转Pofst3糙皮侧耳菌株农艺性状和胞外酶活性分析

通过袋栽实验比较野生型、Pofst3过表达型和Pofst3反义沉默型糙皮侧耳（Pleurotus ostreatus）菌株（分别记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）的菌丝生长速度、原基数量、子实体数量、菌柄直径、菌盖直径等农艺性状;测定其漆酶、木聚糖酶、纤维素酶活性。结果表明：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ菌丝生长速度差异不显著；与Ⅰ相比，Ⅲ的原基和子实体数量多，菌柄直径大，菌盖直径小，原基和子实体中Pofst3的相对表达量低；与Ⅰ、Ⅱ相比，Ⅲ的漆酶、木聚糖酶及纤维素酶活性较高；Pofst3对糙皮侧耳发育的影响可能与其胞外酶活性相关。     

糙皮侧耳凝集素基因Plectin的克隆和表达分析

基于cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆了两个糙皮侧耳凝集素基因Plectin1和Plectin2。结构分析显示Plectin1和Plectin2基因全长分别为1 371和1 359 bp,二者均含有5个外显子和4个内含子;Plectin1开放阅读框长1 134 bp,编码377个氨基酸,Plectin2开放阅读框长1 122 bp,编码373个氨基酸。Southern杂交试验证实Plectin1和Plectin2在糙皮侧耳基因组中均只有1个拷贝。利用qRT-PCR分析了Plectin1和Plectin2在糙皮侧耳不同生长阶段的表达量,结果显示Plectin1和Plectin2分别在成熟子实体阶段和幼嫩子实体阶段表达量最高,这表明Plectin1和Plectin2基因可能在糙皮侧耳子实体生长发育中起到一定的调控作用。     

糙皮侧耳蓝光受体基因Pcry的克隆及分析

采用快速获得基因末端法(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)克隆出糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)蓝光受体基因Pcry的全长cDNA序列。该cDNA全长1725 bp,含有一个1572 bp的开放阅读框,共编码523个氨基酸。表达模式分析显示该基因在子实体期表达量最高,菌丝期最低。该基因在蓝光照射后的菌丝中表达量最强,在黑暗培养的菌丝中表达量最弱。蓝光刺激可以增加该基因转录量。生物信息学分析发现其编码的蛋白是一种光信号蛋白,目的蛋白分子量为57.44 kDa,等电点为4.90,且该蛋白具有信号转导、调控其它基因转录的功能。     

金针菇转核育种研究

从金针12（黄色）次级菌丝提取细胞核，分别与白色金针菇白雪和白色糙皮侧耳原生质体在高钙、高PH条件下融合。对再生菌丝的研究结果表明，无锁状联合的单核菌丝不形成子实体，但双核化后形成的具有锁状联合的双核菌丝则具有形成子实体的能力。试验结果显示，金针12与白雪组合后代均为黄色金针菇；而金针12与白色糙皮侧耳组合后代中，大多数菌株形成的子实体形态与白色糙皮侧耳类似，仅1%-2%菌株形成的子实体形态与白色金针菇类似。     

温度对糙皮侧耳贮藏品质的影响

通过对糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)子实体在0、2.5和5℃恒温贮藏和0℃温度波动贮藏对比试验,通过对失重率、呼吸强度、色泽(L~*值和b~*值)、细胞膜相对电导率、可溶性固形物的测定及感官评定研究了温度对糙皮侧耳子实体品质的影响。结果表明,贮藏温度和温度波动会对糙皮侧耳子实体品质造成明显的影响,5℃恒温贮藏的糙皮侧耳品质最差,0℃是最适宜糙皮侧耳子实体贮藏的温度,但贮藏过程中的温度波动显著影响糙皮侧耳子实体品质,会使子实体的失重率、呼吸强度、b~*值和细胞膜相对电导率升高,可溶性固形物含量和感官评定值下降。     

