新疆雪莲胚性愈伤组织的诱导及原生质体分离

以新疆雪莲无菌叶片为材料,诱导其产生胚性愈伤组织,再以胚性愈伤组织为分离原生质体的起始材料,研究质壁分离时间、渗透压浓度、酶液组合、酶解时间等因素对其原生质体分离效果的影响。结果表明:对诱导胚性愈伤组织有较好效果的培养基组合为:MS+2,4-D 0.1mg/L+BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L+葡萄糖30 g/L;原生质体分离最佳体系为:含纤维素酶2.5%、离析酶0.2%、果胶酶1%、MES 0.1%和甘露醇10%的酶解液,在温度(26±1)℃,pH 5.8条件下酶解14~16 h,游离原生质体的产量和活性均较高。     

银耳菌丝原生质体分离和再生研究

以菌株Tr01为材料，研究了不同菌龄、溶壁酶浓度、酶解温度、稳渗剂对银耳工力丝在的原生质体产量及不同稳渗剂对原生质再生的影响。结果表明，原生质体分离的最佳条件为：菌丝菌龄9天，酶液浓度2％，稳渗剂0.4mol/L硫酸镁，在34℃下酶解4h，原生质体以0.4mol/L甘露醇作稳渗剂再生率较高，为1.13%。     

芹菜胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用芹菜胚性细胞悬浮系成功分离得到大量原生质体, 获得芹菜大量原生质体的最佳反应体系为: 酶液组成为3.0%纤维素酶Onozuka R210、1.0%离析酶R210、11%甘露醇、0.5% CaCl₂ ·2H₂O和0.1% MES; 摇床转速为80 r/min, 温度(25 ±2) ℃, 酶解时间5～6 h; 原生质体产量为25.00 ×10⁶ /g, 原生质体活力83.41%。原生质体浅层培养, 培养基为1 /2 MS + 1 mg/L 2, 4-D + 0.5 mg/L KT + 11%甘露醇+ 500 mg/L水解络蛋白, 两天后, 重新再生细胞壁之后进行第1次分裂, 逐步降低渗透压至甘露醇3% ,大约30 d形成小细胞团。小愈伤组织经增殖培养后在1 /2MS + 500 mg/L CH + 0.25 mg/L KT固体分化培养基诱导出不定芽, 30 d后再转入MS基本培养基, 获得完整的再生植株。     

微型结球白菜原生质体游离与纯化研究

以微型结球白菜无菌苗子叶为材料,探讨酶液浓度、酶解时间、酶液渗透压、离心转数对其原生质体分离效果的影响以及蔗糖浓度对纯化结果的影响。结果表明:以1.0%CellulaseR-10,0.08%Pectinase,0.4 mol/L甘露醇,酶解6 h,第1次离心转速1 200 r/min,24%蔗糖的条件组合最佳,原生质体产量为2.10×107个/g(FW),活力达91.20%。     

橙色大白菜原生质体的游离和纯化

以橙色大白菜金冠2号为试材,就其子叶及下胚轴原生质体游离、纯化方法及影响因素等进行了研究.结果表明:适宜金冠2号子叶原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+0.8%纤维素酶R-10+0.1%离析酶R-10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2·2H2O+0.7 mMKH2PO4+0.1% MES,酶解温度27℃,酶解时间2 h,产量达3.52×106个/g·FW,活力60.3%;适宜金冠2号下胚轴原生质体游离的条件为CPW+DPD培养基+1.5%纤雏素酶R-10+0.3%离析酶R.10+0.5 mol/L甘露醇+10 mM CaCl2·2 H2O+0.7 mM KH2PO4+0.1% MES,酶解时间18 h,产量达2.20×106个/(g·FW),活力63.7%.而且以21%蔗糖,800 rpm等密度梯度法离心5min纯化原生质体效果最佳.     

桑黄原生质体的制备与再生研究

为了了解不同桑黄分离的原生质体活力、产量和再生能力是否相同,采用酶解法处理桑黄菌株菌丝体获得原生质体。比较分析五种生长在不同树种上的桑黄菌丝的原生质体活力和产量、葡萄糖和p H对原生质体再生的影响,并对暴马丁香桑黄原生质体释放与再生过程进行显微摄影观察。结果显示:暴马丁香桑黄的活力与产量最高分别为81.82%和3.85×105个/m L。在p H 7、葡萄糖浓度为30 mg/m L时,暴马丁香桑黄原生质体再生率达最高,分别为23.67%和19.33%。初步摸索通过酶解法制备桑黄原生质体和原生质体释放与再生的过程。     

