球孢白僵菌与苦参碱混配对烟粉虱的毒力与田间防效

旨在探讨球孢白僵菌与8种杀虫剂的相容性以及球孢白僵菌与苦参碱混配对温室烟粉虱的防治效果。首先进行8种杀虫剂与球孢白僵菌的相容性试验,然后选择相容性较高的苦参碱与球孢白僵菌的LC_(50)浓度以9∶1、4∶1、1∶1、1∶4和1∶9体积比进行混配,以共毒系数对其毒力进行评价。结果表明:苦参碱与球孢白僵菌的相容性最好,尤其在10倍稀释度下,苦参碱对球孢白僵菌孢子萌发、菌丝生长及产孢抑制率分别为14.44%、10.17%和12.63%。苦参碱与球孢白僵菌体积比为4∶1时,共毒系数为293,增效作用最明显。综上所述,苦参碱与球孢白僵菌在LC_(50)浓度下以4∶1体积比混配具有极显著的增效作用。     

绿僵菌信息素基因(MAT1)功能研究

以绿僵菌为试验材料,通过同源重组的方法构建信息素基因(MaMAT1)敲除和回复载体,利用农杆菌介导转化法获得MaMAT1基因敲除和回复菌株,并对ΔMaMAT1菌株孢子萌发率、产孢量、抗湿热、抗紫外及毒力进行分析.结果表明,与WT菌株相比,ΔMaMAT1菌株的萌发率、抗湿热和抗紫外能力无显著差异,但其产孢量、毒力显著降低.     

球孢白僵菌、保幼激素联用防治花椒蚜虫

笔者探讨了不同浓度水平的球孢白僵菌生物防治花椒蚜虫(棉蚜)的大田试验,从综合效果来看,10~8个孢子·mL~(-1)球孢白僵菌对于大田防治花椒蚜虫是比较合适的浓度,可达到90.4%的致死率。球孢白僵菌和1μg·μL~(-1)保幼激素联用可以增加球孢白僵菌防治花椒蚜虫的效果,其中10~8个孢子球孢白僵菌+1 μg·μL~(-1)保幼激素可以达到校正死亡率96.5%的效果。试验证明在大田应用球孢白僵菌防治花椒蚜虫是可行的,为进一步减少乃至取代化学农药的使用提供了思路和初步尝试。     

云南球孢白僵菌的遗传多样性研究

 球孢白僵菌是一种广谱性虫生真菌,在害虫种群的自然控制中发挥着重要作用。为弄清云南省球孢白僵菌种群的遗传多样性,丰富云南虫生真菌多样性内容,本研究采用ISSR分子标记技术对云南不同地区及不同寄主来源的39个球孢白僵菌菌株的遗传多样性进行了分析。结果表明,有11个ISSRs可用于39个球孢白僵菌菌株群体PCR扩增,每个引物扩增5～15条DNA带。供试39个球孢白僵菌菌株群体的多态位点百分率(PPL)达99.09％,不同寄主来源亚种的Nei基因多样性(He)为0.3478,居群间的基因分化系数(Gst)为0.0724,总基因多样性(Ht)为0.3518,亚种群内基因多样性(Hs)为0.3263,不同寄主亚种群间的基因流(Nm)为6.4044;不同地理来源白僵菌种群Nei基因多样性指数He为0.3444,Shannon 指数I为0.5152;总基因多样性Ht为0.3473,亚种群内基因多样性Hs为0.2131,亚种群间的基因分化系数Gst为0.3862。综合遗传多样性结果,云南省球孢白僵菌种群遗传结构复杂、遗传异质性明显,从寄主来源来看,居群间遗传变异较小,居群内遗传分化较大;从地理来源来看,居群间遗传变异较大,居群内表现遗传变异较小。     

