猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的临床应用研究

采用猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒对5省/市的猪血清样本进行检测,并与进口ELISA试剂盒相比较,同时采用世界动物卫生组织(OIE)指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果有差异的血清样本进行验证,结果显示,两种试剂盒对田间临床样本的符合率为78.1%;猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率高于进口ELISA试剂盒;综合免疫背景分析,猪瘟病毒间接ELISA抗体试剂盒的敏感性和特异性均高于进口试剂盒,更适合在我国进行大规模推广应用。     

猪瘟病毒5种ELISA抗体检测试剂盒的比较

[目的]比较猪瘟病毒（CSFV）5种ELISA抗体检测试剂盒的使用效果。[方法]利用细胞中和试验制备的标准质控血清,制备不同猪瘟抗体效价的阳性血清70份和阴性血清20份,对5种试剂盒的敏感性、特异性和符合率进行比较。利用该5种试剂盒对不同年龄段猪群血清中猪瘟抗体水平进行检测。[结果] 5种试剂盒的敏感性为85.7%-100%,特异性均达到100%,符合率为88.9%-100%。不同年龄段猪血清样品中,5种试剂盒检测结果不尽相同。[结论]猪瘟抗体效价的高低对5种试剂盒检测结果的一致性有一定影响,尤其是针对弱阳性样品时,IDEXX猪瘟抗体试剂盒和荷兰赛迪公司的猪瘟抗体试剂盒检测效果相对较好,为猪瘟免疫检测工作提供了一定依据。     

采用不同ELISA试剂盒对猪瘟抗体水平调查结果的影响

本文采用猪瘟抗体间接ELISA和阻断ELISA检测试剂盒对320份血清样本进行猪瘟抗体检测,符合率达80.63%,对检测结果不一致的样品,利用抗体中和试验(FVNT)做定性检测,结果表明,间接ELISA试剂盒的敏感性和特异性均高于阻断ELISA试剂盒,猪瘟间接ELISA试剂盒更适用于我国猪瘟抗体检测。     

猪病酶联免疫诊断试剂盒简介

1 猪瘟病毒抗体酶联免疫诊断(ELlSA)检测试剂盒 猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒是用来检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测试剂盒.     

基于非洲猪瘟病毒特异性单克隆抗体建立的阻断ELISA方法

为了建立一种能够检测非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性抗体的单抗阻断ELISA方法，本试验首先构建了非洲猪瘟病毒p30蛋白的原核表达载体，进而制备并筛选出1株能特异性识别p30蛋白的高亲和力单克隆抗体，采用昆虫杆状病毒表达系统Bac-to-Bac进行该单克隆抗体的表达。以p30重组蛋白作为包被抗原，辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆抗体作为阻断抗体建立了一种非洲猪瘟病毒特异性抗体的检测方法，并验证其敏感性、特异性以及与商品化试剂盒的符合率。结果显示，该方法敏感性为100%,特异性为100%,与商品化试剂盒比较，符合率为98.7%。结果表明，本试验基于非洲猪瘟病毒特异性单克隆抗体建立的阻断ELISA方法敏感性好、特异性强，结果准确可靠，可用于非洲猪瘟病毒抗体检测。     

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区高效表达及间接ELISA抗体检测方法的建立和应用

利用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区,建立猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法。依据大肠杆菌密码子偏好性对猪瘟病毒E2基因主要抗原区的稀有密码子进行同义替换,克隆至pET-30a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)构建重组表达菌,并将纯化重组蛋白作为抗原建立猪瘟病毒间接ELISA抗体检测的方法。对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot检测,结果显示获得分子量为30 ku的重组蛋白,占细菌总蛋白的41%,与猪瘟抗体特异性反应强;间接ELISA重复性检测显示批内变异系数为3.72%,批间变异系数为4.75%;特异性检测显示,与猪圆环病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒和口蹄疫病毒的抗体阳性血清无交叉反应,并且对566份样品的临床检测结果显示与爱德仕猪瘟阻断ELISA试剂盒的阳性符合率为90.80%,阴性符合率为93.29%,总符合率为91.52%。结果表明密码子优化后E2重组蛋白实现高效表达,建立的猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法成本低、准确率高,可进一步开发应用。     

猪场疫病抗体检测

1 材料和方法 1.1 血清 采集某猪场保育猪、育肥猪、母猪、种公猪血样96份,并分离血清,-20℃保存待检. 1.2试剂 口蹄疫O型竞争ELISA抗体检测试剂盒;猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒、猪蓝耳病毒抗体ELISA检测试剂盒、伪狂犬病毒gB抗体ELISA检测试剂盒、伪狂犬病毒gE抗体ELISA检测试剂盒.     