金针菇寡肽转运蛋白编码基因fvopt1与fvopt2的鉴定与表达分析

基于金针菇(Flammulina velutipes)的基因组和转录组数据,通过本地BLAST方法,获得2个寡肽转运蛋白编码基因,命名为fvopt1和fvopt2,并对其结构、编码蛋白的基本性质、系统进化与表达模式进行分析。结果表明:fvopt1和fvopt2分别含有13和18个外显子,编码蛋白FVOPT1与FVOPT2各含774和772个氨基酸,相对分子质量为86120.25与86192.24,等电点为7.46与7.92,且均无信号肽。保守结构域分析与系统进化分析结果表明,FVOPT1与FVOPT2为寡肽转运蛋白家族成员。实时荧光定量PCR结果表明:在菌丝阶段,fvopt1在无氮培养基中的表达量高于其在含氮培养基中的表达量;在含氮培养基中,fvopt1在整个子实体发育阶段(原基、菌柄和菌盖)中表达量上调,fvopt2只在原基中高表达,推测fvopt1和fvopt2可能与子实体和原基的发育有关。     

糙皮侧耳在玉米秸秆中的生长发育规律

利用玉米秸秆生产糙皮侧耳,菌丝生长规律符合逻辑斯第曲线,子实体生长规律符合指数增长曲线,菌丝生长速度优于棉籽壳培养料,子实体生长的高峰期比棉籽壳培养料滞后,出菇期比棉籽壳培养料长。将玉米秸秆和棉籽壳按1:1混合袋栽糙皮侧耳,生物学效率达145％。     

外源性cAMP对糙皮侧耳原基形成的影响

以糙皮侧耳新831为材料,分别在含有不同浓度cAMP的SA培养基上培养菌丝,观察菌丝的生长发育情况。结果:与对照组相比,低浓度cAMP(0.5~3 mmol/L)对平菇菌丝生长有促进作用,随着添加浓度的升高,菌丝生长受到抑制;当添加浓度为cAMP 1 mmol/L时,菌丝蛋白含量最低且糙皮侧耳原基形成所需时间明显少于对照组;试验表明外源性cAMP对糙皮侧耳原基形成存在一定的影响。研究结果为进一步解析原基形成过程中cAMP的作用机制奠定了一定的基础。     

糙皮侧耳pal2调控低温光照环境刺激下菌丝生长的分子机制

以糙皮侧耳野生型菌株和pal2基因干扰菌株为材料，通过对比菌丝在28℃始终黑暗培养和28℃黑暗培养3 d后进行15℃12 h光照/12 h黑暗培养6 d的环境刺激这两种条件下苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL）基因pal2转录水平、酶活性、底物L–苯丙氨酸和产物反式肉桂酸含量的变化，以及分析外源添加不同浓度底物和产物对菌丝表型的影响，初步解释了环境刺激下菌丝生长速度减慢的原因，发现苯丙氨酸解氨酶及其编码基因pal2均能响应环境刺激，但酶活性、产物和底物含量与基因表达量相比存在明显地响应滞后性；阐明环境刺激通过诱导pal2转录水平下调，总酶活性升高，使菌丝胞内L–苯丙氨酸减少，反式肉桂酸含量增加，从而负调控糙皮侧耳菌丝生长的分子通路。     

糙皮侧耳中鸟苷-5′-二磷酸-3′-二磷酸的含量变化及其对菌丝生长的影响

采用HPLC法测定糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌丝和子实体中鸟苷-5′-二磷酸-3′-二磷酸(ppGpp)的含量以及不同浓度对菌丝生长的影响。结果表明:从菌丝生长的满袋期至子实体发育的原基期、珊瑚期,菌丝中ppGpp含量显著增加。与珊瑚期相比,成型期、幼菇期和成熟期菌丝中的ppGpp含量显著降低。成熟子实体中未测出ppGpp。在PDA培养基中,低浓度的ppGpp(0.82~3.28μmol/L)对菌丝生长有促进作用,高浓度的ppGpp(6.56μmol/L)对菌丝生长无影响。     

平菇菌蕾的移植

人工栽培的平菇,有时原基发生较密、较多,但只有一部分能发育成子实体。1984年2月,我们将疏下来的菇蕾移植到长满菌丝尚未出现原基的培养料上,看其是否能发育成子实体。试验结果是成功的,简报如下。供试菌株为糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus),用纯棉籽壳常规制成原种及栽培种,2月15日播种,于室外人字形塑料棚内压块栽培。     