球孢白僵菌tps1转基因菌株与初始菌株生物学特性比较

该文对SDAY培养基上培养的球孢白僵菌tps1转基因工程菌株与原始出发菌株各自在菌落形态,菌丝生长速度,产孢量等方面进行了综合评价。结果表明:球孢白僵菌tps1转基因工程菌株与原始出发菌株的菌落形态有一定差异。且球孢白僵菌tps1转基因菌株菌丝生长速度更快,其菌丝生长速度为(3.73±0.05)mm/d而原发菌株菌丝生长速度为(3.45±0.52)mm/d。另外,重组菌株的产孢量(0.92±0.02)×10~8个,明显低于原始出发菌株(1.12±0.17)×10~8个。     

球孢白僵菌分子生物学研究进展

目前,球孢白僵菌已被广泛应用于农林害虫的生物防治,但球孢白僵菌及其制剂存在击倒害虫时间长、受环境影响较大和防效不稳定等弊端.分别从球孢白僵菌入侵害虫过程中相关酶类(蛋白酶、几丁质酶)基因的克隆与功能分析、转基因菌株构建、抗逆分子生物学等方面对球孢白僵菌的分子生物学最新研究进展进行了阐述,并对其未来发展进行了展望.     

球孢白僵菌对亚洲玉米螟血细胞毒力和形态的影响

【目的】测定球孢白僵菌Beauveria bassiana对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis血细胞系SYSU-Of He-C的影响,为促进球孢白僵菌在防治亚洲玉米螟中的应用提供理论依据。【方法】采用MTT和CCK-8法测定球孢白僵菌对亚洲玉米螟血细胞系SYSU-Of He-C的毒力,通过光学显微镜与扫描电镜观察球孢白僵菌生长及其对SYSU-Of He-C细胞的影响。【结果】球孢白僵菌分生孢子处理SYSU-Of He-C细胞24 h后,MTT法的IC_(50)值为2.8×10~5mL~(-1),CCK-8法的IC_(50)值为1.4×10~5mL~(-1)。光学显微镜实时监测发现,在SYSU-Of He-C细胞对数期接种球孢白僵菌浓度为3.5×10~4mL~(-1)时,球孢白僵菌具有明显竞争力,未发现囊胞化与吞噬等细胞免疫现象;处理10 h后,球孢白僵菌分生孢子开始萌发长出菌丝,而SYSU-Of He-C细胞减少且开始变形;处理24 h,球孢白僵菌几乎长满整个视野;SYSU-OfHe-C细胞从近似圆形变长或者变为不规则形状,出现聚集、破碎、胞内空泡、瘤状突起,以及被白僵菌菌丝穿透等现象。【结论】球孢白僵菌可改变亚洲玉米螟血细胞系SYSU-Of He-C的细胞形态,但不能使其发生细胞免疫现象。     

球孢白僵菌最适培养基筛选和遗传转化筛选标记的研究

研究了球孢白僵菌在4种培养基上的生长速度,发现球孢白僵菌在L-broth培养基上生长最快,在PDA培养基上产孢最快。进一步研究包括除草剂和潮霉素B等10种抗生素在L-broth培养基上对球孢白僵菌菌丝体和原生质体的生长抑制作用。球孢白僵菌菌丝体在150mg/L除草剂的培养基上生长被完全抑制,球孢白僵菌的原生质体在25mg/L除草剂的培养基上生长被完全抑制,潮霉素B和其他抗生素没有明显的抑制作用。结果表明,外源基因转化球孢白僵菌原生质体时,可以以抗除草剂基因为转化筛选标记。     