两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验

为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证。结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100%检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性。由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显高于IDEXX公司的试剂盒。     

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用

对猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性及保存条件等进行了摸索,确定该试剂盒具有良好的稳定性,并可在2℃～8℃环境中的保存9个月。同时,测定了本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62%;并将该试剂盒应用于免疫动物抗体的动态监测。     

猪瘟抗体检测试纸条与ELISA试剂盒的检测结果比对试验

四川成都某生物技术有限公司研发了一款检测猪瘟抗体的免疫胶体金试纸条,为检验此产品,选取美国产、武汉产ELISA试剂盒与其做对比试验,比较猪瘟抗体检测的特异性、敏感性和符合率。结果表明:成都产试纸条同批次产品性能稳定,总符合率与美国产、武汉产ELISA试剂盒间差异不显著。     

不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响

为研究不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响,通过原核表达获取猪瘟病毒重组E2蛋白、E0蛋白、C蛋白和NS5B蛋白,大小分别约为35 kD、42 kD、16 kD和80 kD。经Ni-NTA亲和层析柱纯化并利用BandScan软件进行计算,纯度均在90%以上,满足ELISA检测包被用原料纯度的要求。将上述4种蛋白作为包被抗原进行ELISA,以10份企业阳性质控品血清和10份企业阴性质控品血清为检验指标比较不同抗原对猪瘟病毒抗体ELISA检测效果的影响。结果以E2蛋白为原料的包被板检测质控血清时,灵敏度和特异性均达到80%以上,能够满足猪瘟病毒抗体ELISA检测的要求,故选择E2蛋白作为包被抗原并进行相关检测试剂的研制。用研制的试剂与国际知名度高、产品质量好的美国IDEXX同类试剂对432份临床猪血清进行符合性检测,结果与美国IDEXX试剂的阳性符合率为95.53%,阴性符合率为86.56%,总符合率为91.67%,两种试剂检测结果具有较高的一致性。试验表明,用E2蛋白为包被抗原对猪瘟病毒抗体进行ELISA检测的效果最好,制备的检测试剂可用于临床猪瘟病毒血清抗体的检测,为今后猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂的进一步研制奠定了基础。     

猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法。猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000。用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率>40%为猪瘟野毒抗体阳性,阻断率≤40%为猪瘟野毒抗体阴性。用建立的ELISA方法检测84份血清,其中78份为免疫猪瘟疫苗的血清,6份为猪瘟病毒感染血清。结果显示,78份免疫血清均检测为猪瘟野毒抗体阴性,6份猪瘟感染血清均检测为猪瘟野毒抗体阳性。因此可初步判定该方法可用于鉴别诊断猪瘟病毒自然感染动物和C株疫苗免疫动物的血清抗体,并为临床检测猪瘟野毒抗体提供便捷、快速,精准的检测工具,对猪瘟的临床诊断、预防以及猪瘟净化工作具有非常重要的参考意义。     

猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。     

Development and Optimization of Indirect ELISA Detection Method of Classical Swine Fever Virus Antibody

In this study,through a series of screening and optimization of reactions condition,an indirect ELISA method was developed for detections the antibodies against classical swine fever virus (CSFV) with the purified recombinant CSFV E2 protein.The results showed that the optimal concentration for coating antigen was 1.0 μg/mL and incubated at 37 ℃ for 1 h.The proper serum sample was diluted by 1:200 and the sealing time was 37 ℃ for 1 h.Enzyme labeled second antibody was diluted by 1:10 000 and the reaction time was 45 min incubating at 37 ℃.The D450 nm<0.30 of sample defined as negative of CSFV antibody in the serum sample.The intra-batch and inter-batch variation coefficients were 4.8% and 6.9%,respectively.It indicated that the method in this study had a high stability.Specific test showed that the indirect ELISA had no crossing reactions with the antibodies against PRV,PRRSV,PCV and PPV.80 serum samples were detected in this study,the positive coincidence rate of indirect ELISA was 83.58%,the negative coincidence rate was 76.92%,and the total coincidence rate was 80.25% compared to the results of import blocking ELISA kit.The results suggested that the established indirect ELISA method in this study had an excellent clinical application.     

