液体酶的稳定性及生物学效价的体外评定

芩研究测定4种液体酶(编号为L1、L2、L3、L4)中木聚糖酶的最适pH值范围、在猪胃液中的稳定性、3种温度(20、35、50℃)下的贮存稳定性,同时对这4种液体酶对麸皮与脱水玉米酒糟及可溶物(DDGS)的纤维体外降解能力进行了评估.结果表明L1、L2、L3、L4中木聚糖酶的原始酶活分别为4349、5042、18749、9314U/mL;在pH值为3.5时,L2的相对活性最高,其他酶在pH为5.5时相对活性最高.在猪胃液中保存8 h后,各酶中木聚糖酶的剩余活性依次为27.95%、46.39%、71.26%、61.26%.在20℃下贮存10周后,L1、L2、L3、L4中木聚糖酶的剩余酶活分别是47.32%、63.84%、83.12%、73.79%;在35℃下贮存10周后,其剩余酶活分别是6.95%、43.34%、29.87%、20.06%;在50℃贮存8周后,各液体酶的木聚糖酶都基本失活.4种液体酶对麸皮中的NDF的降解率均较佳,L2、L4时DDGS中NDF、麸皮和DDGS中半纤维素的降解率相对更高.     

重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究

采用DNS还原糖法研究基因工程菌毕赤酵母产木聚糖酶的酶学性质。结果表明:该木聚糖酶具有良好的热稳定性;最适pH为4.5,在pH3.5～7.0条件下均能保持较高的酶学活性,且对不同酸碱pH环境具有较强的耐受性;内源性蛋白酶对该木聚糖酶的活性影响较小;室温25℃下贮存12个月,该酶活性保持在80%左右;在4.0%仔猪预混料中贮存12周,酶活存留仍达91.4%以上,表现出良好的贮存稳定性。     

预混料中木聚糖酶和植酸酶酶活的测定新方法

本试验选用六和预混料样品,添加定量的KDN自产全细胞酶或植酸酶,利用DNS法对比不同方法测得的酶活。结果表明：在稀释酶缓冲液中添加6％的DETA·2Na,可以明显提高预混料中木聚糖酶或植酸酶的酶活测定值：采用一次性稀释到位酶样品比分级稀释测得的木聚糖酶或植酸酶的酶活值明显提高。     

黄芪对复合酶制剂酶活影响的研究

通过对添加黄芪浸提液的复合酶制剂中酸性蛋白酶、纤维素酶和植酸酶酶活的分析表明,黄芪主要成分可明显抑制酸性蛋白酶的活性,显著增强纤维素酶和植酸酶活性,并且这种作用随着酶制剂稀释倍数的增加而增强。     

木聚糖酶酶活测定的几点体会

本文总结了在木聚糖酶(制剂)酶活实际测定过程中底物种类、底物配制方式和酶液稀释倍数对测定结果的影响.     

黄芪对复合酶制剂酶活影响的研究

饲用酶制剂作为一种新兴的饲料产业,在我国被广泛应用,而在酶制剂中添加黄芪等中草药,能显著增强动物的抵抗能力,提高养殖企业的生产效益,因此市场前景十分广阔。通过分析添加黄芪浸提液后饲用复合酶制剂中酸性蛋白酶、纤维素酶和植酸酶酶活的变化,研究了黄芪成分对复合酶中3种主要酶酶活的影响。结果表明,添加黄芪成分可明显抑制复合酶制剂中酸性蛋白酶酶活,显著增强纤维素酶和植酸酶酶活,并且这种作用随着酶制剂稀释倍数的增加而增强。     

饲用植酸酶酶活测定过程中底物的影响研究

参照国标法测定饲用植酸酶活性,研究不同来源的底物植酸钠、底物浓度、底物pH对饲用植酸酶活性的影响。结果表明,以P8810为代表的植酸钠盐水合物作为底物,其测定出的植酸酶酶活显著高于使用以P3168为代表的植酸钠作为底物所测定的植酸酶酶活。以P8810作为底物时,其反应浓度在高于6.6 mmol/L时,会产生底物抑制效应。以P8810作为底物时,调节底物pH至国标中定义的5.5与未调节pH所测得的植酸酶酶活相比较,差异并不显著,且在低底物pH条件下,某些植酸酶同样能够释放出最大催化活性。因此现有的国标法测定饲用植酸酶活性已与实际应用有一定的差别,不能照搬国标方法测定现有饲用植酸酶产品。     