茶卷叶蛾寄生真菌球孢白僵菌几丁质酶基因的克隆与序列分析

球孢白僵菌是最重要的虫生真菌之一,在农林害虫生防中发挥着重要的作用。本研究从茶卷叶蛾球孢白僵菌JYBb201-11菌株中克隆了几丁质酶Bbchit1基因(GenBank登录号:HQ435871)。根据GenBank上昆虫病原真菌几丁质酶基因序列同源性设计引物,分别进行DNA-PCR和总RNA-RT-PCR反应,对得到的目的片段,回收纯化后通过PMD18-T载体转化到大肠杆菌DH5α中,获得几丁质酶基因序列的重组质粒PMD18-chit,并测序。结果表明,DNA-PCR和总RNA-RT-PCR获得的基因序列完全一样,都是一个完整ORF序列,含1 047bp核酸序列,编码348个氨基酸,信号肽长度为22个氨基酸,成熟蛋白理论分子量约为36.78kD,理论等电点为5.95。该蛋白序列中包含2个保守区域,即底物结合区域(SIGG)和几丁质的活性位点(DGIDIDIE),该蛋白可归为几丁质酶18族V类。氨基酸序列同源性分析表明,球孢白僵菌JYBb201-11菌株几丁质酶与球孢白僵菌Bb0062菌株(AAN41259)和NCIM1216菌株(ACF32998)几丁质酶chit1氨基酸序列同源性都达99.43%;与球孢白僵菌MTCC 2028菌株(ACZ28129)几丁质酶chit1氨基酸序列同源性达98.28%。     

10株白僵菌菌株形态学与分子鉴定

对10株白僵菌属菌株的菌落形态、产孢结构和分生孢子形状、大小作了观察与测量,形态学鉴定为球孢白僵菌。同时对此10株球孢白僵菌核糖体DNA-ITS进行了测序分析,与NCBI数据库中的球孢白僵菌(Beauveria bassiana)多个菌株的同源性达99.10%～99.64%。依此,10株白僵菌菌株分子鉴定结果为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)。     

水稻osvdac基因RNAi表达载体的构建及遗传转化

[目的]构建水稻osvdac3和osvdac5基因RNA干涉表达载体,获得转干涉载体的转基因水稻植株。[方法]采用TRIzol法提取水稻幼苗总RNA,以反转录的cDNA为模板,扩增得到osvdac3和osvdac5的分别靠近5’端和3’端约500～600bp的特异序列,用Gateway重组克隆技术构建RNA干涉表达载体,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行遗传转化。[结果]成功构建水稻2个osvdac3和2个os-vdac5基因RNA干涉表达载体,并获得转osvdac3干涉载体的阳性植株。[结论]干涉osvdac3和osvdac5的植株为研究其功能提供材料。     

黄瓜花叶病毒西番莲分离物RNA3 的cDNA全长克隆和序列分析

采用RT-PCR方法克隆了黄瓜花叶病毒西番莲致死分离物（CMV-PE）全长RNA3.经核苷酸序列测定，明确PE分离物 RNA3全长2216 nt，含有2个开放阅读框（ORF），其中5'端的ORF（121-963 nt）编码279 aa的3a蛋白，3'端ORF（1260-1916 nt ）编码218 aa的CP蛋白.5'端非编码区（NR）长120 nt,基因间隔区（IR）长296 nt，3'端NR区含301个碱基.PE分离物编码的3a蛋白中最明显的特征是在136-141位有一个独特的VWCLSS区域.将CMV-PE的RNA3的核苷酸序列及其编码蛋白的氨基酸序列与同属CMV亚组I的其它分离物进行比较，发现症状相似的CMV分离物的非编码区具有很高的序列同源性，说明非编码区序列与症状有关.     

Human-proto-oncogene nucleotide sequences corresponding to the transforming region of simian sarcoma virus

The nucleotide sequences of the six regions within the normal human cellular locus (c-sis) that correspond to the entire transforming region of the simian sarcoma virus (SSV) genome (v-sis) were determined. The regions are bounded by acceptor and donor splice sites and, except for region 6, resemble exons. Region 6 lacks a 3' donor splice site and terminates -5 base pairs from the 3' v-sis-helper-viral junction. This is consistent with a model proposing that SSV was generated by recombination between proviral DNA of a simian sarcoma associated virus and proto-sis and that introns were spliced out subsequently from a fused viral-sis messenger RNA. This also suggests that the 3' recombination occurred within an exon of the woolly monkey (Lagothrix) genome. The open reading frames predicting the v-sis and c-sis gene products coincide with the stop codon of c-sis located 123 nucleotides into the fifth region of homology. The overall nucleotide homology was 91 percent with substitutions mainly in the third codon positions within the open reading frame and with greatest divergence within the untranslated 3' portion of the sequences. The predicted protein products for v-sis and c-sis are 93 percent homologous. The predicted c-sis gene product is identical in 31 of 31 amino acids to one of the published sequences of platelet-derived growth factor. Thus, c-sis encodes one chain of human platelet-derived growth factor.     

