两种山羊及杂交代血液生化遗传标记研究(Ⅰ)

用聚丙烯酰胺垂直平板电泳法，研究安哥拉山羊、山谷型藏山羊及杂种Ｆ１、Ｆ２血液中Ｈｂ、Ａｌｂ、Ｔｆ、ＡＫＰ、ＥＳ、ＬＤＨ、Ａｍ等基因座表明，血液Ｈｂ、Ａｌｂ、ＬＤＨ、Ａｍ呈单态；血液Ｔｆ、ＡＫＰ、ＥＳ等基因座呈多态。Ｔｆ基因座有三种基因型（ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ）由Ａ基因和Ｂ基因控制。ＡＫＰ有两种基因型（ＡＫＰＦ、ＡＫＰＯ）。ＥＳ酶带类型复杂，可分为三区：ＥＳⅠ呈红色、ＥＳⅡ呈褐色、ＥＳⅢ呈紫褐色。运用血液Ｈｂ、Ｔｆ、ＡＫＰ、Ａｌｂ、Ａｍ的基因频率计算基因杂合度表明，安哥拉山羊的杂合度最小，Ｆ１代的杂合度最大。分析群体间遗传相似系数与级进杂交的变化一致；分析基因型分布差异表明亲本品种差异最大，安哥拉山羊与Ｆ１、Ｆ２间，Ｆ１和Ｆ２间差异较小。     

两种山羊及杂交代血液生化遗传标记研究(Ⅱ)

分析Ｔｆ、ＡＫＰ、Ｅｓ不同基因型以及血液ＬＤＨ活力值与一些经济性状的关系表明,Ｆ１及Ｆ２ＴｆＡＡ型的体型性状指标大于ＴｆＡＢ型;Ｆ２ＡＫＰｆ体型性状大于ＡＫＰｏ型;山谷型藏山羊和Ｆ２ＥｓⅠ１２３型体直长均显著大于ＥｓⅠ１２３４型;ＬＤＨ１、ＬＤＨ２活力与体型性状多为正相关,少数为较小的负相关;ＬＤＨ３、ＬＤＨ４、ＬＤＨ５与体型性状多为负相关,少数为较小的正相关。安哥拉山羊及Ｆ２的ＬＤＨ１、ＬＤＨ２活力与羊毛品质无相关关系,与ＬＤＨ３、ＬＤＨ４、ＬＤＨ５之间的关系较小。     

荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性     

青海细毛羊生化遗传多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和火焰光度法对５０９只青海细毛羊细血液和乳汁中ＨＢ，ＥＰ－１，ＥＰ－２，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ１，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｈｐα－ＬＡ和β－ＬＧ总共１３个位点的多态性进行了研究。结果为：（１）在青海细毛羊的ＨＢ，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ１，Ｈｐ，β－ＬＧ总共９个位点上发现多态性，多态性位点的比例为６９．２３％；（２）每个位点实有的平均等位     

青海本地黄牛的遗传变异性及基因分化

通过对柴达木黄牛和青海东部黄牛ＨＢ,ＫＥ,ＴＦ,ＰＴＦ,ＰＡ,ＡＭＹ１,ＡＬＰＡ,ＡＬＰＢ,ＲＢＣ－ＬＤＨ１,Ｓ－ＬＤＨ１,α－ＬＡ,β－ＬＧ,αｓ１－ＣＮ和β－ＣＮ１４个生化遗传基因座多态性的分的,研究青海本地黄牛的遗传变异性及两个群体间的基因分化。结果发现：（１）青海本地黄牛１４个生化遗传基因座的Ｐｐｏｌｙ为８５．７％,Ｈ为０．２６６２,Ｎｅ为１．４８６１个,Ｈ．Ｉ．为０．５７９８;（２）柴达木黄牛与青海东部黄牛两群体之间的遗传距离为０．００５８,基因分化系数为０．００７１,表明青海本地黄牛两群体间的基因分化程度极小。     