植酸酶在肉仔鸡消化道内环境下活性变化的体外研究

本研究在体外条件下对肉仔鸡消化道内pH环境以及蛋白质水解酶对黑曲霉植酸酶活性的影响进行了研究。结果表明,该植酸酶为酸性植酸酶,最适pH为5.5。该植酸酶对pH环境和蛋白质水解酶较为敏感。当环境pH远离其最适pH时其活性迅速下降,且大部分酶活损失发生在30 min内,然后趋于稳定。在pH3.0和pH6.0条件下,加入胃蛋白酶和胰酶后,植酸酶活性亦进一步迅速降低,然后趋于稳定,但与胃蛋白酶相比,胰酶对植酸酶活性的影响更大。从植酸酶在14、28和42日龄肉仔鸡胃和小肠稳定性的研究可以看出,植酸酶在胃存留率分别为42%、40%和49%,在小肠内的存留率仅19%。植酸酶在胃内的稳定性好于小肠,小肠内环境不利于植酸酶存活。植酸酶活性受肉仔鸡消化道pH和蛋白酶的影响较大,这可能是影响植酸酶作用效果的主要因素之一。     

植酸酶基因在嗜酸乳杆菌中的表达

植酸酶和嗜酸乳杆菌是重要的饲料添加剂,为获得产植酸酶的嗜酸乳杆菌菌株,克隆了大肠杆菌植酸酶基因,构建表达载体并转化嗜酸乳杆菌,对重组嗜酸乳杆菌进行发酵产酶并测定所产酶液的酶学性质,进一步研究重组嗜酸乳杆菌的耐酸性及植酸酶液的抗蛋白酶活性。结果表明：重组嗜酸乳杆菌发酵24 h植酸酶活性为984 U/mL,植酸酶的最适催化pH为4.5,最适催化温度为60℃。重组嗜酸乳杆菌在pH 2.0～4.5有一定的耐酸性,在pH 2.0条件下2 h的存活率为76.4%。植酸酶液用胃蛋白酶处理160 min后植酸酶液剩余85%的相对酶活,用胰蛋白酶处理160 min后剩余29%的相对酶活。上述研究结果为重组嗜酸乳杆菌后续应用研究提供了重要依据。     

水浴法测定饲用植酸酶耐热性方法的研究

试验研究不同条件对植酸酶水浴耐热性的影响。分别稀释4种植酸酶酶活力40、20、10、2 U/mL,测定80℃和85℃水浴5 min的耐热性。结果表明,稳定性强的植酸酶受酶浓度的影响较小,稳定性较差的植酸酶受影响较大,当处理液酶活力低时,耐热性结果较高。取3种植酸酶样品,分别使用缓冲液Ⅰ、缓冲液Ⅱ、水为耐温稀释缓冲液,测定85℃水浴5 min耐热性,结果表明:缓冲液Ⅰ作为稀释缓冲液测定的耐热性结果最高,其次是缓冲液Ⅱ,水作为稀释缓冲液时测定的耐热性结果最低。取3种植酸酶样品,分别在pH值5.5和5.0缓冲体系中测定85℃水浴5 min耐热性,结果表明,植酸酶在与最适pH值相近的条件下进行耐热性处理,测定的耐热性结果相对较高。研究表明,本试验的3种条件对水浴法测定植酸酶耐热性的结果均有影响,制定检测标准时需要明确测定条件。     

植酸酶的特性及稳定性效果的对比研究

试验就植酸酶的相关特性及其在此基础上的应用选择功效进行研究,并对市场上占有率较高的三个国产知名企业生产的植酸酶产品(P1、P2、P3)进行稳定性研究,比较这三种植酸酶产品在不同pH值、不同温度下(室温、80℃水浴、90℃常湿)和不同储存时间的酶活,为生产实践中合理选择使用植酸酶提供参考依据。结果表明,P2在酶活高峰pH值4.5～5.0表现出的酶活显著高于P1和P3(P0.05)。高温稳定性效果P3显著优于P1和P2(P0.05)。     

不同条件下木聚糖酶稳定性的研究

本试验研究了木聚糖酶在不同温度、pH值和保存条件下酶活变化情况.结果表明:木聚糖酶整体耐高温性能较好,85℃下相对酶活仍然能保持在70%以上,同时随着处理时间的延长在不同温度下酶活损失也呈增加趋势;偏酸性条件木聚糖酶能保持较高的酶活,碱性条件不利于木聚糖酶的存活;在常温和37℃恒温保存条件下木聚糖酶都具有良好的稳定性.     