球孢白僵菌CDEP2基因原核表达、蛋白纯化及多克隆抗血清制备

类枯草杆菌蛋白酶是昆虫致病真菌重要的毒力因子,利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因.将其与质粒pET28a连接,构建重组原核表达载体pET28-CDEP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE检测His-CDEP2融合蛋白以包涵体方式大量表达并对其进行纯化.用SDS-PAGE分离纯化的CDEP2蛋白免疫家兔,制备了多克隆抗血清.Western blotting免疫印迹检测分析表明,该抗血清对CDEP2蛋白有特异性识别能力,可用于对CDEP2蛋白功能的进一步研究.     

猪羊生长激素基因保守性研究

生长激素基因在猪羊间的差异 ,通过两对引物 ,分别为P1:5’ -agctggattctttacggctgagcc - 3’和P2 :5’ -tccggaagcaggagagcagaccgtag - 3’ ,P3:5’ -gctgacacctacaaggagtttg - 3’和P4:5’ - gtttgcttgaggatctgtcctg - 3’。对它们的DNA进行聚合酶链反应 ,电泳及序列分析结果表明 :P1-P2和P3-P4引物都能扩增出猪羊DNA样 ,得到大小一致的扩增带 (对应引物的带 ) ,但southern杂交结果的差别很大 ;生长激素基因的碱基组成在猪羊间的差异为 6 5 % ,即猪羊生长激素基因保守性很强     

不同森林生态系中球孢白僵菌遗传多样性比较研究

利用ISSR分子标记技术,对采集自安徽省滁州市天然次生林——琅琊山国家森林公园和宣城市人工马尾松纯林——麻姑山林场球孢白僵菌种群的遗传多样性水平和种群遗传结构进行了比较分析。用7个引物分别对2个种群共222株球孢白僵菌菌株进行扩展,共得到58个清晰的扩增位点,其中多态位点56个,多态位点百分率（PPL）为96.55%,Nei＇s基因多样性（He）为0.2993,Shannon信息指数（I）为0.4593,种群间的基因分化系数（Gst）为0.1283,基因流Nm=3.3984;可以看出,2个种群间的基因流较小,遗传分化较大,为12.83%,这可能是由于人为选择和基因流障碍引起的;琅琊山白僵菌群体（PPL=96.55%,He=0.2781,I=0.4299）遗传多样性水平较高;麻姑山白僵菌群体（PPL=93.10%,He=0.2552,I=0.3825）遗传多样性水平较低。比较研究了采集自大别山原始林中球孢白僵菌菌株的遗传多样性（PPL=81.00%,He=0.3187,I=0.4782）,可见生态环境复杂的原始林中球孢白僵菌遗传多样性最高,天然次生林种群次之,人工纯林种群最小。利用Nei’s遗传距离构建琅琊山和麻姑山白僵菌个体间的遗传关系树状图,由UPGMA聚类分析可知,不同采集地的菌株聚为一类。     

球孢白僵菌蛋白酶成熟因子基因片段的克隆及其表达分析

通过mRNA差异显示技术,从蝉脱诱导培养的球孢白僵菌中分离获得了长度295 bp一种蛋白酶成熟因子的基因片段。该片段编码多肽序列与米曲霉的蛋白酶成熟因子编码氨基酸序列同源性较高,达94.44%。Realtime-PCR检测结果表明,蝉蜕诱导条件下该基因的表达量为对照的8倍左右。诱导下蛋白酶成熟因子的高效表达,表明其在白僵菌毒力相关重组菌株构建研究中可能具有重要的应用价值。