兔狲血液蛋白质和酶的电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对２只兔狲的４种血液蛋白质表型和３种血液同工酶酶谱进行研究。结果发现：①被检兔狲的血红蛋白（ＨＢ），白蛋白（ＡＬＢ）和后白蛋白（Ｐａ）分别呈单一的ＨＢＡＢ，ＡＬＢＡＡ和ＰａＡＡ型，运铁蛋白（ＴＦ）有ＴＦＡＢ和ＴＦＢＢ两种表型；②血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）由ＡＬＰＡ，ＡＬＰＢ，ＡＬＰＣ和ＡＬＰＤ四种同工酶组成；③血清酯酶（ＥＳ）由ＥＳＩ和ＥＳＩＶ两种同工酶共７条区带组成；④血清乳酸脱氢酶（Ｓ－ＬＤＨ）由ＬＤＨ１，ＬＤＨ２，ＬＤＨ３，ＬＤＨ４和ＬＤＨ５五种同工酶组成，红细胞内只有前四种ＬＤＨ同工酶。     

山谷型藏山羊及其杂种羊乳生化遗传标记研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分析山谷型藏山羊、安哥拉山羊、Ｆ１乳中的ＬＤＨ、ａｓ－ＣＮ、β－ＣＮ、β－Ｌｇ、ＳＡ等基因座。结果表明，乳ＬＤＨ出现三条带（Ａ）、两条带（Ｂ）、一条带（Ｃ）３种类型；ａｓ－ＣＮ有３种表型（ＡＡ、ＡＢ、ＢＢ），由Ａ基因和Ｂ基因控制；在β－ＣＮ和β－ｌｇ中以ＡＢ型为主，其余类型很少；乳ＳＡ为单态，定为ＡＡ型。分析乳ａｓ－ＣＮ多态性与６个主要经济性状（体重、体直长、体高、胸围、管围、自然毛长）的关系发现，山谷型藏山羊ａｓ－ＣＮＡＡ、ＡＢ型体直长显著大于ＢＢ型体直长（Ｐ＜００５），Ｆ１ａｓ－ＣＮＡＡ型胸围显著大于ＡＢ型。     

云南中甸尼西鸡的血液蛋白多态性研究

采用水平式淀粉胶凝胶电泳技术和垂直式聚丙烯酰胺凝胶电泳技术检测了云南中甸尼西鸡的血液蛋白多态，对３３个样本的３７个基因座位进行了分析，共有９个座位出现多态，分别为ＥＳ－１、ＥＳ－２、ＡＫＰ－１、ＡＫＰ－２、ＬＡＰ、ＰＧＭ、ＣＫ、Ｔｆ及６ＰＧＤ。多态位点百分比Ｐ＝０．２４３２，平均杂合度Ｈ＝０．１０１５，每个座位等位基因的平均数Ａ＝１．３７８４，结果表明尼西鸡的血液蛋白多态程度较高，在蛋白质水平上的遗传多样性较为丰富。同时发现Ａｍｙ－１座位只出现杂合子ＡＢ型。     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

为防治绿脓杆菌感染造成的细胞坏死及多器官衰竭，本试验克隆了含绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）结合亚单位（Ⅰ区）和部分跨膜亚单位（Ⅱ区）编码３０９个氨基酸的约１０００ｂｐ的基因片段，以正确阅读框架将该片段置于原核高效表达Ｔ７启动子下游，构建了高效表达质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ。转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＨＭ１７４（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ后，经ＩＰＴＧ诱导４ｈ，均表达了外源目的基因蛋白，其中ＢＬ２１（ＤＥ３）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ的表达量明显高于其他宿主菌。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，外源蛋白分子量约３４０００，与ＰＥＡⅠ区和部分Ⅱ区基因所编码的蛋白理论估计值相符，命名为ＰＥ３４。凝胶薄层扫描显示，ＰＥ３４含量占菌体蛋白总量的５６％。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ检测证明ＰＥ３４为所需目的蛋白     