四种杀菌剂对糙皮侧耳菌丝生长和子实体产量的影响及控制霉菌污染的效果

研究了多菌灵、氢氧化铜、代森锰锌和百菌清4种杀菌剂对糙皮侧耳菌丝生长和子实体产量的影响及控制霉菌污染的效果。结果表明，不同种类杀菌剂及同一种杀菌剂不同使用浓度对糙皮侧耳菌丝生长、产量及霉菌污染程度的影响存在显著差异。其中以0.667g/L～0.883g/L的氢氧化铜对糙皮侧耳菌丝生长的抑制作用最小，抑制率小于6%，与对照无显著差异，并能完全控制霉菌的污染，使生料块栽糙皮侧耳的产量提高30%～40%，氢氧化铜有望在糙皮侧耳生料栽培中推广使用。     

灵芝与糙皮侧耳原生质体融合子生物学特性的初步研究

以获得弱木栓质化灵芝菌株为目的，利用液体培养4d的灵芝菌丝体和液体培养3d的糙皮侧耳菌丝体为材料，在PEG-Ca^2 系统中诱导原生质体融合，获得初筛融合子19株(F1～F19)。其中，融合子F8的菌丝生长速度和生物量均接近糙皮侧耳，显微镜下，其菌丝体与灵芝和糙皮侧耳的均不相同，木栓质化程度大于糙皮侧耳，小于灵芝。     

双环林地蘑菇的生物学特性和栽培特性

双环林地蘑菇菌丝无锁状联合。菌丝生长温度10-40℃，最适20-25℃；PH4.5-13，最适6-8.5；培养料含水量45%-75%菌丝均可生长，最适68%-73%；最适C源是淀粉、蔗糖、纤维素；最适氮源是酵母粉、干酪素、硫酸铵、硝酸铵；麦芽、松针、干糙皮侧耳子实体、小麦、牛粪的热水提取液可促进菌丝生长。双环林地蘑菇子实体形成温度20-35℃，最适24-30℃，子实体形成期最适宜的空气相对湿度70%-85%。     

不同光质照射下真姬菇的生长发育与光受体的响应表达

采用 5 种不同光质光源，分别对真姬菇（Hypsizygus marmoreus）的菌丝、原基和子实体进行照射，检测菌丝生长速度、原基形成数量、子实体菌柄长度、菌柄直径、菌盖直径以及产量等。结果显示：真姬菇菌丝在黑暗和红光下生长较快，在红绿蓝复合光下生长最慢；在蓝光下形成的原基数量最多，而在红光下原基数量最少；子实体阶段，黑暗下菌柄的长度及直径最大，绿光下菌柄长度及直径最小；而在蓝光和红绿蓝复合光下菌盖直径最大。相同培养时间，真姬菇在黑暗和蓝光下产量较高，在绿光下产量最低。进一步检测真姬菇光受体基因 WC1 和 WC2 在不同光质条件下的差异表达。结果表明，在菌柄中 WC1 在黑暗下表达量最高，WC2 在蓝光下表达量最高；而在菌盖中 WC1 和 WC2 均在蓝光下表达量最高。     

香菇菇木的水份管理

(一)菇木含水量和子实体形成:香菇子实体形成至成熟的全过程可分营养菌丝生长、原基形成、原基长大和子实体的发生。接种后,菌丝在25℃下生长,菇木随之腐朽,重量逐渐减轻。菇木不达到一定的腐朽程度,就不可能有很多子实体发生。调查了241号和514号接种二年菇木的重量变化和子实体发生之间的关系,发现菇木接种后重量减轻30％以上,就会产生发生子实体     

热胁迫下糙皮侧耳实时荧光定量PCR内参基因的选择

在组成型表达基因和热胁迫转录组数据中选择12个基因作为热胁迫下糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)实时荧光定量PCR的候选基因。以40℃热处理0.5、1、3、6、12、24、48 h的糙皮侧耳菌丝体为材料,采用候选基因的特异性引物进行实时荧光定量PCR,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对结果进行分析,评估12个候选基因的稳定性。结果显示β-微管蛋白基因、β-肌动蛋白基因和丝/苏氨酸蛋白磷酸酶基因可以作为糙皮侧耳热胁迫下理想的内参基因,而丝氨酸蛋白酶基因、磷酸化酶基因和细胞周期蛋白不适合作为糙皮侧耳热胁迫下的内参基因。