非洲猪瘟病毒p72蛋白阻断ELISA检测方法的建立

本研究旨在建立一种非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白阻断ELISA抗体检测方法。以纯化的重组p72蛋白作为包被抗原,HRP标记的6E5抗体作为阻断抗体,通过对反应条件进行优化,建立了基于ASFV p72蛋白的阻断ELISA方法。用建立的阻断ELISA方法检测119份临床阴性血清,计算血清阻断率确定临界值,确定了该方法的判定标准：当阻断率PI≥50%时判定为ASFV抗体阳性;PI≤40%时判定为ASFV抗体阴性;当阻断率介于两者之间时,判定为可疑。该方法与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、A型塞内卡病毒、猪口蹄疫病毒、猪大肠杆菌、猪多杀性巴氏杆菌、副猪格拉瑟菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的抗体阳性血清无交叉反应,批间、批内试验的变异系数均小于15%。用该方法与商品化ASFV抗体检测试剂盒同时检测447份猪临床血清样品,两种方法的相对敏感性和相对特异性分别为95.3%和94.5%,符合率为94.9%。本研究建立的阻断ELISA方法具有较高的敏感性和良好的特异性,可用于ASFV感染诊断和流行病学调查。     

比较3种间接ELISA试验检测口蹄疫感染抗体的研究

将3种检测口蹄疫非结构蛋白抗体的间接ELISA试验进行了比较。这3种间接ELISA试验检测田间血清样品的最低符合率为96％，最高符合率达98％：有2种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第10天后血清中的口蹄疫感染抗体．有1种间接ELISA试验可以检测到感染口蹄疫第14天后血清中的口蹄疫感染抗体；这3种间接ELISA试验检测12份已知口蹄疫阳性血清的试验结果吻合。研究表明．这3种间接ELISA试验方法对于检测口蹄疫感染抗体具有较好的特异性．其中猪口蹄疫3A蛋白间接ELISA诊断试剂盒在灵敏性、特异性和符合率方面更优于另外2种试剂盒。     

某规模化猪场母猪猪瘟抗体和病原检测与分析

为了探讨母猪的猪瘟疫苗免疫情况和猪瘟病毒之间的关系,本研究采用阻断ELISA技术和RT-PCR技术,对某规模化猪场随机采取57头母猪的血清样品和扁桃体样品进行了猪瘟抗体水平和猪瘟病毒检测。结果表明：猪瘟抗体阳性率为74.07%,抗体离散度为41.79%,表明猪瘟抗体阳性率刚达到国家规定的标准,抗体离散度偏高。猪瘟抗体和猪瘟病毒之间存在一定关系,无论猪瘟疫苗免疫是否合格,均有可能感染猪瘟野毒,猪瘟抗体阴性组,以及抗体阻断率大于90%组中的猪瘟病毒阳性率较高。     

国内5种猪圆环病毒PCV2抗体检测试剂盒的比较试验

为了解国内PCV2灭活疫苗效力检验用PCV2抗体检测试剂盒的质量,参照农业部第683号公告有关规定,对国内5个厂家生产的5种PCV2抗体检测试剂盒进行了敏感性、特异性和符合率测定,并比较了试剂盒间的符合率。结果表明：5个PCV2抗体检测试剂盒特异性检测结果均在90%左右,但敏感性差异较大（57.7%～100%）,且各试剂盒间检测结果的符合率较差（仅为63.2%）。总体来看,国产PCV2抗体检测试剂盒质量参差不齐,仅2个试剂盒适合用于PCV2抗体检测。     

某规模猪场保育育肥猪猪瘟抗体检测与分析

采用阻断ELISA检测法,对猪瘟免疫程序为4、6周龄的猪只分别在4、6、8、16和30周龄采血检测猪瘟抗体,查看猪瘟免疫效果。结果表明,猪瘟抗体阳性率从4周龄的92.9%下降到6周龄的65.8%,继续下降到8周龄的50%,直到16周龄才升高到90%并持续到30周龄。     

猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型（PCV1）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20 ℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。