从330条10bp的随机引物中筛选出清晰度高、重复性好的32个用于进一步分析,共得到324条DNA扩增带,平均每个引物产生10.1条带;其中279条带表现为多态性,占总带数的86.1%。试验研究表明川西高原核桃由于地理生态环境存在较大差异,具有丰富的遗传多样性,蕴藏着宝贵的控制优良性状的基因资源。遗传多样性同生态环境和人为活动的关系有待进一步深入研究。     

马尾松实生种子园F1代的RAPD分子鉴别

为了筛选出鉴定马尾松优良杂种F1代的RAPD特征标记,从DNA水平上区分杂交子代,以从23个马尾松实生种子园F1子代嫩叶中抽提的DNA作为试验材料,采用RAPD分子标记技术检验DNA序列的多态性。从99条引物中筛选出5条适合马尾松F1代RAPD扩增且具有多态性的引物S1026、S1110、S1040、S1180、S1172。利用这5条引物,采用RAPD分子标记技术,对23个F1子代进行了标记基因型的研究,得到了27个标记位点,确立了各样品的标记基因型,并在此基础上进行了马尾松子代的分子分类研究。     

漾濞核桃叶片基因组DNA的两种提取方法效果比较

以漾濞核桃不同生长期的叶片为材料，采用高盐低pH法和改良CTAB法作提取其基因组DNA的效果比较实验。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和RAPD扩增对所提取的DNA样品进行检测，比较所得DNA的产量、质量，认为从漾濞核桃不同发育时期叶片中获得DNA的提取效果不同。4种叶样以冬芽和新叶的效果为好，老叶最差；用两种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同，高盐低pH法提取的DNA纯度高，但是产量较低；而改良CTAB法则相反，产量高，纯度低。     

核桃总DNA提取方法研究

研究了适于核桃基因组DNA的提取方法,并对DNA初步进行了质量检测,结果表明此方法可有效去除次生物质对DNA的干扰,可用于随机引物RAPD扩增和随后的各种遗传学分析.     

油松DNA的提取及RAPD标记技术试验初报

本试验利用RAPD技术,对陕西陇县八渡林场油松种子园14个无性系进行遗传分析.试验确立了提取油松嫩梢DNA方法,提取的DNA可用于RAPD扩增;通过对RAPD反应体系的优化,建立了油松扩增的反应体系和反应程序;用筛选出的8个引物对14个油松无性系进行扩增.共扩增出23个条带,其中具有多态性的条带为14条,占总扩增条带数的60.8%,结果表明:检测到了14个油松无性系具有较丰富的DNA多态性.     

油茶优良无性系的RAPD分子鉴别

油茶优良无性系是当前生产上的主要良种.通过采用RAPD分子标记方法,从180多个引物中筛选出22个具有多态性的随机引物进行扩增,得到141个位点,其中有91个是多态位点,以此为基础建立油茶优良无性系的RAPD分子鉴别体系.同时还探索出油茶叶片总DNA的分离技术和建立了RAPD反应体系,为油茶分子技术育种积累了相关的知识并奠定了DNA技术基础.     

与毛白杨性别相关的RAPD标记

应用RAPD技术筛选与毛白杨性别相关的分子标记,对毛白杨雌雄株的基因组DNA进行混合分组分析（BSA）．结果表明：在88条随机引物中有12条引物能够在雌雄DNA反应池间形成多态性条带,应用这12条引物分别对毛白杨雌雄个体（雌雄个体各选取5个）进行RAPD分析,其中引物S60扩增得到1个约为1800bp的与雄性相关的RAPD标记．该标记的获得进一步表明毛白杨雌雄株间存在基因水平的差异,为毛白杨的性别研究提供了分子依据．     

相思基因组DNA提取及其RAPD初步分析

以马占相思、大叶相思、厚荚相思幼苗的叶片为材料,采用SDS法、改良SDS法和改良CTAB法进行了基因组DNA的提取并对DNA提取方法作了比较,结果表明改良CTAB法提取效果最好。同时利用改良CTAB法提取出的DNA为模板进行了RAPD分析,鉴别了不同树种之间的多态性。其中有11个引物共扩增出117条谱带,树种间多态性比率为54.7%,遗传多态性明显高于种内。     

八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Ｍg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系.研究结果表明,在25 μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1引物,20～ 80 ng模板.最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31 ～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存.在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度.     

核桃基因组DNA甲基化修饰位点的MSAP分析

以‘中宁强’核桃品种成熟叶片为材料,采用优化的MSAP反应体系,在全基因组水平对核DNA进行甲基化修饰位点分析,结果表明:选用20对引物组合,共扩增出1 060条清晰、重复性好的谱带,平均每对引物扩增出53条谱带,其中,甲基化位点241个,甲基化修饰比例为22.73%。对部分核桃DNA甲基化修饰位点进行回收测序,得到10条存在DNA甲基化修饰的DNA序列,BLASTn分析表明,核桃基因组中多种类型的DNA序列存在甲基化修饰现象。     