红姜花胚性细胞悬浮体系的建立和原生质体培养

以红姜花(Hedychium coccineum)未成熟花丝和花药为试材,研究了红姜花胚性愈伤组织的诱导、细胞悬浮体系的建立以及原生质体的培养。结果表明:在MS+4mg/L 2,4-D+4mg/L NAA+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂上经过120d培养诱导出了愈伤组织,愈伤组织在增殖培养基上经过继代筛选获得浅黄色、松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织通过3个月的悬浮培养,得到均质稳定的胚性细胞悬浮系。以胚性悬浮细胞(ECS)为起始材料分离原生质体,酶解试验表明,在原生质体分离过程中,用于原生质体分离的酶液需要保持一定的渗透压以保护原生质体不被破坏。当甘露醇的浓度为0.14mol/L时,原生质体产量最高,达到2.25×105个/mL PCV ECS(packed cell volume,PCV)。在看护培养系统中,原生质体经过7d的培养,细胞第一次分裂,经过14d培养,细胞分裂频率达到12.3%,28d时,细胞团形成频率达到4.2%。所形成的细胞团具有典型的胚性细胞特征。     

"索蚌"百合原生质体分离及培养的研究

用纤维素酶、离析酶、果胶酶、山梨醇的混合酶液提取"索蚌"百合的幼叶和愈伤组织的原生质体.对影响原生质体提取得率因素进行分析,用液体浅层培养法在MS、改良MS和NLN培养基附加不同浓度6-BA,2,4-D等进行培养.结果表明:纤维素酶和酶解时间对原生质体提取得率有极显著影响,最适合百合幼叶原生质体提取的酶液组合为:2?llulase R-10,0.5% Macerozyme R-10,酶解4 h.百合愈伤组织的原生质体提取的酶液混合液组合为:2% Cellulase R-10 0.5% MacerozymeR-10 0.05%Pectolyase Y23 147 mg/L CaCl2·2H2O 976 mg/L MES 0.6 M Sorbitol.进行原生质体的培养仅愈伤组织为来源的观察到细胞的分裂,幼叶为来源的原生质体几乎没有分裂,但两者最终都没有形成愈伤组织.     

新疆阿魏菇高效原生质体分离与再生体系的建立

以新疆阿魏菇为材料,研究了阿魏菇原生质体分离、再生体系建立的影响因素,建立了稳定的新疆阿魏菇原生质体分离、再生体系,并通过出菇验证了该体系的可利用性。结果显示,在35℃、0.6mol/LKCl稳渗剂条件下,菌龄为8d阿魏菇菌丝体(0.1g)在0.8mL酶解液中(1.5%离析酶+0.5%纤维素酶+2%溶菌酶)制备原生质体,酶解3h获得原生质体达5×106个/mL;在0.8mol/L蔗糖稳渗剂下,原生质体再生时间为16d,其再生率可达0.6%。出菇试验表明,获得的原生质体具有较强的恢复能力,能够与对照组在同样条件下正常出菇。从细胞水平上探索一条食用菌育种新途径,为发展和完善食用菌新菌株选育提供理论依据和技术借鉴。     

金顶侧耳原生质体制备与再生条件的研究

采用单因素以及正交试验法探究金顶侧耳原生质体的制备及再生条件,结果显示:加富PDA液体培养基培养5天的菌丝,在以蔗糖为渗透压稳定剂配制2%浓度的溶壁酶条件下,30℃酶解2.5 h,原生质体得率为2.36×107个/m L;选择蔗糖再生培养基,再生率可达0.71%。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

血耳原生质体制备及其再生条件研究

采用L16(45)正交设计方法探讨了酶解体系、酶解温度、酶解时间、菌龄、渗稳剂对血耳原生质体制备及其再生的影响。结果表明:静置培养5 d菌丝体以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,采用1%溶壁酶+1%蜗牛酶,32℃酶解3 h,制备率为2.950×107个/mL,其再生率可达4.508×10~(-3)。     

香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化

以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度酶解时间菌龄稳渗剂浓度。(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当p H 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h。各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度酶解时间菌龄酶解温度。     

硫磺菌原生质体的制备

试验分析了酶浓度、菌龄、渗透压稳定剂以及酶解温度和时间等因素对硫磺菌原生质体产出量的影响。结果表明：采用液体发酵培养第5天的菌丝体，以0．6mol／L KCl作渗透压稳定剂，加入1．5g/L混合酶（即纤维素酶与蜗牛酶按1：1混合）在30℃下酶解3．5h，制备原生质体效果最佳，原生质体产出量可达8．9×10^7个／mL。     

黄瓜幼苗子叶原生质体的分离纯化及融合条件优化研究

以黄瓜幼苗子叶为试材,采用正交实验,探讨了不同酶浓度、渗透剂浓度、酶解时间对原生质体产量和活性的影响,并研究了不同蔗糖浓度对原生质体纯化和不同PEG浓度对原生质体融合率的影响.结果表明:黄瓜幼苗子叶在含1.0％纤维素酶、0.8％果胶酶和0.3 mol/L甘露醇的混合酶液中酶解3h,获得具有活力的原生质体最高,为7.2×106个/g,原生质体活力为83.72％.蔗糖浓度为20％时纯化效果最好,得到有活力原生质体7.1×106个/g; PEG浓度为40％时融合率最高,融合率为32％.     