康宁木霉产木聚糖酶的稳定性研究

本文研究了不同无机离子、pH值和温度对康宁木霉(Trichoderma koningii)产木聚糖酶稳定性的影响.结果表明:(1)不同种类、不同浓度的无机离子对木聚糖酶的活性表现出不同程度的激活或抑制作用.Cu2+、Mn2+和Ba2+可抑制木聚糖酶活性,而Co2+、Na+、K+、Fe2+、Ca2+和Mg2+可激活木聚糖酶活性.(2)不同pH和温度对木聚糖酶的活性也有显著影响.康宁木霉产木聚糖酶的最适保存pH和温度分别是7.0和30℃.且在pH 5～8时相对酶活可保持80%以上.     

应用琼脂扩散法测定饲料中木聚糖酶含量

本实验研究了应用琼脂扩散法测定饲料中所舍木聚糖酶的活性.结果表明,该方法标准曲线制作线性良好;应用淀粉稀释木聚糖酶进行验证性实验,检测酶活测定值和实际理论值之间差异不显著(P>0.05),说明该方法准确率很高;应用饲料稀释木聚糖酶进行验证性实验,检测酶活值低于理论值,但这并不影响该方法对饲料中酶活的判定.综合整个实验结果表明,此方法可以很好的检测饲料中含有的微量木聚糖酶.     

pH值对植酸酶酶活的影响及其在猪、鸡消化道中的分析

通过测定在不同ｐＨ值条件下两种植酸酶的活性,发现ｐＨ值对植酸酶活力有较大影响。在鸡嗉囊的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活都是１００％,而在动物真胃的ｐＨ值条件下,Ｔ植酸酶和Ｎ植酸酶的酶活相对标准酶活分别是７７．８２％和４９．６１％。     

饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响分析

为找出混合过程中引起固态木聚糖酶酶活测定结果差异的原因,试验研究了主要饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响。结果表明:酶稀释溶液中加入固态植物原料、液态原料均对木聚糖酶测定值无显著影响,混入预混料会引起酶活测定值的明显下降;液态原料与固态木聚糖酶混合会影响到固态酶的稀释溶解,从而引起酶活测定值的显著下降。     

木聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对木聚糖酶的一些性质进行了研究。结果表明:该酶的最适反应pH为6.0,在pH5～10之间保温不同时间后可保持较高的活性;最适反应温度50℃,液态下低于60℃热稳定性较好。在50℃、pH6.0下,以燕麦木聚糖为底物时,该木聚糖酶的米氏常数Km=6.49mg/mL,最大反应速度Vmax=21.05μg/(mL·min)。用不同底物测定酶活,以燕麦木聚糖为底物的酶活最高。酶在动物胃中活性较低,而在肠道中活性较高。     

水质对梨树液体授粉时花粉萌发率的影响

液体授粉是省力化花果管理的重要技术，近年来该项技术已在全国推广应用，取得很好的效果；梨树液体授粉可以节约近90%的人工授粉用工，降低60%的授粉成本。但是也发现该技术在安徽砀山县等地的应用效果不佳。通过优化液体授粉的各个环节，发现砀山县梨园水源的钙离子含量很高，造成配置的授粉溶液pH值偏高，影响了梨花粉的萌发过程。通过调节pH至6.0，可以显著提高授粉液中的花粉萌发率。进一步通过实验分析，pH是授粉液中花粉萌发的主要影响因子。因此，在推广液体授粉技术过程中，要因地制宜，注意检测当地水质的pH值，如果偏离正常值，需要进行调节，以保证液体授粉效果的稳定性。     

不同运输条件下液态木聚糖酶的稳定牲研究

实验室中模拟温度(-20～55℃)、时长(24～72 h)的运输条件,以4℃冷藏酶液为对照,通过比较处理前后的酶活变化来评价运输对液态木聚糖酶稳定性的影响,结果表明:-20～15℃环境下,时长72 h内的运输对液态木聚糖酶的酶活测定值无明显影响,也不会造成明显的酶活损失;25～55℃环境下.时长24～72 h的运输对液态木聚糖酶的稳定性有明显影响,温度升高(或时长增加)除导致酶活损失加快外,还会引起酶活测定值与4℃存储后测定值的明显差异.     

不同运输条件下液态木聚糖酶的稳定性研究

实验室中模拟温度(-20～55℃)、时长(24～72h)的运输条件,以4℃冷藏酶液为对照,通过比较处理前后的酶活变化来评价运输对液态木聚糖酶稳定性的影响,结果表明:-20～15℃环境下,时长72h内的运输对液态木聚糖酶的酶活测定值无明显影响,也不会造成明显的酶活损失;25～55℃环境下,时长24～72h的运输对液态木聚糖酶的稳定性有明显影响,温度升高(或时长增加)除导致酶活损失加快外,还会引起酶活测定值与4℃存储后测定值的明显差异。