核桃早实基因的SCAR标记

根据与核桃早实性状连锁的RAPD标记OPB-08958序列,设计SEA-F/SEA-R和SEB-F/SEB-R2对SCAR引物。在亲本、杂交后代和栽培品种(系)中的检测结果表明:SEA-F/SEA-R引物对在早实亲本‘绿园’中能稳定扩增出SCAR-SEA958特异标记;在‘绿园’ב绿丰’杂交F1后代群体中,SCAR-SEA958标记与核桃早实性状共分离,与核桃早实性状间的遗传距离为1.99cM;用晚实优系‘T-12’和栽培品种‘元丰’及‘T-12’ב元丰’杂交F1后代,检测SCAR-SEA958标记的分离情况,SCAR-SEA958与核桃早实性状共分离;在9个核桃栽培品种(系)中,SCAR-SEA958在8个供试品种的7个早实品种上出现,在1个早实品种‘鲁光’和1个晚实优系‘T-12’上没有扩增出条带。SCAR-SEA958标记在不同遗传背景下有较高的稳定性。     

DNA fingerprinting of Populus trichocarpa clones using RAPD markers

Nine trees from a single, natural population of black cottonwood (Populus trichocarpa Torr. et Gray) in Alaska were screened for randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers with ten different 10-base random oligonucleotide primers in order to evaluate the use of RAPD analysis for distinguishing black cottonwood clones. Nine primers amplified the genomic DNA targets; two primers were able to differentiate all clones. Eight clones were distinguished among the nine tree samples assayed. Two trees showed identical banding patterns with all primers used; therefore it is suggested that these trees are from the same clone. The RAPD fingerprinting method is simple and powerful-one primer can distinguish different clones, while the use of multiple primers reduces fingerprint similarity and resolves discrepancies.     

漾濞核桃RAPD反应优化体系的建立

以漾濞核桃中的大姚三台核桃为实验材料,通过对影响RAPD扩增结果的主要因子Tag酶、Mg+2、引物、模板DNA、dNTPs等不同的浓度和组合的试验研究,确定了漾濞核桃的最适反应体系和扩增程序,即在25μL反应体系中,0.75 u.L-1Taq DNA聚合酶,3.0 mmol.L-1Mg+2,0.3 mmol.L-1引物,含1.6 mg.L-1模板,2.5 ul 10×Buffer,dNTPs各0.2 mmol.L-1。扩增程序为:94℃预变性300 s,94℃变性40 s,36℃退火60 s,72℃链延伸120 s,45次循环后,72℃延伸600 s。     

黄心夜合的遗传多样性研究

运用随机扩增多态DNA（RAPD）技术,对黄心夜合[Michelia martinii（Levl.）Levl.]自然分布区的6个自然种群遗传多样性进行了研究。从100个随机引物中筛选出能产生清晰、稳定的多态性标记引物18个,共检测出110个位点,其中多态性位点为96个,占87.27%;在物种水平上,有效等位基因数目（Ne）,Nei’s基因多样性系数（He）和Shannon表型多样性指数（I）分别为1.735 2,0.416 3和0.597 1;总的遗传变异量（Ht）为0.339 8,其中居群内遗传变异量（Hs）为0.258 7,各居群间的遗传分化系数（Gst）达到0.323 1.应用UPGMA法对遗传距离进行聚类分析并构建树系图,结果表明：黄心夜合自然种群具有较高的遗传多样性,其种群间的遗传差异与其地理分布有关。     

利用RAPD分析药用石斛的遗传多样性及亲缘关系

通过对9种药用石斛进行遗传多样性和亲缘关系的分析,为更好地开发利用石斛资源奠定基础。采用RAPD技术,应用NTSYS软件对9种石斛的RAPD-PCR结果进行分析。利用从103条随机引物中筛选出的70条随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到520条带,其中多态性带有491条,多态性百分率为94.42%。采用UPGMA类平均法对扩增出的谱带进行遗传聚类分析,得出反映各种间亲缘关系的树状图。在遗传距离（D）=0.44处,可将供试材料分为2类,RAPD对基因组的分析结果与传统分类学的结果差异不大。试验结果表明,RAPD技术可有效地应用于药用石斛的遗传多样性及亲缘关系的研究。     

百合鳞叶DNA提取及RAPD分析

以百合新鲜鳞叶为材料,利用RAPD分子标记对来自我国5省共16份百合样品进行了分析。结果表明:采用改良CTAB法提取百合鳞叶中DNA条带清晰较,且从120条随机引物中筛选出35条有效引物,共得到769个扩增位点,其中628个位点具有多态性,占81.7%。聚类分析表明,16个百合材料在阈值为0.940 7时分为2个RAPD群,即分别属于百合科的百合属和大百合属;阈值为0.579 0时,百合属分为3个种,即分别为百合、卷丹和细叶百合。这些均可为进一步研究百合的分子生物学特性打下基础,为鉴定中药材百合品种品系的新方法提供充分的实验依据。     

Differentiation of poplar and willow clones using RAPD fingerprints

The technique of random amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting was used to differentiate species and identify clones of 15 poplar and 15 willow clones (ramets of three poplar clones were also included to verify the stability of the results). Four random DNA primers (Deca-11, Chl-1, Chl-4 and Chl-10) and an M13 universal primer were used to determine DNA polymorphism among the clones. Based on the DNA banding pattern obtained with the four DNA primers by polymerase chain reaction (PCR) amplification we conclude that RAPD fingerprinting with properly selected primers can be used for clonal and species differentiation of poplar and willow. The technique is simple, accurate and inexpensive.