秦岭两侧黄牛群体遗传检测报告

以中心产区系统随机整群抽样对分布在秦岭两侧的秦川，西镇，平利３个地方黄牛品种（总头数各为６４２９３１，７２８４８，１３６４８）就下列遗传标记进行了检测：１．β血红蛋白（Ｈｂ），血清白蛋白（Ａｌｂ），后白蛋白（Ｐａ），运铁蛋白（Ｔｆ），后运铁蛋白ＯＰｔｆ），碱性磷酸酶（ＡＫＰ）６个位点的基因频率；２．Ｂ（黑色），Ｄ（稀释毛色），Ｓ（白斑的有无与类型），Ｂｒ（黧毛），Ｐｓ（皮肤黑斑），Ｉｎ（下腹部白斑     

龙陵黄山羊遗传多样性同功酶电泳研究

采用常规水平式淀粉胶蛋白电泳技术，对３８只龙陵黄山羊个体的３９个遗传座位的血液同功酶的多态性进行了研究。结果发现，ＡＫＰ、ＣＥＳ－Ｉ、ＥＳＤ、ＧＯＩ、ＬＡＰ、ＭＤＨ、ＭＥ和ＮＰ等８个座位具多态性，多态座位ＡＫＰＯ、ＣＥＳ－ＩＩ、ＦＳＤＡ、ＧＯＩＢ、ＬＡＰＡ、ＭＤＨＡ、ＭＥＡ和ＮＰＡ的基因频率较高；多态座位百分比Ｐ＝０２０５１，平均杂合度Ｈ＝００９０６±００２６５。结果表明，云南龙陵黄山羊与已检测的其它山羊比较，遗传多样性水平较高     

蒙古马东西两大类型群体遗传变异分析

经对蒙古马的乌审马和乌珠穆沁马血液蛋白多态位点ＡＬｂ，Ｔｆ，Ｅｓ基因频率的遗传学分析。结果表明两类型各具明显的种群特异性；平均位点杂合度（Ｈ），经ｔ检验两类型差异极显著（Ｐ＜０．０１）；类型间的遗传差异较大已占７．８４％；Ｔｆ和Ｅｓ位点各基因在类型间均分化较大（Ｆｓｔ为０．１０８４－０．３９８６）。     

青海细毛羊血红蛋白和红细胞蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对４７９只青海细毛羊的血红蛋白和红细胞蛋白质的多态性进行研究。结果发现：①青海细毛羊的血红蛋白基因座上有ＨＢＡＡ，ＨＢＡＢ，ＨＢＡＣ和ＨＢＢＢ四种基因型。ＨＢ＾Ａ，ＨＢ＾Ｃ等位基因频率分别为０．２６４１，０．７３４９和０．００１０；②血红蛋白基因座的基因型频率和基因频率没有性别间差异；③青海细毛羊ＥＰ－１和ＥＰ－２是单态性蛋白质。     

含绿脓杆菌外毒素A受体结合区重组蛋白的纯化

将表达含绿脓杆菌外毒素（ＰＥＡ）受体结合区基因的质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ转化到大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＩＰＴＧ诱导表达了含ＰＥＡ受体结合区的重组蛋白（称ＰＥ３４）。ＰＥ３４主要以包涵体形式存在于大肠杆菌中,用溶菌酶－脱氧胆酸钠法结合超声波裂解法破碎细菌,离心制备包涵体。用２ｍｏｌ／Ｌ脲洗涤包涵体后,包涵体纯度可达７５％,在８ｍｏｌ／Ｌ脲存在条件下,ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶滤过,ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ离子交换层析纯化,获得ＳＤＳ－ＰＡＧＥ１条带的ＰＥ３４,纯度达９５．８％,得率为２４．５％。     

互助白牦牛血液蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对７１头互助白牦牛４种血液蛋白质的多态性进行研究。结果表明：（１）血红蛋白显现ＨＢＦ￣＋Ｓ￣－，ＨＢＦＳ和ＨＢＦ￣－Ｓ＋三种表型，其表型频率分别为４．３％，９４．３％和１．４％；（２）血清白蛋白、血清运铁蛋白和血清亲血色蛋白均呈单态，显现单一的ＡＬＢＡＡ，ＴＦＤＤ和Ｈｐｌ－１型；（３）互助白牦牛４种血液蛋白质的Ｐｐｏｌｙ为２５．０％，Ｈ为０．０２７３。     