平菇P16原生质体制备条件研究

以平菇P16菌丝体为底物,利用溶壁酶进行原生质体制备,考察菌丝培养条件及酶解因素对原生质体制备的影响,从而确定原生质体制备最佳条件。结果表明:原生质体制备的条件为菌丝培养采用MYP液体培养基培养3 d后更换新鲜的培养基继续培养2 d、国产1.5%溶壁酶30℃酶解4 h,在此条件下原生质体浓度达到10~8个/mL。     

灵芝菌丝原生质体形成与再生的研究

本文探讨了灵芝 (Ganodermalucidum)菌丝原生质体的制备及再生的条件。实验结果表明 :采用MYG为灵芝菌丝培养基 ,2 %真菌溶壁酶 (Lywallzyme)作脱壁酶 ,0 6mol/L甘露醇作渗透压稳定剂 ;对培养 6d的灵芝菌丝在 30℃下进行酶解 ,酶解时间 4- 6h ,可产生约 3 0× 1 0 6个 /mL (0 1g菌丝 )原生质体 ,并在添加灵芝子实体浸出汁的双层培养基上实现了灵芝菌丝原生质体的再生。     

草莓悬浮细胞原生质体培养再生愈伤组织

以草毒品种宝交早生的花药愈伤组织建立的悬浮细胞系为试材,对原生质体分离和再生进行研究。结果表明:酶液的渗透压、浓度和配比对悬浮细胞原生质体产量和活力有重要的影响。悬浮细胞在CPW+1.0％ Cellulase R-10+0.5 Macerozyme R-10+0.05％Pectolyase Y-23+0.6mol/L甘露醇+0.5％PVP的酶液中酶解12h,原生质体产量和活力最高,分别达16.35×10~6/g和84.6％。采用液体浅层培养法对原生质体进行培养获得了再生愈伤组织。     

猪苓原生质体制备与再生条件的研究

采用L16(4)正交设计,得出猪苓原生质体制备最佳条件是取菌龄7d的菌丝体,以2%溶壁酶,0.6mol·L-1甘露醇作为渗透压稳定荆,在33℃下酶解3h,原生质体数达到2.62×107个·mL-1.原生质体再生的最佳条件是取菌龄5d的菌丝体.以2%溶壁酶,0.6mol·L-1蔗糖作为渗透压稳定剂,在27℃的条件下,酶解3h.猪苓原生质体再生的最佳培养基为葡萄糖10g、麦芽糖5g、酵母粉4g、0.6mol·L-1甘露醇、琼脂5.5g,定容到1 000mL.再生率可达到0.65%.     

‘过山香’香蕉原生质体培养及植株再生

 以'过山香'香蕉的胚性悬浮细胞（Embryogenic cell suspensions,ECS）为起始材料分离原生质体,酶解液的组成为：3.5%纤维素酶R-10、1%离析酶R-10、0.15%果胶酶Y-23、204 mmol/L KCl、67 mmol/L CaCl2和0.41 mol/L甘露醇,原生质体产量为3.1×107个/mL PCV ECS （PCV：packed cell volume,细胞密实体积）。分别以培养基‘A’和‘B’为培养成分在液体浅层培养和看护培养两种培养系统中进行原生质体培养。结果表明：在液体浅层培养系统中,采用培养基‘B’比采用培养基‘A’效果好,原生质体的细胞分裂频率和细胞团形成频率分别约是采用培养基‘A'的3倍和10倍;所获得的培养物为只能增殖而不能进一步分化的非胚性细胞团。在看护培养系统中,采用培养基‘A’与采用培养基‘B’时,细胞分裂频率和细胞团形成频率没有显著地差异;所获得的细胞团具有典型的胚性细胞特征。将从看护培养中获得的细胞团转移到体胚诱导培养基上,培养45 d后,从105个原生质体获得1550个体胚。继续在体胚诱导培养基上培养30 d,7.8%的体胚能萌发。萌发的体胚在MS+0.1%活性炭的培养基中发育成健壮植株,移栽后成活良好。