滩羊血红蛋白（Hb）分布的地区差异研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了滩羊品种（品群）血红蛋白的类型及其分布的区差异。结果表明，Ｈｂ位点鉴别出两个等位基因ＨｂＡ和ＨｂＢ，控制着三种表现型（基因型），即ＨｂＡＢ，ＨｂＢＢ，ＨｂＡＡ。ＨｂＢ基因在滩羊羊群体中占优势，且随着选育程度高低呈增加的趋势，ＨｂＢ基因频在滩羊中心产区（最适生态区）高于一般产区（适宜生态区）。我们认为，血红蛋白多太作为滩羊品种遗传标记是可行的，建议以ＨｂＢＡＤ ＬＤ     

互助白耗牛血液蛋白质多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对７１头互助白牦牛４种血液蛋白质的多态性进行研究。结果表明：（１）血红蛋白显著ＨＢＦ＾＋Ｓ＾－，ＨＢ ＦＳ和ＨＢＦ＾－＾Ｓ＋三种表型，其表型频率分别为４．３％，９４．３％和１．４％；（２）血清白蛋白、血清运铁蛋白和血清亲血色蛋白均呈单态，显现单一的ＡＬＢＡＡ，ＴＦＤＤ和Ｈｐｌ－１型；（３）互助白牦牛４种血液蛋白质的Ｐｐｏｌｙ为２５．０％，Ｈ为０．０２７３。     

青海藏羊血清运铁蛋白多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对青海省三角城种羊场和达日县的１９６份藏羊血样进行了血清运铁蛋白多态性的研究。结果发现：①在被检藏羊的血清运铁蛋白位点上共发现ＴＦ￣Ｉ，ＴＦ￣Ａ，ＴＦ￣Ｇ，ＴＦ￣Ｂ，ＴＦ￣Ｌ，ＴＦ￣Ｃ，ＴＦ￣Ｄ，ＴＦ￣Ｍ，ＴＦ￣Ｅ，ＴＦ￣Ｑ和ＴＦ￣Ｐ１１个等位基因，其中ＴＦＣ（０．３２４０），ＴＦ￣Ｂ（０．２６７９）和ＴＦ￣Ｄ（０．２１６８）为优势等位基因；②共发现ＴＦＩＥ，ＴＦＡＡ，ＴＦＡＢ，ＴＦＡＣ，ＴＦＡＤ，ＴＦＡＭ，ＴＦＧＢ，ＴＦＧＬ，ＴＦＧＣ，ＴＦＧＤ，ＴＦＢＢ，ＴＦＢＣ，ＴＦＢＤ，ＴＦＢＭ，ＴＦＬＣ，ＴＦＬＤ，ＴＦＬＥ，ＴＦＣＣ，ＴＦＣＤ，ＴＦＣＥ，ＴＦＣＱ，ＴＦＣＰ，ＴＦＤＤ，ＴＦＤＭ，ＴＦＤＥ和ＴＦＤＱ２６种基因型，其中ＴＦＢＣ（２０．４１％）、ＴＦＣＣ（１３．７８％）和ＴＦＢＤ（１１．７４％）为优势基因型。     

二花脸与大约克猪21-羟化酶基因位点限制性片段长度多态性比较

本研究采用ＲＦＬＰｓ分析方法对１２头无亲缘关系的二花脸和１２头无亲缘关系的大约克猪的２１－羟化酶基因位点限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰｓ）类型进行比较研究,结果５种限制性内切酶（ＢａｎⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＫｐｎⅠ、ＰｓｔⅠ和ＴａｑⅠ）在２品种中形成了Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ９种ＲＦＬＰｓ类型。其中大约克出现Ａ～Ｈ８种类型,而二花脸只有Ⅰ类型,表明大约克和二花脸在此基因位点存在显著差异。     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个